包含贴壁性干细胞的细胞群、其制造方法、以及医药组合物技术

本发明专利技术的课题在于提供包含保持了正常核型的安全的贴壁性干细胞的细胞群、其制备方法、以及包含上述细胞群的医药组合物。根据本发明专利技术，可以提供包含贴壁性干细胞的细胞群的制备方法，该方法包括：获得细胞群，在上述细胞群中，KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为85％以上。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含贴壁性干细胞的细胞群、其制造方法、以及医药组合物
本专利技术涉及间充质干细胞等贴壁性干细胞的细胞群。本专利技术涉及上述细胞群的制造方法、以及包含上述细胞群的医药组合物。另外，本专利技术涉及利用细胞群中表达特定标志物的贴壁性干细胞的比率作为指标的贴壁性干细胞的核型异常(karyotypicabnormality)的监测方法、供体和/或从供体采集到的生物体样品的评价方法、以及酶处理条件的判断和/或预测方法。
技术介绍
也被称为间充质基质细胞(Mesenchymalstromalcells)的间充质干细胞等贴壁性干细胞是被报告存在于骨髓、脂肪组织、牙髓等的成体干细胞，最近已明确也存在于胎盘、脐带、胎膜等胎儿附属物中。另外，上述贴壁性干细胞具有免疫抑制能力，正在进行对急性移植物抗宿主病(GVHD)及作为炎症性肠病的克罗恩病等的实用化。另外，近年来要求提供能够充分用于细胞治疗用途的安全的贴壁性干细胞，例如，非专利文献1中公开了细胞治疗中使用的间充质干细胞的核型分析的判断基准。另外，非专利文献2中记载了多个供体的骨髓来源的间充质干细胞中核型异常的发生频率、以及传代数与核型异常发生频率的相关性。现有技术文献非专利文献非专利文献1：LisbethBarkholtetal.,Riskoftumorigenicityinmesenchymalstromalcellebasedtherapies-Bridgingscientificobservationsandregulatoryviewpoints,Cytotherapy,2013,15,753-759非专利文献2：BrianG.Stultzetal.,ChromosomalStabilityofMesenchymalStromalCellsDuringInVitroCulture,Cytotherapy,2016,18(3),336-343
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术人等为了提供能够充分用于细胞治疗用途的安全的贴壁性干细胞而进行了研究，结果确认了在贴壁性干细胞的培养过程中，核型异常高频率发生、且核型异常随传代而不断积累的问题。由于上述问题会导致致瘤性(tumorigenicity)风险，因此，即使是包含少量确认到核型异常的贴壁性干细胞的贴壁性干细胞群也只能全部废弃。另外，逐个对染色体结构进行分析来评价核型异常的频率的核型分析方法需要在分析方面花费大量的时间及劳动，因此也是不能迅速保证品质的原因。因此，本专利技术人等发现了如下课题，即，为了解决上述问题，必须制备没有核型异常的细胞群、并且必须经时地监测核型异常的发生。为了解决本课题，对非专利文献1进行了研究。非专利文献1中对于细胞治疗中使用的间充质干细胞记载了对染色体的结构异常的频率的判断基准。另外，非专利文献1表明，以尽量抑制细胞的增殖速度及倍增次数为较低水平的方式设定培养条件与获得不包含核型异常的细胞群相关。然而，本专利技术人等确认了，即使降低增殖速度及倍增次数，核型异常也以高频率发生。另外，非专利文献1中对于监测有无核型异常的方法并没有记载。非专利文献2中记载了多个供体的骨髓来源的间充质干细胞中核型异常的发生频率及传代数与核型异常发生频率的相关性。与非专利文献1不同，确认了随传代次数增加、倍增次数增加，具有核型异常的频率降低的倾向。这样，细胞的倍增次数与核型异常的关系根据文献而倾向不同，对于核型异常的发生机理也没有充分阐明。另外，非专利文献2中提到了每次传代获得的间充质干细胞的核型分析对于监测扩大培养时间充质干细胞的染色体稳定性是有用的。然而，在核型分析的方法中，在获得间充质干细胞之后，从供于核型分析的17个～144个细胞中提取染色体，利用SKY(SpectralKaryotyping)法对染色体的结构逐个进行观察。上述分析需要大量的时间和劳动，难以经时地监测核型异常的发生，并且无法迅速地评价有无核型异常。而且，对于制备不包含核型异常的细胞群的方法并没有记载。鉴于以上课题，本专利技术的目的在于提供获得包含保持了正常核型的贴壁性干细胞的细胞群、并且在包含贴壁性干细胞的细胞群中经时地监测核型异常的发生、且迅速地评价有无核型异常的方法。解决课题的方法本专利技术人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，在包含贴壁性干细胞的细胞群中KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率保持为给定值以上的条件下进行培养时，可以获得包含保持了正常核型的贴壁性干细胞的细胞群。另外，本专利技术人等发现，通过利用包含贴壁性干细胞的细胞群中KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为给定值以上作为指标，可以监测贴壁性干细胞有无核型异常。此外，从高效地获得保持了正常核型的贴壁性干细胞的观点考虑，可以迅速地对供体和/或从供体采集到的生物体样品的品质进行评价，进而，可以判断和/或预测从供体采集到的生物体样品的最优酶处理条件。本专利技术是基于这些见解而完成的。即，根据本说明书，提供以下的专利技术。(1)一种包含贴壁性干细胞的细胞群的制造方法，该方法包括：获得细胞群，在所述细胞群中，KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为85％以上。(2)一种包含贴壁性干细胞的细胞群，其中，在所述细胞群中，KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为85％以上。(3)根据(2)所述的细胞群，其中，所述细胞群的KCNAB1基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.05以上。(4)根据(2)或(3)所述的细胞群，其中，所述细胞群的SULT1E1基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.1以上。(5)根据(2)～(4)中任一项所述的细胞群，其中，所述细胞群的MN1基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.7以上。(6)根据(2)～(5)中任一项所述的细胞群，其中，所述细胞群的RARRES2基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.4以下。(7)根据(2)～(6)中任一项所述的细胞群，其中，所述贴壁性干细胞来自于胎儿附属物。(8)一种医药组合物，其包含(2)～(7)中任一项所述的细胞群、和药学上可接受的媒介物。(9)一种医药组合物，其包含(2)～(7)中任一项所述的细胞群、和其它可给药的细胞。(10)根据(8)或(9)所述的医药组合物，其中，对于人的贴壁性干细胞的1次剂量为1012个/kg体重以下。(11)根据(8)～(10)中任一项所述的医药组合物，其中，所述医药组合物为注射用制剂。(12)根据(8)～(10)中任一项所述的医药组合物，其中，所述医药组合物为移植用制剂。(13)根据(12)所述的医药组合物，其中，所述移植用制剂为细胞团块或片状结构。(14)根据(8)～(13)中任一项所述的医药组合物，其是选自免疫相关疾病、缺血性疾病、下肢缺血、脑血管缺血、肾缺血、肺缺血、神经系统疾病、移植物抗宿主病、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性大肠炎、放射性肠炎、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、结缔组织病、脑本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含贴壁性干细胞的细胞群的制造方法，该方法包括：/n获得细胞群，在所述细胞群中，KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为85％以上。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171228 JP 2017-2538791.一种包含贴壁性干细胞的细胞群的制造方法，该方法包括：
获得细胞群，在所述细胞群中，KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为85％以上。


2.一种包含贴壁性干细胞的细胞群，其中，
在所述细胞群中，KCNAB1呈阳性的贴壁性干细胞的比率为85％以上。


3.根据权利要求2所述的细胞群，其中，
所述细胞群的SULT1E1基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.1以上。


4.根据权利要求2或3所述的细胞群，其中，
所述细胞群的MN1基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.7以上。


5.根据权利要求2～4中任一项所述的细胞群，其中，
所述细胞群的RARRES2基因相对于SDHA基因的表达量的相对表达量为0.4以下。


6.根据权利要求2～5中任一项所述的细胞群，其中，
所述贴壁性干细胞来自于胎儿附属物。


7.一种医药组合物，其包含权利要求2～6中任一项所述的细胞群、和药学上可接受的媒介物。


8.一种医药组合物，其包含权利要求2～6中任一项所述的细胞群、和其它可给药的细胞。


9.根据权利要求7或8所述的医药组合物，其中，
对于人的贴壁性干细胞的1次剂量为1012个/kg体重以下。


10.根据权利要求7～9中任一项所述的医药组合物，其中，
所述医药组合物为注射用制剂。


11.根据权利要求7～9中任一项所述的医药组合物，其中，
所述医药组合物为细胞团...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅田伸好，稻生溪太，小林千穗，
申请(专利权)人：株式会社钟化，
类型：发明
国别省市：日本;JP