含有特定β-乳球蛋白肽的配方物组成比例

一种包含乳清蛋白水解物的配方物，所述乳清蛋白水解物包含特定的β‑乳球蛋白衍生肽和益生菌，所述配方物用于诱导对乳蛋白的口服免疫耐受性，预防或治疗对乳蛋白的口服免疫不耐受，和/或降低对乳蛋白产生口服免疫不耐受的风险。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有特定β-乳球蛋白肽的配方物
本专利技术属于包含水解的牛乳蛋白的配方物领域，该配方物用于患有牛乳蛋白过敏症或有发生牛乳蛋白过敏症的风险的婴儿。
技术介绍
膳食蛋白暴露于胃肠道中的免疫系统。作为免疫系统的默认应答，人们对这些无害的食物蛋白产生了口服耐受性。口服免疫耐受性的产生在婴儿中是高度存在的，他们在生命早期通过暴露于膳食蛋白而暴露于许多无害蛋白。这种对无害蛋白的天然应答发生偏离，就会发生食物过敏。普遍认为，近几十年来，食物过敏症的患病率一直在增加，特别是在西方国家。在生命早期，牛乳过敏症是最主要的食物过敏症，目前2-5％的婴儿患有牛乳过敏症，并且更高比例的婴儿有发生过敏症的风险。对于患有牛乳蛋白过敏症的婴儿，市售的婴儿配方物包含深度水解的蛋白(深度蛋白水解物)，或者甚至仅包含游离氨基酸作为氮源。在这些配方物中，几乎不存在或不存在致敏性蛋白或肽。出生于父母一方或双方患有特应性疾病，或者有一个或多个兄弟姐妹患有特应性疾病的婴儿，对膳食蛋白过敏的风险较高。对于这一类，除了优选的母乳喂养外，还有商购可得的低致敏性配方物，其包含部分蛋白水解物(部分水解的蛋白)。这些部分水解的蛋白具有降低的致敏性。已证明这种方法能有效地预防存在于适应的配方物中的天然蛋白的致敏性。通常，蛋白的水解程度低于针对已患有过敏症的婴儿的深度水解的蛋白的水解程度。这些配方物的优点在于不仅通过预防蛋白的致敏性来降低发生过敏性应答的风险，而且还支持天然产生的对完整蛋白的口服免疫耐受性。其带来的优点在于以后可在膳食中引入天然蛋白，从而降低了过敏反应的风险。几十年来，已建议严格避开过敏原，以预防和管理过敏原敏感性。近几十年来，对完全避开食物过敏原的关注可能无意中导致了食物过敏症的增加。预防或治疗过敏症的更好方法是制定促进过敏原的口服耐受性诱导的策略，如口服免疫疗法，或以有利于诱导天然耐受性机制的形式呈递食物过敏原(Allen等人,2009,PediatrAllergImmunol20:415-422)。EP2044851公开了一种营养组合物，其含有水解度为15％至25％的部分水解的乳蛋白和50至1000ng的TGF-β/100ml，用于初期预防对膳食蛋白的过敏反应和预防幼小的哺乳动物中的特应性疾病的发展。EP0629350公开了非致敏性乳清蛋白水解物的用途，认为该水解物能够诱导对牛乳蛋白的耐受性。EP0827697公开了已被酶水解的乳清用于制备在易感哺乳动物中诱导对牛乳的口服耐受性的组合物的用途。所述乳清的致敏性蛋白的免疫学检测水平比未水解的乳清要低>＝100倍。WO00/42863公开了一种用于在有蛋白过敏症风险的婴儿中诱导蛋白耐受性的低致敏性组合物，其包含深度水解的非致敏性蛋白基质(basis)和/或游离氨基酸基质，所述组合物包含至少一种作为活性成分的致敏性蛋白的致耐受性肽。WO2011/151059公开了含有部分水解蛋白和非消化性低聚糖的婴儿营养物，其用于诱导对天然膳食蛋白的口服耐受性。WO2015/090347涉及已确定的能够诱导对牛乳、特别是β-乳球蛋白的耐受性的肽。WO2017/144730公开了在人类或动物中实现对乳蛋白过敏原(例如β-乳球蛋白)脱敏或诱导耐受性的策略，其包括配制和使用包含纯化的完整表达的乳蛋白，以及一种或多种纯化的来自所述完整乳蛋白的肽的组合物。WO2016/014572公开了使用合成的β-乳球蛋白肽和益生菌的特定混合物来产生口服免疫耐受性。然而，现有技术中的低致敏性组合物通常仅通过避免潜在的过敏原的存在——从而无法解决存在的问题——和/或通过需要存在特殊成分(如生长因子或者合成或纯化的肽)来提供其效果。此外，在现有技术中已确定的肽可能不适合在大范围人类群体中诱导口服免疫耐受性。因此，仍然需要一种包含特定的牛β-乳球蛋白水解物的营养物，所述牛β-乳球蛋白水解物含有特定的肽和进一步增强有发生食物过敏症风险或患有食物过敏症的受试者的口服免疫耐受性的组分，所述营养物对针对食物蛋白(特别是牛乳蛋白)的口服免疫耐受性诱导有改善的效果。因此，本专利技术所解决的技术问题是提供用于克服上述缺陷，特别是用于改善人类中对膳食蛋白的口服免疫耐受性的诱导的组合物、方法、用途和设备，所述人类特别是有发生食物过敏症的风险的人，特别是婴儿，以及特别是有发生牛乳蛋白过敏症的风险的婴儿。
技术实现思路
本专利技术人有助于相信在本领域中，预防或治疗过敏症的更好方法是制定促进过敏原的口服耐受性诱导的策略，如口服免疫疗法或以有利于诱导天然耐受性机制的形式呈递食物过敏原(Allen等人,2009,PediatrAllergImmunol20:415-422)。所有T细胞应答(包括诱导调节性T细胞(Tregs))的基础都由三个相互关联的过程组成：T细胞受体激活、共刺激和细胞因子信号传导。通过识别由抗原呈递细胞上的MHCII类分子所呈递的称为T细胞表位的特异性肽，可以促进CD4+T细胞上T细胞受体的激活。蛋白水解物中的T细胞表位的存在对于诱导牛乳特异性Treg至关重要。成熟的β-乳球蛋白(BLG)的氨基酸(AA)#13-48是特别令人感兴趣的，因为在预防性情况下，覆盖这一区域的合成肽能够显著降低牛乳过敏症小鼠模型中的急性过敏性皮肤应答。综合考虑，BLG中的这一区域似乎对乳清蛋白的耐受性发展很重要。研究人员——使用一种新方法发现，基于特定的部分水解的乳清的婴儿配方物含有特定的、确切的β-乳球蛋白(BLG)肽，该肽作为T细胞表位起作用，以支持在更广泛的人类受试者群体(例如具有不同的HLA-DRB1等位基因)范围内产生对牛乳蛋白的口服耐受性。这些特定的等位基因是最相关的，因为HLA-DR等位基因是MHCII类的主要同种型，并且在CD4+T细胞的选择和激活中起着核心作用。HLA-DR为包含HLA-DRA和HLA-DRB链的异二聚体分子。虽然HLA-DRA基因在人类中高度保守，但有多个HLA-DRB基因。其中，HLA-DRB1为多态性最高的基因，并且其表达量比其功能性旁系同源基因(paralogs)高5倍。首先，开发了一种新的液相色谱-质谱(LC-MS)方法，以鉴定有限的特定、确切的BLG衍生肽列表，这些BLG衍生肽以最高的发生率天然存在于含有乳清蛋白水解物的配方物中，集中于成熟牛BLG的AA#13-48区域。本专利技术人可在关注的这一区域中鉴定出总共13种具有最少9个氨基酸的BLG肽，其中6种在不同的生产批次中被一致地鉴定。其次，对配方物进行ProImmune抗原呈递试验和MHCII类结合算法，以鉴定相关的HLA-DRB1限制性肽。证实这些肽是由人类树突状细胞加工和呈递的。上述肽聚集在两个独特的序列组中，即DIQ…DIS(AA#11-30)和AMA…APL(AA#23-39)。据评估，BLG的经鉴定的两个独特序列组的片段与选择的HLA-DRB1等位基因具有高的结合亲和力。已发现，最优选BLG肽的混合物以确保覆盖与人类群体中常见的几个HLA-DRB1等位基因的相互作用。特别地，至少包含B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种营养组合物，其包含来自哺乳动物乳，优选来自牛属、野牛属、水牛属或山羊属的物种的乳，更优选来自牛属的物种的乳，优选来自牛乳的蛋白水解物，所述营养组合物用于在人类受试者中/n-诱导对乳蛋白的口服免疫耐受性；和/或/n-预防或治疗对乳蛋白的口服免疫不耐受；和/或/n-降低对乳蛋白产生口服免疫不耐受的风险，/n其中所述蛋白水解物包含：/n-至少一种具有SEQ ID NO:4的序列的肽；或/n-至少一种具有选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ IDNO:5的序列的肽，和至少一种产乳酸菌的菌株。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180430 NL PCT/NL2018/0502821.一种营养组合物，其包含来自哺乳动物乳，优选来自牛属、野牛属、水牛属或山羊属的物种的乳，更优选来自牛属的物种的乳，优选来自牛乳的蛋白水解物，所述营养组合物用于在人类受试者中
-诱导对乳蛋白的口服免疫耐受性；和/或
-预防或治疗对乳蛋白的口服免疫不耐受；和/或
-降低对乳蛋白产生口服免疫不耐受的风险，
其中所述蛋白水解物包含：
-至少一种具有SEQIDNO:4的序列的肽；或
-至少一种具有选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的序列的肽，和至少一种产乳酸菌的菌株。


2.根据权利要求1所述的用于所述用途的营养组合物，其中蛋白水解物包含：
(i)至少一种具有SEQIDNO:5的序列的肽和至少一种具有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:4，优选SEQIDNO:4的序列的肽；或
(ii)至少一种具有SEQIDNO:1或SEQIDNO:4，优选SEQIDNO:4的序列的肽和至少一种具有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3或SEQIDNO:5的序列的肽。


3.根据权利要求1或2所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述组合物每g总蛋白包含小于6μg致敏性β-乳球蛋白，优选小于3.5μg致敏性β-乳球蛋白。


4.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述组合物包含基于总蛋白计至少50重量％，优选至少95重量％的水解乳清蛋白。


5.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其包含基于总蛋白计小于10重量％，优选小于6重量％的大小为5kDa以上的肽或蛋白。


6.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中存在于组合物中的基于总蛋白计至少1重量％的肽或蛋白的大小为1kDa以上，优选至少5重量％，更优选至少10重量％，基于总蛋白计。


7.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述组合物每g总蛋白包含大于0.8μg的致敏性β-乳球蛋白。


8.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述乳蛋白来自牛属、野牛属、水牛属或山羊属的物种，更优选来自牛属的物种，优选牛乳蛋白。


9.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述人类受试者为婴儿。


10.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述人类受试者有产生乳的乳蛋白过敏症的风险或患有乳的乳蛋白过敏症，所述乳来自牛属、野牛属、水牛属或山羊属的物种，更优选来自牛属的物种，并且其中所述人类受试者优选为婴儿。


11.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述组合物包含产乳酸菌的菌株。


12.根据权利要求11所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述产乳酸菌的菌株属于双歧杆菌属，优选属于短双岐杆菌物种。


13.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其包含一种或多种选自以下的非消化性低聚糖：低聚果糖、非消化性糊精、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳糖、低聚葡萄糖、低聚葡甘露糖、低聚半乳甘露糖、低聚甘露糖、壳低聚糖、糖醛酸低聚糖、唾液酸低聚糖和低聚岩藻糖及其混合物，优选低聚果糖。


14.根据权利要求13所述的用于所述用途的营养组合物，其中所述非消化性低聚糖包含至少两种选自低聚果糖和低聚半乳糖的非消化性低聚糖，优选长链低聚果糖与短链低聚果糖或短链低聚半乳糖的混合物。


15.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其每g干重包含105至1011cfu的产乳酸菌的菌株，以及任选地基于干重计至少2重量％的非消化性低聚糖。


16.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其包含长链多不饱和脂肪酸，优选二十二碳六烯酸(DHA)，更优选至少0.35重量％的DHA，基于总脂肪酸计。


17.根据前述权利要求中任一项所述的用于所述用途的营养组合物，其为婴儿配方物、后续配方物或幼儿配方物。


18.一种营养组合物，其包含：
a.属于双歧杆菌属的产乳酸菌的菌株；
b.来自牛属、野牛属、水牛属或山羊属的物种，...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·W·格武，L·A·P·M·马龙博克，J·周，L·M·J·尼普斯，J·加森，
申请(专利权)人：N·V·努特里奇亚，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL