检测兹卡病毒的引物对、试剂盒及方法技术

一种检测兹卡病毒的引物对、试剂盒及方法，引物对具有正向引物及反向引物，试剂盒具有引物对及探针。检测方法包括利用正向引物、反向引物、及探针进行实时逆转录聚合酶链锁反应来扩增兹卡病毒的核酸分子。正向引物包含如SEQ ID NO:1所示的序列，反向引物包含如SEQ ID NO:2所示的序列，探针包含如SEQ ID NO:3所示的序列。

【技术实现步骤摘要】
检测兹卡病毒的引物对、试剂盒及方法
本案系关于一种检测黄病毒(Flavivirus)的引物对、试剂盒及方法，尤指一种检测兹卡病毒(Zikavirus)的引物对、试剂盒及方法。【现有技术】兹卡病毒是一种经由蚊子传播的黄病毒，于1947年在乌干达首次于猴子中发现，之后于1952年在乌干达和坦桑尼亚联合共和国于人类中发现。此病毒经由携带病毒的斑蚊(Aedesmosquitoes)的叮咬而在人与人之间传播。在2015年之前，兹卡病毒爆发通常发生在非洲，东南亚及太平洋岛屿。然而，由于全球化现象，2015年3月发生了最严重的疫情，从巴西开始爆发，不久便蔓延到了美洲、非洲、亚洲和欧洲。此疾病的症状从无症状到轻度症状，例如发烧、皮疹、头痛、关节痛、以及结膜炎和肌肉痛。通常，轻度症状会持续几天到一周，且感染者甚至可能没有意识到自己已被感染。然而，根据最近的发现，兹卡病毒感染可引起神经系统疾病，例如格林-巴利症候群(Guillain-Barrésyndrome)，以及称为先天性兹卡症候群(congenitalZikasyndrome)的严重先天性缺陷，其在感染母亲的新生儿中，最明显的症状就是会有严重的小头畸形。目前常用于兹卡病毒诊断的两种技术为血清学检测和实时逆转录聚合酶链锁反应(real-timereversetranscriptionpolymerasechainreaction，real-timeRT-PCR)，这些技术分别通过对兹卡病毒具特异性的抗体检测以及病毒RNA检测来确认兹卡病毒的感染。血清学检测虽然可以在10分钟到几小时内提供确定结果，但此方法涉及检测病人血清中的IgM抗体，而这种抗体仅在临床症状(例如发烧)出现几天后才出现。另外，由于会有其他虫媒病毒与IgM发生交叉反应而产生假阳性的可能性(特别是如果病人先前有其他黄病毒的感染史)，使得血清学检测的特异性仍受到质疑。实时逆转录聚合酶链锁反应是一种较新的诊断法，可解决上述方法的缺点。由于具有较高的灵敏度，实时逆转录聚合酶链锁反应可以更快速地检测兹卡病毒基因组，即使在感染初期也是如此，且由于具有较高的特异性，假阳性的可能性也较低。尽管近年来兹卡病毒检测的灵敏度和特异性已经提高了，但是现行的实时逆转录聚合酶链锁反应检测所提供的速度仍然不足，因为典型的逆转录聚合酶链锁反应处理时间几乎为一个半小时。因此，目前仍迫切需要提供一种实时就地照护(Point-of-Care，POC)诊断方法，以灵敏且特异地检测兹卡病毒，且提供较快的处理时间。
技术实现思路
本案之一实施例的目的在于提供一种用以检测兹卡病毒的引物对，其具高灵敏度、高特异性、以及缩短的反应时间。本案之一实施例的另一目的在于提供一种用以检测兹卡病毒的试剂盒，其具高灵敏度、高特异性、以及缩短的反应时间。本案之一实施例的又一目的在于提供一种用以检测兹卡病毒的方法，其具高灵敏度、高特异性、以及缩短的反应时间。为达上述目的，本案之一实施例提供一种用以检测兹卡病毒的引物对，包括一正向引物及一反向引物，其中正向引物包含如SEQIDNO:1所示的序列，且反向引物包含如SEQIDNO:2所示的序列。承上，正向引物及反向引物系用于实时逆转录聚合酶链锁反应。又，本案之一另实施例为提供一种用以检测兹卡病毒的试剂盒，包括一正向引物、一反向引物、及一探针，其中正向引物包含如SEQIDNO:1所示的序列，且反向引物包含如SEQIDNO:2所示的序列。承上，探针包含如SEQIDNO:3所示的序列。抑或是，探针包含SEQIDNO:3的互补序列。承上，探针的5’端接上报导染剂，且3’端接上淬灭体。承上，正向引物、反向引物、及探针系用于实时逆转录聚合酶链锁反应。又，本案之另一实施例为提供一种用以检测兹卡病毒的方法，包括利用一正向引物、一反向引物、及一探针进行实时逆转录聚合酶链锁反应来扩增兹卡病毒的核酸分子，其中正向引物包含如SEQIDNO:1所示的序列，且反向引物包含如SEQIDNO:2所示的序列。承上，探针包含如SEQIDNO:3所示的序列。抑或是，探针包含SEQIDNO:3的互补序列。承上，探针的5’端接上报导染剂，且3’端接上淬灭体。承上，兹卡病毒的核酸分子为RNA。承上，检测兹卡病毒的方法更包括下列子步骤：将兹卡病毒的一基因组RNA逆转录成一互补DNA；以及利用正向引物、反向引物、及探针进行实时聚合酶链锁反应对互补DNA进行扩增及检测。可预期的是，本文描述的方法或组合物的任何实施例可以本文描述的其他方法或组合物来实施。当用语「一」在申请专利范围及/或说明书中与用语「包括/包含」结合使用时，可能表示「一」，但也与「一或更多」、「至少一」、及「一或大于一」的含义一致。在申请专利范围中的用语「或」意指「及/或」，除非明确指出仅指替代方案或替代方案是互斥的，即使揭露内容支持仅指替代方案与「及/或」的定义。藉由以下详细说明，本专利技术的其他目的、特征及优点将变得显而易见。然应理解的是，尽管详细说明及特定范例指出本专利技术的特定实施例，但这些特定实施仅为说明例示之用，因为通过此详细说明，在本专利技术的精神和范围内的各种变化及修饰对于熟悉本技艺人士而言是显而易见的。【附图说明】图1显示包膜基因的部分序列，以及正向引物、反向引物及探针于包膜基因序列上的结合位置。图2显示正向引物、反向引物及探针的DNA序列。图3显示快速循环模式下实时逆转录聚合酶链锁反应的温度曲线。图4显示特异性分析的结果。图5显示估算检测限(LoD)的S形曲线。图6显示从不同拷贝数的兹卡RNA所产生的扩增曲线。图7显示由图6结果产生的兹卡分析标准曲线。【实施方式】体现本案特征与优点的一些实施例将在后段的说明中详细叙述。应理解的是本案能够在不同的态样上具有各种的变化，其皆不脱离本案的范围，且其中的说明及图式在本质上为说明之用，而非用以限制本案。本案之一实施例系利用实时逆转录聚合酶链锁反应(real-timereversetranscriptionpolymerasechainreaction，简称real-timeRT-PCR)，又称定量逆转录聚合酶链锁反应(quantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction，简称qRT-PCR)，配合探针检测系统(probe-baseddetection)来对人类的兹卡病毒感染进行快速、灵敏及特异的诊断。实时逆转录聚合酶链锁反应(real-timeRT-PCR)主要包括两个步骤，第一个步骤乃将兹卡病毒基因组RNA(viralgenomicRNA)逆转录成互补DNA(complementaryDNA，cDNA)，接着于第二个步骤利用实时聚合酶链锁反应(real-timepolymerasechainreaction，real-timePCR)配合引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用以检测兹卡病毒的引物对，包括一正向引物及一反向引物，其中该正向引物包含如SEQ ID NO:1所示的序列，且该反向引物包含如SEQ ID NO:2所示的序列。/n

【技术特征摘要】
20190619 SG 10201905641Y1.一种用以检测兹卡病毒的引物对，包括一正向引物及一反向引物，其中该正向引物包含如SEQIDNO:1所示的序列，且该反向引物包含如SEQIDNO:2所示的序列。


2.如权利要求1所述的引物对，其中该正向引物及该反向引物系用于实时逆转录聚合酶链锁反应。


3.一种用以检测兹卡病毒的试剂盒，包括一正向引物、一反向引物、及一探针，其中该正向引物包含如SEQIDNO:1所示的序列，且该反向引物包含如SEQIDNO:2所示的序列。


4.如权利要求3所述的试剂盒，其中该探针包含如SEQIDNO:3所示的序列。


5.如权利要求3所述的试剂盒，其中该探针包含SEQIDNO:3的互补序列。


6.如权利要求3所述的试剂盒，其中该探针的5’端接上报导染剂，且3’端接上淬灭体。


7.如权利要求3所述的试剂盒，其中该正向...

【专利技术属性】
技术研发人员：林猷斌，张微石，
申请(专利权)人：台达电子国际新加坡私人有限公司，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG