一种砂仁药材指纹图谱的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种砂仁药材气相色谱指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：制备供试品溶液；将供试品溶液与正构烷烃标准溶液分别注入气相色谱仪，获得特征峰信息，采用保留指数法对特征峰进行定性，进一步采用定性的标准品对特征峰进行确认；将10批供试品溶液色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，建立砂仁药材对照指纹图谱；获得供试品色谱图，导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，通过与对照指纹图谱比较计算待测样品指纹图谱的相似度。本发明专利技术系统适用性良好、灵敏度与专属性强、重复性与稳定性良好，色谱峰信息多，可有效应用于砂仁药材质量优劣与真伪鉴别、稳定性与道地性评价，具有操作简便、结果可靠的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种砂仁药材指纹图谱的检测方法
本专利技术涉及砂仁药材检测分析
，具体涉及一种砂仁药材指纹图谱的检测方法。
技术介绍
砂仁为我国著名的“四大南药”之一，可以食用也可以入药，因具有化湿开胃、温脾止泻、理气安胎的功效，在中医临床上具有广泛的应用价值。但其成分的种类及含量易受到产地、品种、采收等众多因素的影响。正是由于砂仁对生态环境的特殊选择以及授粉困难等因素，产量较低，商品供不应求，价格高涨，导致市场上出现不同程度的伪品，常以在外观性状上相似的豆蔻、草果、草豆蔻等近缘植物的种子或果实混充砂仁。在砂仁品种上，目前广东阳春产砂仁质量最佳，素有道地药材之称，绿壳砂主产于越南、缅甸，海南砂主产于海南，这三种砂仁被药典列为是正品砂仁。但在药典中，含量测定仅以测定乙酸龙脑酯一种成分来控制砂仁的质量状态，不能完整反应砂仁药材的全貌，因此需要可以提供丰富化合物信息的检测方法全面表征砂仁药材的质量。目前针对砂仁真伪及质量控制主要是从性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱鉴别、挥发油含量鉴定、高效液相色谱指纹图谱鉴别等方式，单纯采用其中某种方式存在鉴别不够准确或操作繁琐、需要精密仪器的缺陷。因此，亟需更加简单、有效、合理的质量评价方法以确保砂仁使用的安全性和有效性。中药指纹图谱是运用一定综合性技术的分析方法，通过特征性色谱图或光谱图，在整体上对其化学特征进行表征，是被公认为最有效的综合性评价中药的整体质量的技术手段之一，目前关于砂仁药材指纹图谱检测的相关专利并不多。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种砂仁药材指纹图谱的检测方法，该方法能够简便、快速获得砂仁药材的指纹图谱，实现对砂仁药材中包括α-蒎烯、莰烯、β-月桂烯、D-柠檬烯、樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯、丁香酚、石竹烯在内的共11个特征峰进行快速准确的定性，通过将砂仁药材供试品与对照品指纹图谱进行对比计算相似度，可以快速有效评价样品的质量，并且具有基线平稳、噪音干扰少、检测重复性好、色谱峰信息多、灵敏度高的特点。本专利技术的技术方案如下：一种砂仁药材指纹图谱的检测方法，包括下述步骤：1)将砂仁药材冷藏保存后粉碎过筛，与提取溶剂按照1～5g:10～30mL的比例混合，形成样液；2)将上述步骤1)得到的样液超声提取10～45min，与净化剂按照1ml:4～50mg的比例混合；所述净化剂为PSA和石墨化碳的混合物，所述PSA和石墨化碳的质量比为1:1～5；3)将所述步骤2)得到的上清液用微孔滤膜过滤，得供试品溶液；4)将所述步骤3)得到的供试品溶液进行气相色谱分析，获得色谱图和特征峰的保留时间；5)将C8-C20正构烷烃标准溶液采用与步骤4)同样的色谱条件，进行气相色谱分析，获得色谱图和C8-C20正构烷烃的保留时间；6)将所述步骤4)中特征峰的保留时间和步骤5)中C8-C20正构烷烃的保留时间代入公式，计算特征峰的保留指数；7)将所述步骤6)所得的保留指数与理论保留指数进行比对，对特征峰进行定性；8)将所述步骤7)中定性后的特征峰化合物用乙酸乙酯溶解，制备成对照品混合溶液；9)将所述步骤8)得到的对照品混合溶液采用与步骤4)同样的色谱条件，进行气相色谱分析，获得对照品色谱图和保留时间；10)将所述步骤9)获得的对照品色谱图和保留时间，对步骤4)的特征峰进行定性确认；11)将10批不同批次的同品种砂仁药材按步骤1)～步骤4)进行分析，对特征峰进行指认，并将色谱图导入中药指纹图谱数据库进行相似度评价，生成对照指纹图谱；12)将待测砂仁药材样品按步骤1)～步骤4)进行分析，对特征峰进行指认，并将色谱图导入中药指纹图谱数据库进行相似度评价，与所述步骤11)中得到的对照指纹图谱进行对比，计算相似度。优选的，所述步骤1)中提取溶剂为乙酸乙酯，砂仁药材粉末与乙酸乙酯按照5g:25mL的比例混合。优选的，所述步骤2)中超声提取30min，提取溶剂乙酸乙酯的体积与净化剂的质量比为25mL:550mg；PSA和石墨化碳的质量比为1:1.75。优选的，所述步骤4)中气相色谱分析参数包括色谱柱固定相为(5％-苯基)-甲基聚硅氧烷；进样口温度为250℃，载气：氮气，纯度≥99.999％，分流比为10:1，恒流模式，流速1.0mL/min，进样量1μL；柱温初温为80℃，保持1min，以5℃/min升至180℃，再以30℃/min升至270℃，保持9min；检测器：氢火焰离子化检测器，温度为260℃。优选的，所述步骤4)中指纹图谱共有11个特征峰，所述特征峰与参照峰8号峰的相对保留时间为：1号峰：0.3752±0.0003；2号峰：0.3960±0.0004；3号峰：0.4324±0.0004；4号峰：0.4399±0.0003；5号峰：0.5048±0.0003；6号峰：0.7195±0.0002；7号峰：0.7558±0.0004；8号峰为参照峰(P8)：1.0000；9号峰：1.1389±0.0001；10号峰：1.1845±0.0003；11号峰：1.2766±0.0003。优选的，保留指数计算公式为RI＝100×{n+[t(x)-t(n)]/[t(n+1)-t(n)]}，式中RI为保留指数；n为正构烷烃的碳原子数；t(n+1)、t(n)分别代表碳数为n+1、n的正构烷烃的保留时间(min)；t(x)为被测组分保留时间(min)，且t(n+1)＞t(x)＞t(n)。经保留指数计算与比对，所述步骤4)供试品溶液中1-11号峰分别为1号峰：α-蒎烯；2号峰：莰烯；3号峰：β-蒎烯；4号峰：β-月桂烯；5号峰：D-柠檬烯，6号峰：樟脑；7号峰：龙脑；8号峰：乙酸龙脑酯；9号峰：丁香酚；10号峰：α-古巴烯；11号峰：石竹烯。相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：(1)将砂仁药材粉末采用乙酸乙酯进行提取，对药材成分提取效果较好且溶剂毒性较小；(2)采用乙二胺-N-丙基硅烷、石墨化碳进行净化，在不影响特征峰响应的前提下，大大减少了样品对衬管等仪器部件的污染风险，从而降低了仪器运行成本；(3)采用正构烷烃保留指数法进行特征峰定性，具有指认峰数量多、方便快捷、成本低的优势；(4)本专利技术具有操作简便、检测限低、结果可靠的优点，可以快速、准确鉴别砂仁药材质量优劣、真伪、稳定性及道地性。附图说明图1为实施例1中供试品溶液的色谱图；图2为实施例1中C8-C20正构烷烃标准溶液的色谱图；图3为实施例1中对照品混合溶液的色谱图；图4为实施例2中乙醇提取供试品溶液色谱图；图5为实施例2中乙酸乙酯提取供试品溶液色谱图；图6为实施例3中净化条件下供试品溶液的色谱图；图7为实施例3中未净化条件下供试品溶液的色谱图；图8为实施例4中专属性试验中空白溶剂对照溶液的色谱图；图9为实施例5中10批砂仁药材的色谱图；图10为实施例5中10批砂仁药材的对照指纹图谱；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种砂仁药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括下述步骤：/n1)将砂仁药材冷藏保存后粉碎过筛，与提取溶剂按照1～5g:10～30mL的比例混合，形成样液；/n2)将上述步骤1)得到的样液超声提取10～45min，与净化剂按照1ml:4～50mg的比例混合；所述净化剂为PSA和石墨化碳的混合物，所述PSA和石墨化碳的质量比为1:1～5。/n3)将所述步骤2)得到的上清液用微孔滤膜过滤，得供试品溶液；/n4)将所述步骤3)得到的供试品溶液进行气相色谱分析，获得色谱图和特征峰的保留时间。/n5)将C

【技术特征摘要】
1.一种砂仁药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括下述步骤：
1)将砂仁药材冷藏保存后粉碎过筛，与提取溶剂按照1～5g:10～30mL的比例混合，形成样液；
2)将上述步骤1)得到的样液超声提取10～45min，与净化剂按照1ml:4～50mg的比例混合；所述净化剂为PSA和石墨化碳的混合物，所述PSA和石墨化碳的质量比为1:1～5。
3)将所述步骤2)得到的上清液用微孔滤膜过滤，得供试品溶液；
4)将所述步骤3)得到的供试品溶液进行气相色谱分析，获得色谱图和特征峰的保留时间。
5)将C8-C20正构烷烃标准溶液采用与步骤4)同样的色谱条件，进行气相色谱分析，获得色谱图和C8-C20正构烷烃的保留时间；
6)将所述步骤4)中特征峰的保留时间和步骤5)中C8-C20正构烷烃的保留时间代入公式，计算特征峰的保留指数；
7)将所述步骤6)所得的保留指数与理论保留指数进行比对，对特征峰进行定性；
8)将所述步骤7)中定性后的特征峰化合物用乙酸乙酯溶解，制备成对照品混合溶液；
9)将所述步骤8)得到的对照品混合溶液采用与步骤4)同样的色谱条件，进行气相色谱分析，获得对照品色谱图和保留时间；
10)将所述步骤9)获得的对照品色谱图和保留时间，对步骤4)的特征峰进行定性确认；
11)将10批不同批次的同品种砂仁药材按步骤1)～步骤4)进行分析，对特征峰进行指认，并将色谱图导入中药指纹图谱数据库进行相似度评价，生成对照指纹图谱；
12)将待测砂仁药材样品按步骤1)～步骤4)进行分析，对特征峰进行指认，并将色谱图导入中药指纹图谱数据库进行相似度评价，与所述步骤11)中得到的对照指纹图谱进行对比，计算相似度。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中提取溶剂为乙酸乙酯，砂仁药材粉末与乙酸乙酯按照5g:25mL的比例混合。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙细珍，唐娟，杜佳炜，张帆，
申请(专利权)人：劲牌有限公司，劲牌持正堂药业有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42