【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】外胚层间充质干细胞及其产生方法
本专利技术涉及外胚层间充质干细胞及其产生方法。本专利技术还涉及用于筛选多能干细胞诱导剂的方法。
技术介绍
骨髓液等中含有的间充质干细胞(MSC)具有分化为各种组织(诸如骨、软骨、脂肪、肌肉、神经和上皮)的效力(多谱系分化效力)。因此，近年来，使用MSC提供再生医学(细胞移植疗法)的尝试已经变得广泛。然而，已知的是，先前在再生医学中使用的MSC当它们在体外连续传代时逐渐丢失其增殖能力和多谱系分化效力。因此，需要找到具有比普通MSC更高的促进组织再生的能力的细胞或具有体内活化/诱导细胞的作用的物质，并提供比常规再生医学更有效的治疗方法。引文列表专利文献专利文献1：WO2012/147470非专利文献非专利文献1：PNAS2011Apr19;108(16):6609-14。专利技术概述技术问题本专利技术的一个目标是提供外胚层间充质干细胞及其产生方法。本专利技术的另一个目标是提供用于筛选多能干细胞诱导剂的方法。问题的解决方案本专利技术人已经发现，由坏死组织损伤诱导并在外周血中循环的外胚层间充质干细胞(EMSC)有助于损伤组织的再生。该发现基于本专利技术人先前报道的以下机制的发现(PNAS2011Apr19;108(16):6609-14)，其中“从大疱性表皮松解中剥落的表皮中的坏死组织释放的HMGB1引起骨髓间充质干细胞经由外周血循环积聚在剥落的表皮部位，以诱导受损皮肤的再生”，并且进一步基于这次获得的结果...
【技术保护点】
1.集落形成PDGFR-阳性细胞，其具有以下特征i)和特征ii)和/或iii)：/ni)具有分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的效力；/nii)具有分化为表皮细胞的效力；/niii)是P0谱系-阳性的。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171201 US 62/5933101.集落形成PDGFR-阳性细胞，其具有以下特征i)和特征ii)和/或iii)：
i)具有分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的效力；
ii)具有分化为表皮细胞的效力；
iii)是P0谱系-阳性的。
2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述细胞是PDGFRα-阳性的。
3.根据权利要求1或2所述的细胞，其中所述细胞具有选自以下的一种或多种特征：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性。
4.椎骨骨髓来源的细胞，其为PDGFRα-阳性、CD34-阳性和Sca1-阴性的。
5.用于产生集落形成PDGFR-阳性细胞的方法，其包括以下步骤1)至4)中的任何一个：
1)从具有坏死组织损伤的受试者收集外周血，和在固相上培养所述外周血；
2)从具有坏死组织损伤的受试者收集外周血，在固相上培养所述外周血，且然后选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性；
3)从具有坏死组织损伤的受试者收集外周血，和从所述外周血选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性；
4)从具有坏死组织损伤的受试者收集外周血，从所述外周血选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性，和在固相上培养所述细胞。
6.用于产生集落形成PDGFR-阳性细胞的方法，其包括以下步骤1)至4)中的任何一个：
1)在固相上培养从具有坏死组织损伤的受试者收集的外周血；
2)在固相上培养从具有坏死组织损伤的受试者收集的外周血，且然后选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性；
3)从由具有坏死组织损伤的受试者收集的外周血选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性；
4)从由具有坏死组织损伤的受试者收集的外周血选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性，和在固相上培养所述细胞。
7.用于产生集落形成PDGFR-阳性细胞的方法，其包括以下步骤1)至4)中的任何一个：
1)从受试者收集椎骨骨髓，和在固相上培养所述椎骨骨髓；
2)从受试者收集椎骨骨髓，在固相上培养所述椎骨骨髓，且然后选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性和Sox1谱系-阴性；
3)从受试者收集椎骨骨髓，和从所述椎骨骨髓选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性和Sox1谱系-阴性；
4)从受试者收集椎骨骨髓，从所述椎骨骨髓选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性和Sox1谱系-阴性，和在固相上培养所述细胞。
8.用于产生集落形成PDGFR-阳性细胞的方法，其包括以下步骤1)至4)中的任何一个：
1)在固相上培养从受试者收集的椎骨骨髓；
2)在固相上培养从受试者收集的椎骨骨髓，且然后选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性和Sox1谱系-阴性；
3)从由受试者收集的椎骨骨髓选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性和Sox1谱系-阴性；
4)从由受试者收集的椎骨骨髓选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性和Sox1谱系-阴性，和在固相上培养所述细胞。
9.通过如下获得的细胞群：将MSC血液中动员物质施用于受试者，从所述受试者收集外周血，和在固相上培养收集的外周血。
10.根据权利要求9所述的细胞群，其中所述MSC血液中动员物质是由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽。
11.用于产生细胞的方法，其包括以下步骤：将MSC血液中动员物质施用于受试者，从所述受试者收集外周血，和在固相上培养收集的外周血。
12.用于产生细胞的方法，其包括以下步骤：在固相上培养从已经向其施用MSC血液中动员物质的受试者收集的外周血。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述MSC血液中动员物质是由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽。
14.通过如下获得的细胞群：1)将由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽施用于受试者，2)从所述受试者收集椎骨骨髓，和3)在固相上培养收集的椎骨骨髓或从收集的椎骨骨髓分选PDGFRα-阳性细胞。
15.用于产生细胞的方法，其包括以下步骤：1)将由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽施用于受试者，2)从所述受试者收集椎骨骨髓，和3)在固相上培养收集的椎骨骨髓或从收集的椎骨骨髓分选PDGFRα-阳性细胞。
16.用于产生细胞的方法，其包括以下步骤：在固相上培养从已经向其施用由SEQIDNO:1的氨基酸序列组成的肽的受试者收集的椎骨骨髓，或从收集的椎骨骨髓分选PDGFRα-阳性细胞。
17.用于产生细胞群的方法，其包括以下步骤：
1)在固相上培养来自含有间充质干细胞的生物组织的细胞群；
2)亚克隆步骤1)中获得的集落；
3)在诱导分化为骨、软骨和/或脂肪的培养基中培养通过亚克隆获得的细胞中的一部分，和测量骨、软骨和/或脂肪的分化标志物的表达水平；和
4)选择细胞克隆，所述细胞克隆显示与在以下情况下骨、软骨和/或脂肪的分化标志物的表达水平相比的高表达水平：在诱导分化为骨、软骨和/或脂肪的培养基中在固相上培养通过培养股骨骨髓获得的间充质干细胞。
18.用于产生细胞群的方法，其包括以下步骤：
1)在固相上培养源自含有间充质干细胞的生物组织的细胞群；和
2)选择具有选自以下的一种或多种特征的集落：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性。
19.根据权利要求18所述的方法，其中步骤2)是选择Prx1谱系-阴性集落的步骤。
20.用于产生细胞群的方法，其包括以下步骤：从源自含有间充质干细胞的生物组织的细胞群选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性。
21.用于产生细胞群的方法，其包括以下步骤：
1)从源自含有间充质干细胞的生物组织的细胞群选择性回收具有选自以下的一种或多种特征的细胞：PDGFRα-阳性、PDGFRα谱系-阳性、P0谱系-阳性、Prx1谱系-阴性、Sox1谱系-阴性、LepR谱系-阴性、CD34-阳性和Sca1-阴性；和
2)在固相上培养在步骤1)中回收的细胞。
22.通过根据权利要求5至8、11至13和15至21中任一项所述的方法获得的细胞或细胞群。
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【专利技术属性】
技术研发人员：玉井克人，新保敬史，佐佐木英嗣，山崎尊彦，
申请(专利权)人：斯特姆里姆有限公司，国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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