细胞组合物及治疗方法技术

本公开涉及经修饰以引入核酸或表达所述核酸的载体的细胞组合物。此类组合物可用于将核酸递送至靶细胞并治疗疾病诸如癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞组合物及治疗方法专利
本公开涉及经修饰以引入核酸或表达所述核酸的载体的细胞组合物。此类组合物可用于将核酸递送至靶细胞并治疗疾病诸如癌症。专利技术背景已经表明，单链或双链或两者都有的核酸可以通过由经修饰以表达连接蛋白的HeLa细胞对中的连接蛋白形成的缝隙连接。通过将荧光标记的寡核苷酸单电极递送到供体细胞并通过缝隙连接介导的通讯确定它们转移到靶细胞而证明了转移。需要改进的向靶细胞递送核酸的方法。专利技术概述本专利技术人已鉴定了间充质谱系前体或干细胞能够以高速率将核酸转移至靶细胞。本专利技术人还确定了间充质谱系前体或干细胞可以将核酸递送至癌细胞以减少癌细胞生长。令人惊讶的是，尽管参与细胞间核酸转移的关键蛋白被敲除，但间充质谱系前体或干细胞的这些能力仍得以保持。使用间充质谱系前体或干细胞将核酸递送至靶细胞的另一个有利方面是这些细胞归巢于靶组织的能力。间充质谱系前体或干细胞的迁移和粘附能力使它们特别适合于此目的。因此，在一个实例中，本公开涉及将寡核苷酸递送到靶细胞中的方法，该方法包括将靶细胞与表达一种或多种选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3的标志物的间充质谱系前体或干细胞接触，其中已修饰所述细胞以引入寡核苷酸或表达所述寡核苷酸的载体。在一个实例中，接触在允许间充质谱系前体或干细胞与靶细胞形成缝隙连接的条件下发生，由此通过穿过该缝隙连接而将寡核苷酸递送至靶细胞。在一个实例中，缝隙连接由Cx40或Cx43形成。在另一个实例中，缝隙连接由Cx43形成。在另一个实例中，寡核苷酸的递送是通过除Cx43外的机制。例如，寡核苷酸可以通过穿过由Cx40、Cx45、Cx30.3、Cx31或Cx31.1形成的缝隙连接来递送。在另一个实例中，寡核苷酸可通过形成外体来递送。在另一个实例中，寡核苷酸的递送独立于细胞与细胞的接触。在该实例中，寡核苷酸的递送不是通过连接蛋白进行的。在一个实例中，目标细胞是癌细胞或白细胞。例如，癌细胞可以是肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌、宫颈癌、前列腺癌、骨肉瘤或黑色素瘤细胞。在另一个实例中，靶细胞是合胞体细胞。例如，合胞体细胞可以是心肌细胞、平滑肌细胞、上皮细胞、结缔组织细胞或合胞体癌细胞。在另一个实例中，本公开涉及治疗受试者癌症的方法，该方法包括向受试者施用包含间充质谱系前体或干细胞的组合物，所述间充质谱系前体或干细胞表达一种或多种选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3的标志物，其中修饰所述细胞以引入表达所述寡核苷酸的寡核苷酸或质粒。在一个实例中，所述间充质谱系前体或干细胞表达连接蛋白，该连接蛋白也由构成受试者癌症的细胞表达。在一个实例中，连接蛋白是Cx40或Cx43。在一个实例中，包含受试者癌症的细胞表达Cx43。在另一个实例中，所述间充质谱系前体或干细胞表达CD46。在一个实例中，癌症选自肺癌、胰腺癌、结直肠癌、肝癌、宫颈癌、前列腺癌、骨肉瘤和黑色素瘤。在一个实例中，该方法包括施用根据本公开的组合物。在一个实例中，所述寡核苷酸的长度约为12-24个核苷酸。在另一个实例中，所述寡核苷酸是RNA。在另一个实例中，所述寡核苷酸是反义分子。在另一个实例中，所述寡核苷酸是shRNA。在另一个实例中，所述寡核苷酸是siRNA。在一个实例中，所述siRNA是KIF11siRNA或PLK1siRNA。在另一个实例中，所述siRNA是KIF11siRNA。在一个实例中，所述KIF11siRNA结合于如SEQIDNO:1(NCBI参考号NM_004523.3)所示KIF11mRNA的5’末端。在一个实例中，所述KIF11siRNA结合从5’端开始的bp800与bp3,600之间的KIF11mRNA转录物。在另一个实例中，所述KIF11siRNA结合从5’端开始的bp900与bp3,200之间的KIF11mRNA转录物。在一个实例中，所述寡核苷酸包含如SEQIDNO:2、3、4、5、6或7中任一个所示的核酸序列。在一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:2、3、4、5、6或7中任一个所示的核酸序列组成。在一个实例中，所述寡核苷酸包含SEQIDNO:3中所示的核酸序列。在另一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:3中所示的核酸序列组成。在一个实例中，所述寡核苷酸包含SEQIDNO:4中所示的核酸序列。在另一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:4中所示的核酸序列组成。在一个实例中，所述寡核苷酸包含SEQIDNO:7中所示的核酸序列。在另一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:7中所示的核酸序列组成。在一个实例中，所述寡核苷酸包含如SEQIDNO:3、4或7中任一项所示的核酸序列。在另一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:3、4或7中任一项所示的核酸序列组成。在这些实例中，所述靶细胞可以是骨癌细胞。在一个实例中，所述癌症可能是肉瘤。在另一个实例中，所述靶细胞可以是胰腺癌细胞。在一个实例中，所述癌症可以是胰腺癌。在另一个实例中，所述靶细胞可以是前列腺癌细胞。在一个实例中，所述癌症可以是前列腺癌。在另一个实例中，所述寡核苷酸包含如SEQIDNO:2、3、4、5、6、7、8或9中任一个所示的核酸序列。在一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:2、3、4、5、6、7、8或9中任一个所示的核酸序列组成。在一个实例中，所述寡核苷酸由SEQIDNO:8或9中所示的核酸序列组成。在另一个实例中，所述寡核苷酸长度为18-22个核苷酸。在另一个实例中，所述寡核苷酸是miRNA。在一个实例中，所述miRNA可以选自miR-155、miR-155-inh、miR-181-B1、miR-15a、miR-16-1、miR-21、miR-34a、miR-221、miR-29a、let-7b。在另一个实例中，修饰间充质谱系前体或干细胞进以引入杀死靶细胞但基本上不影响间充质谱系前体或干细胞生存力的寡核苷酸或表达所述寡核苷酸的载体。在另一个实例中，修饰间充质谱系前体或干细胞以引入抑制性寡核苷酸或表达所述抑制性寡核苷酸的载体，所述抑制性寡核苷酸在间充质谱系前体或干细胞能够将抑制性寡核苷酸递送至靶细胞诸如癌细胞之前不杀死间充质谱系前体或干细胞。本专利技术人还鉴定了可修饰间充质谱系前体或干细胞以引入已知杀死癌细胞和/或减少癌细胞生长的各种抑制性寡核苷酸。令人惊讶的是，这些经修饰的间充质谱系前体或干细胞仍然存活，并且能够以足以杀死癌细胞和/或减少细胞生长的水平将抑制性寡核苷酸递送至癌细胞。因此，在另一个实例中，本公开涉及包含表达一种或多种选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3的标志物的间充质谱系前体或干细胞的组合物，其中修饰所述细胞以引入抑制性寡核苷酸或包含表达所述抑制性寡核苷酸的载体。在一个实例中，抑制性寡核苷酸的长度约为12-24个核苷酸。在另一个实例中，抑制性寡核苷酸是RNA。在另一个实例中，抑制性寡核苷酸是反义分子。在另一个实例中，抑制性寡核苷酸是shRNA。在另一个实例中，抑制性寡核苷酸是siRNA。在另一个实例中，抑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将寡核苷酸递送至靶细胞中的方法，所述方法包括将靶细胞与表达选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3中的一种或多种标志物的间充质谱系前体或干细胞接触，其中所述细胞已被修饰以引入寡核苷酸或表达所述寡核苷酸的载体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171122 US 62/589,7641.一种将寡核苷酸递送至靶细胞中的方法，所述方法包括将靶细胞与表达选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3中的一种或多种标志物的间充质谱系前体或干细胞接触，其中所述细胞已被修饰以引入寡核苷酸或表达所述寡核苷酸的载体。


2.一种治疗受试者癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含间充质谱系前体或干细胞的组合物，所述间充质谱系前体或干细胞表达选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3中的一种或多种标志物，其中所述细胞被修饰以引入寡核苷酸或表达所述寡核苷酸的质粒。


3.一种组合物，其包含表达选自α1、α2、α3、α4和α5、αv、β1和β3中的一种或多种标志物的间充质谱系前体或干细胞，其中所述细胞被修饰以引入抑制性寡核苷酸或包含表达所述抑制性寡核苷酸的载体。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法或组合物，其中经修饰的间充质谱系前体或干细胞包含足够水平的抑制性寡核苷酸，以实现0.5至5nM的所述抑制性寡核苷酸向靶细胞的转移。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸的长度约为12-24个核苷酸。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸是RNA。


7.根据权利要求1至5中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸是反义分子。


8.根据权利要求1至5中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸是shRNA、siRNA或miRNA。


9.根据权利要求8所述的方法或组合物，其中所述siRNA是KIF11siRNA或PLK1siRNA。


10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸是KIF11siRNA，其结合如SEQIDNO:1中所示的从5’末端开始在bp800与bp3,600之间的KIF11mRNA转录物。


11.根据权利要求7至10中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸包含如SEQIDNO:2、3、4、5、6、7、8或9中任一个所示的核酸序列。


12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法或组合物，其中所述寡核苷酸的长度为18-22个核苷酸。


13.根据权利要求8所述的方法或组合物，其中所述miRNA选自miR-155、miR-155-inh、miR-181-B1、miR-15a、miR-16-1、miR-21、miR-34a、miR-221、miR-29a、let-7b。


14.根据权利要求1、2或4至13中任一项所述的方法，其中修饰所述间充质谱系前体或干细胞以引入杀死所述靶细胞但基本上不影响间所述充质谱系前体或干细胞的生存力的寡核苷酸或表达其的载体。


15.根据权利要求1、2或4至13中任一项所述的方法，其中修饰所述间充质谱系前体或干细胞以引入抑制性寡核苷酸或表达抑制性寡核苷酸的载体，所述抑制性寡核苷酸或载体在所述间充质谱系前体或干细胞能够将所述抑制性寡核苷酸递送至靶细胞诸如癌细胞之前不会杀死它们。


16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物或方法，其中所述间充质谱系前体或干细胞也表达STRO-1。


17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物或方法，其中所述间充质谱系前体或干细胞基本上是STRO-1bri。


18.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物或方法，其中所述间充质谱系前体或干细胞来源于多能细胞。


19.根据权利要求18所述的组合物或方法，其中所述多能细胞是诱导的多...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·布林克，I·科恩，R·林，S·多罗尼，I·波塔波瓦，V·瓦里尤纳斯，D·迪瓦恩，A·桑德拉萨格拉，N·罗伊左斯，S·伊茨库，
申请(专利权)人：迈索布拉斯特国际有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH