用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组、试剂盒、方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组、试剂盒、方法和应用，涉及病毒核酸检测技术领域，本发明专利技术为区分非洲猪瘟病毒野毒株和缺失型疫苗株，提供了用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组，包括用于检测VP72基因的引物、用于检测MGF360‑14L基因的引物和用于检测CD2V基因的引物。本发明专利技术提供的引物组相互无干扰，扩增得到的结果具有准确可靠、灵敏度高、重复性好、能同一检测体系鉴定出非洲猪瘟野毒株和基因缺失型疫苗株等优点，进而准确有效地判断猪群是感染了非洲猪瘟野毒株还是接种了非洲猪瘟基因缺失型疫苗，极大程度的减少了养殖户的损失。

【技术实现步骤摘要】
用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组、试剂盒、方法和应用
本专利技术涉及病毒核酸检测
，尤其是涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组、试剂盒、方法和应用。
技术介绍
非洲猪瘟(AfricanSwinefever，ASF)是一种急性、烈性、高度接触性传染病，发病和死亡率可达100％，在我国被列为一类动物疫病。2018年8月3日在我国确诊了国内首例非洲猪瘟疫情，并很快蔓延至全国大部分地区，给养猪行业造成了严重威胁，与此同时引发该疫情的非洲猪瘟病毒(AfricanSwinefevervirus，ASFV)在国内被大家所熟知。非洲猪瘟病毒是非洲猪瘟病毒科的唯一成员，也是唯一虫媒DNA病毒，基因组全长170-190kb，含有151个开放阅读框，可编码150-200种蛋白。非洲猪瘟病毒可分为24个基因型，此次在我国发现的非洲猪瘟病毒属于基因Ⅱ型。2019年10月18日由中国科学院生物物理研究所饶子和院士团队、王祥喜团队和中国农业科学院哈尔滨兽医研究所步志高团队联合在《Science》上发表论文，揭示了非洲猪瘟本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组，其特征在于，包括用于检测VP72基因的引物、用于检测MGF360-14L基因的引物和用于检测CD2V基因的引物：/n所述用于检测VP72基因的引物具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2具有至少85％同一性的核苷酸序列；/n所述用于检测MGF360-14L基因的引物具有如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.4和/或SEQ ID NO.5具有至少85％同一性的核苷酸序列；/n所述用于检测CD2V基因的引物具...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的引物组，其特征在于，包括用于检测VP72基因的引物、用于检测MGF360-14L基因的引物和用于检测CD2V基因的引物：
所述用于检测VP72基因的引物具有如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.1和/或SEQIDNO.2具有至少85％同一性的核苷酸序列；
所述用于检测MGF360-14L基因的引物具有如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.4和/或SEQIDNO.5具有至少85％同一性的核苷酸序列；
所述用于检测CD2V基因的引物具有如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.7和/或SEQIDNO.8具有至少85％同一性的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述引物组还包括用于检测VP72基因的探针、用于检测MGF360-14L基因的探针和用于检测CD2V基因的探针；
所述用于检测VP72基因的探针具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.3具有至少85％同一性的核苷酸序列；
所述用于检测MGF360-14L基因的探针具有如SEQIDNO.6所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.6具有至少85％同一性的核苷酸序列；
所述用于检测CD2V基因的探针具有如SEQIDNO.9所示的核苷酸序列，或与SEQIDNO.9具有至少85％同一性的核苷酸序列。


3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于，用于检测VP72基因的探针、用于检测MGF360-14L基因的探针和用于检测CD2V基因的探针的两端均独立地分别含有荧光淬灭基团和互不相同的荧光报告基团；
优选地，所述荧光报告基团包括FAM、HEX或ROX；用于检测VP72基因的探针优选含有FAM，用于检测MGF360-14L基因的探针优选含有HEX，用于检测CD2V基因的探针优选含有ROX；
优选地，所述荧光淬灭基团包括BHQ1或BHQ2。


4.一种用于检测非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的引物组。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和/或阴性对照品。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品包括含有部分或全部VP72基因的质粒、含有部分或全部MGF360-14L基因的质粒和含有部分或全部CD2V基因的质粒；
优选地，所述阴性对照品包括用于稀释阳性对照品的溶液，优选为TE溶液。


7.一种用于检测非洲猪瘟...

【专利技术属性】
技术研发人员：田星，陈芝娟，王虹军，贺贤汉，
申请(专利权)人：杭州博日科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33