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【技术实现步骤摘要】
【】本申请系关于一种样本前处理试剂盒(sample pretreatment kit) 及方法,尤指一种检测病毒感染性的样本前处理试剂盒及方法。
技术介绍
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技术介绍
1、从近年来的资料看,全球地区包括中国、东南亚、欧洲和美 国,呼吸道传染性疾病的新发率高居各疾病之首。这种疾病一般都是因为多种微 生物经过人体的鼻腔、咽喉、气管等各种呼吸器官到达人体之内,进而引发相关 的感染性疾病。呼吸道传染疾病具有非常迅速的传播速度,而且传播范围相对更 广,对人类健康造成很大的影响,所以这种疾病一旦发生就很难控制,是一种 具有十分严重的危害性的传染性疾病。新型冠状病毒(covid-19)肺炎就 是这样一种传染性极强、死亡率较高的疾病,目前全球几乎无一地区幸免,大量感染的人数造成医疗资源的挤兑,对整个国家就是一场巨大的灾难。因此,必 须做好对呼吸道传染性疾病的预防和控制工作,而疾病的早期诊断又是预防工 作的重中之重。
2、目前临床上,呼吸道传染性疾病的诊断不仅要根据临床症状及体 征,还需要通过实验室检测来最终确认。在早期,病毒的检测主要采用分离培养 法,但该方法周期较长,实验条件苛刻,例如对covid-19这样的病毒需要在bsl level(p3)等级以上实验室才能展开,且操作复杂。
3、以covid-19为例,临床上另一类方法是基于血清为样本,基于 免疫法原理实施的抗体检测。但是因为抗体检测是人体感染新冠病毒之后的血 清学免疫反应,首先出现的是免疫球蛋白igm抗体,约在5~7天产生;然后出现 igg抗体
4、who曾经表示,染上covid-19又宣告康复的患者,之后采检仍 呈阳性反应,有可能是因为体内仍在排除死亡的肺部细胞,而非再度感染。由于 肺部在康复过程中,有些死亡细胞的部分会冒出来,就是这些肺部碎片造成检测 仍呈阳性反应,但这不是会传染的病毒,也不是复发,这实际上是病愈过程的一 环。鉴于pcr方法自身的原理,扩增检测的是病原体的核酸(rna),而不是病 毒本身,所以无法区分死或活的病毒,或该病毒是否具有感染性,所以即使在康 复患者体内,仍可能检测到死的病毒即rna片段,而这些康复患者本身并无传 染力,由此方法得到的检测阳性结果会导致该康复患者被再次隔离,对该患者本 身造成极大的心理压力外,也会增加社会负担。因此,一种能够区分临床样本的 病毒是否具有感染性的pcr检测方法显得意义重大。
技术实现思路
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技术实现思路
1、本申请实施例的目的在于提供一种检测病毒感染性的样本前处 理试剂盒及方法,以区分临床样本的病毒是否具有感染性,从而为病毒感染患者 的管理及治疗提供临床诊断资讯。
2、为达上述目的,本申请实施例提供一种检测病毒感染性的样本前 处理试剂盒,包括与核酸结合的光敏染料(photoactivatable dye),以及用于降 解核酸的核酸酶。
3、在一实施例中,光敏染料包含迭氮溴化丙锭(propidium monoazide,pma)染料、pmaxx染料、单迭氮化乙锭(ethidium monoazide,ema)、 铂化合物、或钯化合物,其中pma染料或pmaxx染料的反应终浓度范围为100~ 2000μm。
4、在一实施例中,核酸酶为核糖核酸酶(rnase),且其反应终浓 度范围为0.1~100ng/μl。
5、为达上述目的,本申请实施例更提供一种检测病毒感染性的方 法,包括下列步骤:(a)将临床样本分为待检样本及对照样本;(b)以光敏染料及 核酸酶预处理待检样本;(c)将待检样本暴露于光下以进行光活化;(d)扩增待检 样本及对照样本中的靶核酸;以及(e)根据待检样本及对照样本的扩增结果判定 病毒感染性。
6、在一实施例中,光敏染料包含迭氮溴化丙锭(pma)染料、pmaxx 染料、单迭氮化乙锭(ema)、铂化合物、或钯化合物,其中pma染料或pmaxx 染料的反应终浓度范围为100~2000μm。
7、在一实施例中,核酸酶为核糖核酸酶(rnase),且其反应终浓 度范围为0.1~100ng/μl。
8、在一实施例中,光活化时间为2~20分钟。
9、在一实施例中,靶核酸为rna,且靶核酸是用至少一对引物将其 逆转录并扩增。
10、在一实施例中,在步骤(d)之核酸扩增前,更包括对待检样本及对 照样本进行核酸提取的步骤。
11、在一实施例中,步骤(e)判定病毒感染性的标准为:待检样本cq值 相比对照样本cq值有变大且有显著性差异时,或待检样本无典型扩增曲线且无 cq值时,即判定临床样本中无感染性病毒。
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1.一种检测病毒感染性的样本前处理试剂盒,包括与核酸结合的一光敏染料,以及用于降解核酸的一核酸酶,其中,该光敏染料包含迭氮溴化丙锭(PMA)染料、PMAxx染料、单迭氮化乙锭(EMA)、铂化合物、或钯化合物。
2.如权利要求1所述的样本前处理试剂盒,其中该PMA染料或PMAxx染料的反应终浓度范围为100~2000μM。
3.如权利要求1所述的样本前处理试剂盒,其中该核酸酶为核糖核酸酶(RNase)。
4.如权利要求3所述的样本前处理试剂盒,其中该核糖核酸酶的反应终浓度范围为0.1~100ng/μl。
5.一种检测病毒感染性的方法,包括下列步骤:
6.如权利要求5所述的检测病毒感染性的方法,其中该PMA染料或PMAxx染料的反应终浓度范围为100~2000μM。
7.如权利要求5所述的检测病毒感染性的方法,其中该核酸酶为核糖核酸酶(RNase)。
8.如权利要求7所述的检测病毒感染性的方法,其中该核糖核酸酶的反应终浓度范围为0.1~100ng/μl。
9.如权利要求5所述的检测病毒感染
10.如权利要求5所述的检测病毒感染性的方法,其中该靶核酸为RNA,且该靶核酸是用至少一对引物将其逆转录并扩增。
11.如权利要求5所述的检测病毒感染性的方法,其中在步骤(d)之核酸扩增前,更包括对该待检样本及该对照样本进行核酸提取的步骤。
12.如权利要求5所述的检测病毒感染性的方法,其中步骤(e)判定病毒感染性的标准为:该待检样本Cq值相比该对照样本Cq值有变大且有显著性差异时,或该待检样本无典型扩增曲线且无Cq值时,即判定该临床样本中无感染性病毒。
...【技术特征摘要】
1.一种检测病毒感染性的样本前处理试剂盒,包括与核酸结合的一光敏染料,以及用于降解核酸的一核酸酶,其中,该光敏染料包含迭氮溴化丙锭(pma)染料、pmaxx染料、单迭氮化乙锭(ema)、铂化合物、或钯化合物。
2.如权利要求1所述的样本前处理试剂盒,其中该pma染料或pmaxx染料的反应终浓度范围为100~2000μm。
3.如权利要求1所述的样本前处理试剂盒,其中该核酸酶为核糖核酸酶(rnase)。
4.如权利要求3所述的样本前处理试剂盒,其中该核糖核酸酶的反应终浓度范围为0.1~100ng/μl。
5.一种检测病毒感染性的方法,包括下列步骤:
6.如权利要求5所述的检测病毒感染性的方法,其中该pma染料或pmaxx染料的反应终浓度范围为100~2000μm。
7.如权利要求5所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员:张勇,倪嘉慧,龙全科,蔡昆男,张微石,李娇娇,赵小智,
申请(专利权)人:台达电子国际新加坡私人有限公司,
类型:发明
国别省市:
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