一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法技术

本发明专利技术涉及一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，该方法通过提取前皱胃的撕碎粒度，浸泡等处理方法使羔羊皱胃组织分散，细胞破坏，强化混合，再结合超声波协助提取方法显著提高了凝乳酶的提取率,大大缩短了提取时间，降低了凝乳酶制备的成本，为相关企业的羔羊胃提取物的规范化生产提供了技术支撑。同时，系统研究羔羊胃中凝乳酶的溶解性，选择了最佳的溶剂和提取pH值，为凝乳酶提取的放大生产提供了可靠，可行的方法。该方法得到的羔羊皱胃凝乳酶纯度高，生物活性强，而且提取方法简单可行，提取全程在低温环境下操作，更好的保留了羔羊胃凝乳酶的活性，获得的凝乳酶可应用于干酪生产中的用途。

【技术实现步骤摘要】
一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法
本专利技术涉及一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法。
技术介绍
凝乳酶(chymosin)，是新生哺乳动物胃黏膜以无活性的前体物—凝乳酶原形式分泌的一种具有催化凝乳作用的酸性蛋白酶，在胃液酸性环境中，凝乳酶原从N-端释放一部分肽段，形成不可逆的活性酶—凝乳酶。凝乳酶是干酪生产中主要的凝乳剂，具有高的凝乳活性和低的蛋白水解活性，特别适用于干酪的生产，其主要作用是分解乳中к-酪蛋白(к-casein)Phe105-Met106肽键，形成副-к-酪蛋白(Para-к-casein)和糖巨肽(glycomarcopeptide)，使酪蛋白胶粒失去稳定性，在Ca2+参与下使乳凝固，形成凝乳(Curd)；同时凝乳酶也参与干酪的成熟过程，对干酪质地和风味的形成有重要的作用。全世界许多干酪品种使用最广泛的凝乳酶是从小牛皱胃中提取的小牛皱胃酶，它具有良好的加工特性，并用其生产的干酪在风味，质地和产量方面都优于其它酶类。因此，人们就大量屠宰小牛获得小牛皱胃酶，以满足干酪生产的需要。随着干酪产量的增加，对凝乳酶的需求量不断增大，小牛皱胃酶供应短缺，价格上涨，而成年牛胃中皱胃酶的含量又较少，这就迫使科学家们千方百计地寻找小牛皱胃酶的代用品。目前干酪生产所用的凝乳酶大致可分为四大类动物凝乳酶，植物凝乳酶和微生物凝乳酶。动物凝乳酶是干酪生产中使用最早的一类酶，传统干酪生产中应用的凝乳酶是小牛皱胃酶。目前商品化凝乳酶的来源有动物，植物和微生物，但是植物和微生物来源的凝乳酶因为因凝乳时间长，所形成的凝乳较软，易产生苦味，因此选择牛凝乳酶的替代品非常困难。其他可提取凝乳酶的反刍动物有，，水牛，绵羊，山羊，骆驼，驯鹿等；也可从单胃动物如鸡，猪，兔，猴子胃中提取，还有从生长在大西洋和地中海中的甲壳动物Munida中提取。但是单胃动动物和提取的凝乳酶与植物和卫生来源凝乳酶相同，凝乳效果差，奶酪产品带苦味，影响口感。因此，幼小哺乳动物如绵羊和山羊是较好的凝乳酶来源。在地中海地区国家，生产干酪所用的凝乳酶都是从绵羊或山羊皱胃中提取的皱胃酶。其凝乳酶与胃蛋白酶的比率和小牛皱胃酶的相近，凝乳活性相同，用其生产的干酪还具有绵羊和山羊特有的感官特性，受到消费者的普遍欢迎。羔羊皱胃中含有大量的皱胃酶，具有很高的凝乳活性，因此羔羊皱胃酶可能是最适宜的代用品，这样不但可以缓解小牛皱胃酶的供应紧张，还可提高奶山羊业深加工产品的附加值，变废为宝，同时解决环境污染问题。其采用超声提取技术从生物组织中提取酶，卫生条件较好，可缩短提取时间从而避免由于提取时间较长导致的微生物污染而影响其品质，还可以提高酶的活性和提取率。但纯的皱胃酶经超声处理后，热稳定性降低，活性中心的氨基酸发生了改变使其活性部位失活，活性降低了近乎两倍。但在有外来蛋白质存在下，蛋白质的保护性作用可使皱胃酶的组成和结构不受超声的影响，有助于保存甚至提高酶活性。本专利技术为充分利用当地动物资源，以羔羊皱胃作为生产原料，实现资源充分利用，为了使变废为宝，研制了利用超声波辅助的方法提取羔羊皱胃凝乳酶，该方法适合工业大量生产，带动地方经济的可持续发展；对提高新疆的优势自然资源综合利用率，推动无公害特色农业生产发展，使农民增收，增加企业的经济效益，建设和谐社会，促进新农村建设等方面都具有极大的促进作用。
技术实现思路
本专利技术目的在于，提供一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，该方法通过提取前皱胃的撕碎粒度，浸泡等处理方法使羔羊皱胃组织分散，细胞破坏，强化混合，再结合超声波协助提取方法显著提高了凝乳酶的提取率，大大缩短了提取时间，降低了凝乳酶制备的成本，为相关企业的羔羊胃提取物的规范化生产提供了技术支撑。同时，系统研究羔羊胃中凝乳酶的溶解性，选择了最佳的溶剂和提取pH值，为凝乳酶提取的放大生产提供了可靠，可行的方法。该方法得到的羔羊皱胃凝乳酶纯度高，生物活性强，而且提取方法简单可行，提取全程在低温环境下操作，更好的保留了羔羊胃凝乳酶的活性，获得的凝乳酶可应用于干酪生产中的用途。本专利技术所述的一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，按下列步骤进行：a、选用羔羊，屠宰后取出皱胃，用预冷蒸馏水流水冲洗除去皱胃中的杂物，置于温度-20℃冰箱保存备用；b、将步骤a中清洗过的羔羊皱胃，剥除脂肪及结缔组织，切成150×150mm的正方形，在温度-80℃下冷冻12个小时，然后冷冻干燥，再用粉碎机粉碎成5-8mm的羊皱胃粉末状，置于-20℃冰箱保存备用；c、将步骤b中的羊皱胃粉末，温度4℃下加入石油醚，并机械搅拌进行脱脂，脱脂2次，加入20倍体积的蒸馏水，在温度18℃浸泡10-60min；d、将步骤c中所得到的浸泡液体用氯化钠调至终浓度为1-10％氯化钠溶液，用1moL/L的盐酸溶液调节pH值为5.6，并用超声波辅助搅拌提取，超声功率为200瓦，超声时间为20分钟，提取温度为15℃，得到羊皱胃提取液，采用制冷机对羊皱胃提取液进行冷却，保持提取液的稳定温度4℃；e、将步骤d所得提取液用1moL/L的盐酸溶液调节pH值为3.3，温度-4℃下进行活化，时间7小时；f、将步骤e中活化后的提取液用1moL/L的氢氧化钠溶液调节pH值为5.6，液浓缩、冷冻干燥，即得到羔羊皱胃凝乳酶，以干粉重量g为单位测定羔羊皱胃凝乳酶的产率，并进行酶活力测定。所述方法获得的羔羊皱胃凝乳酶在制备干酪生产中的用途。所述方法获得的羔羊皱胃凝乳酶在制备治疗慢性胃炎、腹胀以及腹泻的药物中的用途。所述方法获得的羔羊皱胃凝乳酶在制备食品中的用途。本专利技术所述的一种羔羊皱胃凝乳酶的分离方法。该方法通过优化羔羊皱胃撕碎程度，提取温度，pH值，料液比以及超声提取时间研究了羔羊皱胃凝乳酶的提取工艺。最终确定了最佳提取工艺参数及提取介质的性质：羔羊皱胃条撕碎宽度为7mm，提取前原料浸泡时间为30分钟，超声功率为200瓦，超声时间为20min，提取温度为15℃，氯化钠溶液的浓度为5％，料液比为(原料与氯化钠溶液比例m/v)1:18，提取液pH值为4.2-4.3，凝乳酶提取物活化时间为7个小时，在此最佳条件下凝乳酶的活力为3500(U/g)。本专利技术的优点是：现有的提取方法不能充分提取羔羊皱胃中的凝乳酶，由于其稳定性较低，提取时间过长，凝乳酶会部分失活，会影响凝乳酶的活力和微生物污染。从羊皱胃中充分的提取活性凝乳酶，保持活性，提高产率是一个非常重要的问题。超声波辅助，原料撕碎程度及提取前原料溶胀时间可以大大缩短了提取过程所需的时间，可导致羔羊皱胃组织分散，细胞破坏，强化混合，颗粒分离以及增加羔羊皱胃提取介质，并且。本专利技术的创新点是在传统的提取分离方法基础上，通过提取前皱胃的撕碎粒度，浸泡等处理方法使羔羊皱胃组织分散，细胞破坏，强化混合，再结合超声波协助提取方法显著提高了凝乳酶的提取率,大大缩短了提取时间，降低了凝乳酶制备的成本，为相关企业的羔羊胃提取物的规范化生产提供了技术支撑。同时，系统研究羔羊胃中凝乳酶的溶解性，选择了最佳的溶剂和提取pH值，为凝乳酶提取的放大生产提供了可靠，可行的方法。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，其特征在于按下列步骤进行：/na、选用羔羊，屠宰后取出皱胃，用预冷蒸馏水流水冲洗除去皱胃中的杂物，置于温度-20℃冰箱保存备用；/nb、将步骤a中清洗过的羔羊皱胃，剥除脂肪及结缔组织，切成150 x 150mm的正方形，在温度-80℃下冷冻12个小时，然后冷冻干燥，再用粉碎机粉碎成5-8mm的羊皱胃粉末状，置于-20℃冰箱保存备用；/nc、将步骤b中的羊皱胃粉末，温度4℃下加入石油醚，并机械搅拌进行脱脂，脱脂2次，加入20倍体积的蒸馏水，在温度18℃浸泡10-60min；/nd、将步骤c中所得到的浸泡液体用氯化钠调至终浓度为1-10%氯化钠溶液，用1moL/L的盐酸溶液调节pH值为5.6，并用超声波辅助搅拌提取，超声功率为200瓦，超声时间为20分钟，提取温度为15℃，得到羊皱胃提取液，采用制冷机对羊皱胃提取液进行冷却，保持提取液的稳定温度4℃；/ne、将步骤d所得提取液用1 moL/L的盐酸溶液调节pH值为3.3，温度-4℃下进行活化，时间7小时；/nf、将步骤e中活化后的提取液用1 moL/L的氢氧化钠溶液调节pH值为5.6，液浓缩、冷冻干燥，即得到羔羊皱胃凝乳酶，以干粉重量g为单位测定羔羊皱胃凝乳酶的产率，并进行酶活力测定。/n...

【技术特征摘要】
1.一种羔羊皱胃凝乳酶的提取分离方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、选用羔羊，屠宰后取出皱胃，用预冷蒸馏水流水冲洗除去皱胃中的杂物，置于温度-20℃冰箱保存备用；
b、将步骤a中清洗过的羔羊皱胃，剥除脂肪及结缔组织，切成150x150mm的正方形，在温度-80℃下冷冻12个小时，然后冷冻干燥，再用粉碎机粉碎成5-8mm的羊皱胃粉末状，置于-20℃冰箱保存备用；
c、将步骤b中的羊皱胃粉末，温度4℃下加入石油醚，并机械搅拌进行脱脂，脱脂2次，加入20倍体积的蒸馏水，在温度18℃浸泡10-60min；
d、将步骤c中所得到的浸泡液体用氯化钠调至终浓度为1-10%氯化钠溶液，用1moL/L的盐酸溶液调节pH值为5.6，并用超声波辅助搅拌提取，超声功率为200瓦，超声时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿布力米提·伊力，阿吉艾克拜尔·艾萨，赵新民，艾合米丁·外力，阿米娜·艾尔肯，高彦华，
申请(专利权)人：中国科学院新疆理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：新疆;65