【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及功能性天然产物提取物制备，具体涉及一种韭菜子提取物的制备方法及其应用。
技术介绍
1、骨质疏松症是一种常见的慢性骨骼系统疾病，其原理是骨组织的破坏超过了再生修复的能力。目前常用雌激素替代疗法、特立帕肽等药物治疗方法去预防和治疗骨质疏松症，但这些方法均表现出一定的副作用。然而接受度较高的联合维生素d补钙法对一部分患者来说治疗效果不佳,且过量摄入还会增加患结石、心血管疾病的风险。近代研究表明一些药食同源植物和动物提取物能显著促成骨细胞增殖、分化，可有效预防骨质疏松症,且具有来源广、生物利用度高、安全无副作用等优点。例如胶原蛋白肽、木豆叶提取物、大豆异黄酮提取物等。
2、韭菜子为百合科植物韭菜(allium tuberosum rottl.ex spreng.)的干燥成熟种子。现代研究表明韭菜子中含有丰富的核苷类、皂苷类、黄酮类和多糖类等成分，其中核苷类和皂苷类具有显著的提高免疫功能、性功能和抗应激作用的作用。目前，以韭菜子为原料制备的产品功效主要以助阳补虚、提高免疫力为主，以预防骨质疏松为目的研发的韭菜子提取物较少报道。因此，本专利技术利用双相溶剂提取、结晶、制备液相和凝胶柱专一性纯化和截留有效成分等方法制备得到韭菜子提取物。经实验证实，本专利技术制备的韭菜子提取物具有良好的促成骨细胞增殖、分化的作用，可应用在预防骨质疏松症相关的药品、食品以及化妆品等领域。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种韭菜子提取物的制备方法，本专利技术解决其技术问题所采用的
2、一种韭菜子提取物的制备方法，包括以下步骤：
3、步骤一、双相溶剂提取：首先，将韭菜子粗粉碎、过筛后得到破碎后的韭菜子粉，然后将韭菜子粉和硫酸铵以一定比例置于提取容器中使用15-25倍量的双相溶剂进行低温搅拌提取，过滤，收集提取液，静置得到分层后的提取液；收集上层提取液并浓缩至浸膏状态得到样品1，收集下层提取液并浓缩至原体积的1/(10-20)，得样品2；
4、步骤二、结晶：在样品1中加入乙醇溶液，并升温搅拌溶解0.5-1.5h，溶解后在室温条件下结晶，收集沉淀，加入纯水溶解并过0.45μm滤膜，收集透过液；
5、步骤三、制备液相制备活性成分a：将透过液倒入制备液相色谱仪中进行梯度洗脱，收集特定时间段流出的馏分，低温干燥得活性成分a；
6、步骤四、凝胶柱制备活性成分b：将样品2上样装有deae seplife a25填料的树脂柱中，然后依次用0、0.1、0.3、0.5mol/l的氯化钠溶液洗脱，收集0.3mol/l氯化钠溶液洗脱部分，透析袋透析后备用，即得含有活性成分b的溶液；
7、步骤五、低温干燥：将步骤三得到的活性成分a溶解于含有活性成分b的溶液中，混匀后低温反应2-6h，然后进行低温干燥，即得韭菜子提取物。
8、优选的是，所述步骤一中，韭菜子粉和硫酸铵的质量比为1:5-10，双相溶剂构成为纯水：叔丁醇＝1:1.5-3。
9、优选的是，所述步骤一中，提取温度为30-40℃，提取时间为1.5-2.5h，静置时间为12-24h。
10、优选的是，所述步骤二中，浸膏与乙醇溶液的质量体积比为1：3-5，乙醇溶液的体积分数为70-95％，升温温度为80-95℃，室温条件下结晶时间为12-24h。
11、优选的是，所述步骤三中，制备液相色谱仪所用流动相为甲醇-水，洗脱流速为15-25ml/min，检测波长为190-600nm。
12、优选的是，所述步骤三中，流动相洗脱梯度如下：
13、 时间(min) 乙腈或甲醇(％) 水(％) 0～8 6 94 8～20 6→18 94→82 20～45 18→27 82→73 45～70 27→55 73→45
14、。
15、优选的是，所述步骤三中，制备液相色谱仪收集馏分的特定时间段为40.0-44.0min。
16、优选的是，所述步骤三中，活性成分a主要成分为金丝桃苷，其纯度≥99％，该活性成分具有明显的促成骨细胞增殖、分化的作用。
17、优选的是，所述步骤四中，样品2上样流速为1-3bv/h，透析袋分子量规格为8000-10000da。
18、优选的是，所述步骤四中，含有活性成分b的溶液主要含有高纯度韭菜子多糖，其纯度≥90％，其自身没有促成骨细胞增殖、分化的作用，但与步骤三中的活性成分a复配后，能显著提升活性成分a促成骨细胞增殖、分化能力。
19、优选的是，所述步骤五中，低温反应温度为40-60℃，低温反应时间为2-6h。
20、优选的是，所述步骤五中，低温干燥温度为50-60℃。
21、本专利技术另一个目的是提供该韭菜子提取物用于预防骨质疏松症相关的药品、食品以及化妆品等领域。
22、优选的是，所得韭菜子提取物具有显著的促成骨细胞增殖、预防骨质疏松的作用。
23、本专利技术产生的有益效果是：
24、1.本专利技术制备工艺简单、高效，韭菜子提取物中的两种构成成分活性成分a和活性成分b纯度较高，且具有协同增效的作用。
25、2.本专利技术制备的韭菜子提取物经细胞活性试验证明具有良好的促成骨细胞增殖、分化的作用，可应用在预防骨质疏松症相关的药品、食品以及化妆品等领域。
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1.一种韭菜子提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，韭菜子粉和硫酸铵的质量比为1:5-10，双相溶剂构成为纯水：叔丁醇＝1:1.5-3。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，提取温度为30-40℃，提取时间为1.5-2.5h，静置时间为12-24h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，浸膏与乙醇溶液的质量体积比为1：3-5，乙醇溶液的体积分数为70-95％，升温温度为80-95℃，室温条件下结晶时间为12-24h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，制备液相色谱仪所用流动相为甲醇-水，洗脱流速为15-25mL/min，检测波长为190-600nm。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，流动相洗脱梯度如下：
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，制备液相色谱仪收集馏分的特定时间段为40.0-44.0min。
8.
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤五中，低温反应温度为40-60℃；低温干燥温度为50-60℃。
10.权利要求1-10任一项所述的方法制备得到的韭菜子提取物在制备用于预防骨质疏松症相关的药品、食品以及化妆品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种韭菜子提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，韭菜子粉和硫酸铵的质量比为1:5-10，双相溶剂构成为纯水：叔丁醇＝1:1.5-3。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，提取温度为30-40℃，提取时间为1.5-2.5h，静置时间为12-24h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，浸膏与乙醇溶液的质量体积比为1：3-5，乙醇溶液的体积分数为70-95％，升温温度为80-95℃，室温条件下结晶时间为12-24h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，制备液相色谱仪所用流动相为甲醇-水，洗脱流速为15...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈阳，潘凯进，石万银，徐剑，廖子蔚，王喆，唐万，李韦琴，
申请(专利权)人：劲牌有限公司，
类型：发明
国别省市：
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