茜草环肽化合物及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种茜草环肽化合物及其制备方法。该茜草环肽化合物的制备方法为：以茜草科茜草属植物丫野还的茎和/叶为原料，获取其提取物，所得提取物经大孔树脂柱、硅胶柱、高速逆流色谱仪分离纯化，即得。申请人的试验结果表明该化合物与冠状病毒靶点(S蛋白、3CL蛋白、DC‑SIGN受体蛋白、ACE2受体蛋白)、艾滋病毒靶点(HIV‑1蛋白)以及乙肝病毒靶点(Bcl‑2、Bcl‑xL)均有较强的结合能力，对新型冠状病毒、艾滋病病毒和乙型肝炎病毒具有潜在药用价值，有望用于抗冠状病毒药物和/或抗艾滋病病毒和/或抗乙型肝炎病毒药物的制备。

【技术实现步骤摘要】
茜草环肽化合物及其制备方法
本专利技术涉及从植物中提取分离的活性成分，具体涉及茜草科茜草属植物丫野还中提取的茜草环肽化合物及其制备方法。
技术介绍
环肽是一类主要由氨基酸以肽键连接形成的环状化合物。环肽这种大环分子具有明确的固定构象，能够与受体很好地契合，加上分子内不存在游离的氨端和羧端使得对氨肽酶和羧肽酶的敏感性大大降低。通常情况下，环肽的代谢稳定性和生物利用度远远高于直链肽。目前，在自然界发现的环肽化合物约有500种，很多环肽具有良好的生物活性。茜草科类型环肽(茜草环肽)是从茜草中发现的一类双环或单环环己肽，目前，已发现的茜草科类型环肽化合物约40种，包括单糖苷配糖体、二聚体等，如YayehuaninA、RA-V、RA-II、RA-VII、RA-I、RA-III、RA-X、RA-XI、RA-XII、RA-XVI、RY-II等。茜草科类型环肽对炎性疾病、免疫疾病和肿瘤疾病、疱疹病毒有良好的生物活性，有较高的医药应用价值。具有代表性的如下：公开号为CN104829696A的专利技术专利公开了茜草科类型环肽化合物rubicordilinA、rubicordilinB和rubicordilinC在制备治疗NF-κB信号通路异常激活的相关炎症和癌症的药物中的应用。公开号为CN109134618A的专利技术专利，公开了一种从茜草属植物丫野还(Rubiahangii)中提取分离得到的茜草环肽二糖苷丫野还宁甲(YayehuaninA)，发现该化合物能够用于制备治疗或预防NF-κB信号通路异常激活的相关炎症疾病、免疫疾病和癌症的药物。公开号为CN103877562A的专利技术专利公开了茜草科类型环肽化合物RA-Ⅴ、RA-Ⅰ、RA-Ⅶ、RA-Ⅻ等在制备Hedgehog信号通路异常激活的相关癌症的药物中的应用。公开号为CN101921319A的专利技术专利公开了茜草科类型环肽化合物RA-Ⅴ、RA-Ⅰ、RA-XXⅣ、RA-Ⅻ等在制备治疗单纯疱疹病毒Ⅰ型相关疾病的药物中的应用。目前尚未见有茜草属植物中的茜草环肽化合物可用于潜在的防治冠状病毒疾病药物、防治艾滋病药物、防治乙型肝炎药物的相关报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种结构新颖的茜草环肽化合物及其制备方法。本专利技术所述的茜草环肽化合物为具有下述式(I)所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：上述式(I)所示结构的化合物的分子式为C52H68N6O21，精确分子量1112.4438，HRESIMS[M-H]-1111.4423，[M+H]+1113.4534，平均分子量1113.1。理化性质如下：白色无定型粉末，溶于甲醇、乙醇、吡啶，水，难溶于环己烷、石油醚。本申请中命名为丫野还宁乙(YayehuaninB)，在本申请中也称为化合物1。上述式(I)所示结构的化合物的制备方法，主要包括以下步骤：1)以茜草科茜草属植物丫野还(Rubiahangii)的茎和/叶为原料，获取其提取物；2)所得提取物过大孔树脂柱，用体积比为0：100～100：0的低碳醇/水梯度洗脱，收集体积比为90：10～100：0的低碳醇/水洗脱部位，回收溶剂，得到纯化物A；3)所得纯化物A上硅胶柱，用体积比为100：0～0：100的氯仿/甲醇梯度洗脱，收集体积比为80：20的氯仿/甲醇洗脱部位，回收溶剂，得到纯化物B；4)所得纯化物B上高速逆流色谱仪进行分离，分段收集流分，检识(以UPLC-MS检识)并合并流分，回收溶剂，得到式(I)所示结构的化合物；其中，进行高速逆流色谱分离时的固定相和流动相为水与选自以下有机溶剂中的一种或两种以上的选择组成的、对茜草型环肽化合物分配系数在0.2～10之间的两相体系：酯类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂、醚类溶剂、卤代烃类溶剂、烷烃类溶剂、腈类溶剂、酸类溶剂。上述制备方法的步骤1)中，通常是以水和/或低碳醇为溶媒对茜草科茜草属植物丫野还的枝和/或叶进行提取，以获取丫野还的提取物；其中所述丫野还的枝和/或叶可以是新鲜的或干燥的。所述的低碳醇具体可以是甲醇和/或乙醇。甲醇和乙醇的浓度均可以是10～100v/v％，优选为50～100v/v％。在提取时的操作(如提取的方式、提取的次数、每次提取的时间)等均与现有相同，优选采用加热提取或回流提取。提取所得的提取液经浓缩除去溶媒后得到的浸膏即为丫野还的提取物。为了减轻后续大孔树脂的负担，优选是对步骤1)所得提取物进行萃取除杂后再上大孔树脂柱进行富集。所述的萃取操作具体是将提取物用石油醚或正己烷萃取萃取，以除去提取物中的叶绿素、甾醇等杂质。上述制备方法的步骤2)中，所述的大孔树脂为能吸附分离茜草环肽的药用级大孔吸附树脂，优选的型号为AmberliteXAD16、X-5、AB-8或DA101等。在对大孔树脂柱进行洗脱时，优选是收集体积比为100：0的低碳醇/水洗脱部位。该步骤中所述的低碳醇可以是甲醇或乙醇。在用低碳醇/水混合溶剂对树脂柱进行洗脱之前，优选先用水洗柱以除去一些水溶性杂质。上述制备方法的步骤4)中，在进行高速逆流色谱分离时的固定相和流动相的溶剂中，所述的酯类溶剂优选为选自醋酸乙酯、醋酸丁酯和醋酸戊酯中的一种或两种以上的组合；所述的醇类溶剂优选为选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、正戊醇和2-戊醇中的一种或两种以上的组合；所述的酮类溶剂优选为选自丙酮、丁酮、环戊酮、甲基异丁酮和环己酮中的一种或两种以上的组合；所述的醚类溶剂优选为选自乙醚、甲基叔丁基醚、二氧六环、四氢呋喃中的一种或两种以上的组合；所述的卤代烃类溶剂优选为选自二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳中的一种或两种以上的组合；所述的烷烃类溶剂优选为选自正己烷、正庚烷、异辛烷、石油醚(包括沸程30～60℃的石油醚和沸程为60～90℃的石油醚)、汽油中的一种或两种以上的组合；所述的腈类溶剂优选为乙腈；所述的酸类溶剂优选为选自甲酸和/或乙酸。上述制备方法的步骤4)中，由于高速逆流色谱两相溶剂体系的配比与两相比例相关，因此两相溶剂的总组成比例可根据上下两相的比例做出改变，而不影响上相的组成或者下相的组成，不影响两相溶剂的分配系数。本申请人的试验结果表明，进行高速逆流色谱分离时的固定相和流动相优选选择为乙酸乙酯-醇-水组成的两相体系，其中醇为选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、正戊醇和2-戊醇中的一种或两种以上的组合。更优选其中的醇为正丁醇，此时，所述乙酸乙酯、正丁醇和水的体积比优选为3：1：4。上述制备方法的步骤4)中，进行高速逆流色谱分离的溶剂体系，可以是上相为固定相，下相为流动相；也可以是下相为固定相，上相为流动相。在进行高速逆流色谱仪分离时，温度通常为10～35℃，主机为正转，也可为反转，转速优选为750～900rpm，流速优选为0.5～15.0mL/min。高速逆流色谱取待分离样品的准备、上样、分段收集流分等操作均与现有技术相同。优选如下：高速逆流色谱取待分离样品的准备：取步骤3)所得纯化物B干品，称重，取上相溶液或下相溶液，或上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.下述式(I)所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：/n

【技术特征摘要】
1.下述式(I)所示结构的化合物或其药学上可接受的盐：





2.权利要求1所述化合物的制备方法，主要包括以下步骤：
1)以茜草科茜草属植物丫野还的茎和/叶为原料，获取其提取物；
2)所得提取物过大孔树脂柱，用体积比为0：100～100：0的低碳醇/水梯度洗脱，收集体积比为90：10～100：0的低碳醇/水洗脱部位，回收溶剂，得到纯化物A；
3)所得纯化物A上硅胶柱，用体积比为100：0～0：100的氯仿/甲醇梯度洗脱，收集体积比为80：20的氯仿/甲醇洗脱部位，回收溶剂，得到纯化物B；
4)所得纯化物B上高速逆流色谱仪进行分离，分段收集流分，检识并合并流分，回收溶剂，得到式(I)所示结构的化合物；其中，
进行高速逆流色谱分离时的固定相和流动相为水与选自以下有机溶剂中的一种或两种以上的选择组成的、对茜草型环肽化合物分配系数在0.2～10之间的两相体系：
酯类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂、醚类溶剂、卤代烃类溶剂、烷烃类溶剂、腈类溶剂、酸类溶剂。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤1)中，以茜草科茜草属植物丫野还的茎和/叶为原料，以水和/或低碳醇为溶媒进行提取，获取丫野还的提取物。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述的低碳醇为甲醇和/或乙醇。


5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是，步骤2)中，所述大孔吸附树脂的型号为Amberli...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢运昌，蔡爱华，霍华珍，李典鹏，
申请(专利权)人：广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45