增强TREG细胞抑制特性的方法技术

本发明专利技术涉及增强调节性T细胞(Treg)抑制免疫应答能力的方法，该方法包括增加Treg群体中FOXP3的表达。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】增强TREG细胞抑制特性的方法专利
本专利技术涉及增强调节性T细胞(Treg)抑制免疫应答能力的方法。特别地，本专利技术涉及增加Treg中FOXP3表达的方法。本专利技术进一步涉及由本专利技术的方法提供的工程化的Treg，以及此类工程化的Treg的方法和用途。专利技术背景调节性T细胞(Treg)是一类调节免疫系统的活性的T细胞。Treg通常具有免疫抑制作用，下调对刺激的免疫应答。特别地，Treg抑制常规T细胞的诱导和增殖，常规T细胞的一些类型直接参与免疫应答(例如细胞毒性T细胞)。通过表达识别与所讨论的抗原内发现的表位匹配的肽的重组T细胞受体(TCR)构建体，Treg的抑制作用可以针对特定抗原。类似地，可以通过表达识别靶细胞表面表达的抗原的嵌合抗原受体(CAR)，Treg的抑制作用可以针对特定靶标。通过在所述细胞中离体表达FOXP3，常规的T细胞可以向调节表型分化。在自身免疫和炎性中枢神经系统(CNS)疾病中，免疫系统攻击自身抗原。例如，在多发性硬化症(MS)(年轻人中最常见的神经系统病症)中，免疫系统攻击中枢神经系统的神经元鞘。当前针对自身免疫和炎性CNS疾病的治疗通常抑制免疫系统。例如，一种治疗包括骨髓移植以及施用细胞生长抑制剂和免疫抑制药物。自体造血干细胞移植可对一些受试者产生持久的有益作用，但该过程需要与大量毒性和风险相关的侵略性的清髓性调理。尽管已经批准了几种缓解疾病的治疗方法(DMT)来减少临床复发的频率，但是大多数患者在当前的治疗时间表下仍在继续临床恶化。DMT和干细胞移植均不能介导CNS特异性抑制自身免疫性疾病和炎性CNS疾病的免疫病理。目前，不存在针对自身免疫和炎性CNS疾病的有效治疗方法。治疗通常通过对免疫系统的一般抑制来仅集中在减轻其症状。需要一种特异性靶向与CNS疾病的发作和发展有关的局部免疫应答的疗法。专利技术概述本专利技术人惊奇地发现，调节性T细胞(Treg)(已经表达内源FOXP3)中的外源FOXP3表达增强了其调节功能。因此，本专利技术提供了一种增强调节性T细胞(Treg)抑制免疫应答能力的方法。本专利技术的Treg是天然Treg或从常规T细胞发育而来的诱导型Treg。例如，本专利技术的Treg是天然Treg或在体内从常规T细胞发育而来的诱导Treg。合适的Treg细胞包括胸腺来源的天然Treg(nTreg)细胞和周围产生的诱导型Treg(iTreg)细胞。换句话说，本专利技术的Treg表达内源FOXP3。令人惊讶地，本专利技术人已经确定，在已经表达内源FOXP3的Treg中增加FOXP3表达(例如通过引入外源FOXP3)比在不表达内源FOXP3的常规T细胞中通过内源表达外源FOXP3提供的调节功能更大程度地增强了Treg的调节功能。本专利技术人进一步确定，向受试者施用后，增加已经表达内源FOXP3的Treg中FOXP3表达能够改善体内Treg功能性概况的保留。例如已经确定，向受试者施用后，不表达外源FOXP3的天然Treg可以失去其Treg概况——例如向受试者施用后一段时间后，不表达外源FOXP的天然Treg可以具有降低水平的FOXP3表达并能够产生促炎性效应细胞因子。由本专利技术提供的Treg可以在向受试者施用后一段时间后保留FOXP3表达并且具有降低的产生促炎性效应细胞因子的能力。在优选的实施方案中，本专利技术的Treg是天然Treg。在一个方面，本专利技术提供了一种产生调节性T细胞(Treg)的群体的方法，包括提供第一Treg群体并增加第一Treg群体中的FOXP3表达以产生第二Treg群体。本专利技术提供了增强Treg抑制免疫应答的能力的方法，包括增加Treg中的FOXP3表达。在本专利技术的一些实施方案中，通过将编码FOXP3蛋白的多核苷酸引入Treg中来增加FOXP3表达。在本专利技术的一些实施方案中，用于增强调节性T细胞(Treg)抑制免疫应答的能力的方法包括：(a)从细胞群中分离Treg；以及(b)增加Treg中的FOXP3表达。适当地，Treg可以指Treg的群体(即多个Treg)。本专利技术还提供了通过本专利技术的方法可获得或获得的工程化的Treg。本专利技术还提供了比非工程化Treg具有更高的FOXP3表达的工程化Treg。在一些实施方案中，工程化的Treg包含编码FOXP3蛋白的外源多核苷酸。本专利技术还提供了包含本专利技术的工程化的Treg的药物组合物。本专利技术还提供了本专利技术的工程化的Treg或本专利技术的药物组合物，其用于预防和/或治疗疾病。本专利技术还提供了本专利技术的工程化的Treg在制备药物中的用途。本专利技术还提供了一种预防和/或治疗疾病的方法，其包括向受试者施用本专利技术的工程化的Treg或组合物。附图说明图1显示了在有或没有肽的情况下用TCR构建体转导的Tconv细胞的增殖(用“*”显示)，以及在不同Treg∶Tconv比例下在存在模拟转导的Treg(白色条)、用TCR构建体转导Treg(黑色条)或用TCR构建体和FOXP3转导的Treg(灰色条)的情况下相同细胞的增殖。图2显示了在有或没有肽的情况下用TCR构建体转导的Tconv细胞的IL-2产生(用“*”显示)，以及在不同Treg∶Tconv比例下在存在模拟转导的Treg(白色条)、用TCR构建体转导的Treg(黑色条)或用TCR构建体和FOXP3转导的Treg(灰色条)的情况下相同的细胞的IL-2产生。图3显示了在有或没有肽的情况下用TCR构建体转导的Tconv细胞(与图1来自不同的供体)的增殖(用“*”显示)以及在不同Treg∶Tconv比例下在存在模拟转导的Treg(白色条)、用TCR构建体转导的Treg(黑色条)或用TCR构建体和FOXP3转导的Treg(灰色条)的情况下相同细胞的增殖。图4显示了在有或没有肽的情况下用TCR构建体转导的Tconv细胞(与图2来自不同的供体)的IL-2产生(用“*”显示)以及在不同Treg∶Tconv比例下在存在模拟转导的Treg(白色条)、用TCR构建体转导的Treg(黑色条)或用TCR构建体和FOXP3转导的Treg(灰色条)的情况下相同细胞的增殖。图5显示了转导后d7-10天通过流式细胞术分析的模拟转导的Treg或用TCR或TCR+FOXP3转导的Treg中Treg标志物(FOXP3、CD25和CTLA-4)的平均荧光强度(MFI)。点代表单个实验。使用1向ANOVA进行统计分析p<0.05*，p<0.005**。图6显示了转导的Treg中FOXP3、CD25和CTLA-4的MFI。每条线代表单个实验，显示了在用TCR或TCR+FOXP3转导的相同Treg上标志物的MFI。图7显示了在有或没有肽的情况下用TCR构建体转导的Tconv细胞(与图1和3来自不同的供体)的增殖，以及在不同Treg∶Tconv比例下在存在模拟转导的Treg(白色条)、用TCR构建体转导的Treg(黑色条)、用TCR构建体和FOXP3转导本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强调节性T细胞(Treg)抑制免疫应答能力的方法，所述方法包括将编码FOXP3多肽的多核苷酸引入所述Treg中。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180418 GB 1806331.3;20180418 GB 1806330.51.一种增强调节性T细胞(Treg)抑制免疫应答能力的方法，所述方法包括将编码FOXP3多肽的多核苷酸引入所述Treg中。


2.根据权利要求1所述的方法，其中：
(i)所述FOXP3多肽包含与SEQIDNO:3或4至少80％相同的氨基酸序列或其功能片段；或者
(ii)所述编码FOXP3多肽的多核苷酸包含与SEQIDNO:1或2至少80％相同的多核苷酸序列或其功能片段。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述编码FOXP3的多核苷酸是表达载体的连续部分。


4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括将编码外源T细胞受体(TCR)的多核苷酸或编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸引入所述Treg。


5.根据权利要求4所述的方法，其中所述编码FOXP3多肽的多核苷酸和所述编码外源TCR或CAR的多核苷酸由单一表达载体提供。


6.根据权利要求5所述的方法，其中所述载体包含具有以下方向的核酸：5’FOXP3-X-TCR/CAR；其中X是内部自切割的序列。


7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中通过病毒转导将所述编码FOXP3的多核苷酸引入分离的Treg中；任选地其中通过逆转录病毒转导将所述编码FOXP3的多核苷酸引入分离的Treg中。


8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法包括：
(a)从细胞群中分离Treg；和
(b)增加所述Treg中的FOXP3表达。


9.根据权利要求8所述的方法，其中所述细胞群包含外周血单个核细胞(PBMC)或由外周血单个核细胞组成。


10.根据权利要求8或9所述的方法，其中分离所述Treg包括：
分离CD4+T细胞；以及
从所述CD4+T细胞中分离所述Treg。


11.根据权利要求8-10中任一项所述的方法，其中所述Treg的分离包括使用免疫磁珠或荧光激活细胞分选法(FACS)进行选择。


12.根据权利要求8-11中任一项所述的方法，其中通过选择(i)CD4+CD25+CD127-和/或CD4+CD25+CD127低细胞；(ii)CD4+CD25高CD127-和/或CD4+CD25+CD127低细胞来分离所述Treg。


13.根据权利要求8-12中任一项所述的方法，其中通过选择FOXP3+细胞来分离所述Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：H斯陶斯，JL麦戈文，
申请(专利权)人：UCL商务有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB