一种大曲功能菌液、功能菌及其制备方法技术

本发明专利技术专利公开了一种大曲功能菌液、功能菌及其制备方法，具体涉及生物发酵的技术领域。一种大曲功能菌液的制备方法，包括如下步骤：取1份黄水加入5～7份水，将大曲加入稀释后的黄水中，调节pH至5.0～7.0，于30℃下厌氧培养10～20d，获得种子液；将种子液按质量占比10～50％转接于黄水中；重复4～6次后，可得到含有产酸菌群的功能菌液。一种大曲功能菌的制备方法，包括如下步骤：向上述功能菌液中添加乙醇或乳酸，氮吹除氧20～30min后；将发酵完成的菌液转接于巴氏培养基中，氮吹除氧20～30min后，于30℃下厌氧培养7～15d；将发酵完成后的菌液稀释涂布，可分离筛选出功能菌。采用本发明专利技术技术方案克服了大曲中功能微生物的开发和利用的问题，可用于白酒酿造及功能菌的开发研究。

【技术实现步骤摘要】
一种大曲功能菌液、功能菌及其制备方法
本专利技术涉及生物发酵的
，特别涉及一种大曲功能菌液、功能菌及其制备方法。
技术介绍
大曲是一种同时含有微生物菌系、微生物酶系和复合曲香物的微生态制品，是大曲酒酿造过程中重要的产酒剂和生香剂。大曲作为一种营养载体，通过选择性地富集环境中微生物而具有酿造作用。而生物具有多样性和统一性，大曲中的功能微生物不仅只用于酿造，还可能会在制药及人体肠道中发挥着不可替带的作用。因此，找到一种合适的方法制备大曲中的功能微生物对于认识和开发这些微生物及进一步提高大曲酒质量具有重要意义。在白酒固态发酵过程中，微生物代谢生成的水与酒醅中未被利用的水从发酵物料中渗漏到窖池底部从而形成黄水。黄水含有有机酸、酵母溶出物、可溶性淀粉、还原糖、乙醇、氨基酸等物质。在以窖池为发酵容器的浓香型白酒发酵过程中，含有大曲粉的底部糟醅浸泡在黄水，使其中的微生物适应其环境并发挥作用。因此，将黄水视为一种天然培养基来制备大曲中的产酸菌是可行的。
技术实现思路
本专利技术意在提供一种大曲功能菌液、功能菌及其制备方法，以解决大曲中功能微生物的开发和利用问题。为了达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种大曲功能菌液的制备方法，包括如下步骤：S102、取1份黄水加入5～7份水，将大曲粉碎后混合均匀后按质量占比1％～5％加入稀释后的黄水中，调节pH至5.0～7.0，于30℃下厌氧培养10～20d，从而获得种子液；S104、将S102所述的种子液按质量占比10～50％转接于与S102步骤中相同稀释倍数的黄水中，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；S106、重复6次S104所述步骤后，可得到含有产酸菌群的功能菌液。本方案的工作原理：酿酒过程中产生的废水(如黄水)中含有大量的有乳酸和少量的乙醇。而大曲酒酿酒过程中，大曲作为一种重要的发酵剂，含有丰富的功能微生物。经过S102～S106所述步骤后，大曲中微生物不断被驯化和富集，从而可制备得到一种能够代谢乳酸或乙醇的大曲功能菌液。进一步的，一种大曲功能菌液可在白酒酿酒及酿酒废水的物质转化中应用。本专利技术的另一种技术方案：一种大曲功能菌的制备方法，包括如下步骤：S108、向S106所述的功能菌液中添加乙醇或乳酸，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；S110、按10～30％的接种比例将S108所述菌液转接于以乙醇或乳酸为唯一碳源的巴氏培养基中，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养7～15d；S112、将S110所述菌液稀释涂布于巴氏培养基中，在30℃下厌氧培养7～15d；挑取平板上的单菌落于液体巴氏培养基中，于30℃下厌氧培养7～15d，采用气相色谱－质谱联用仪对菌液中的有机酸进行检测，从而筛选出产酸菌株。进一步的，所述巴氏培养基采用如下方法制作：将重量份数为1～3份的酵母膏、0.1～0.5份的蛋白胨、0.5～1.0份的NaCl、0.2～0.5份的MgSO4·7H20、0.5～1.2份的K2HPO4、0.1～0.5份的FeSO4、0.1～0.5份的MnSO4、20～30份的乳酸、以及1000份的蒸馏水混合。用5mol/LNaOH将pH值调节至5.0～7.0，于115～121℃下灭菌20～30min，待培养基冷却后再向培养基中加入重量份数为5～10份的无菌CaCO3。6、进一步的，所述巴氏培养基采用如下方法制作：将重量份数为1～3份的酵母膏、0.1～0.5份的蛋白胨、0.5～1.0份的NaCl、0.2～0.5份的MgSO4·7H20、0.5～1.2份的K2HPO4、0.1～0.5份的FeSO4、0.1～0.5份的MnSO4、以及1000份的蒸馏水混合。用5mol/LNaOH将pH值调节至5.0～7.0，于115～121℃下灭菌20～30min，待培养基冷却至常温后加入重量份数为15～20份的乙醇和5～10份的无菌CaCO3。进一步的，向巴氏培养基中再加入重量份数为15～20份的琼脂粉，从而制得固体培养基。通过上述步骤，可以将大曲功能菌液中代谢乳酸或乙醇的微生物再一次驯化和富集。黄水作为一种天然培养基，营养成分丰富但也且复杂，而通过含有乳酸或乙醇为唯一碳源的巴氏培养基能进一步说明大曲功能微生物所代谢的底物和产物。进一步的，一种大曲功能菌在白酒酿酒及酿造废水处理过程中应用。与现有技术相比，本方案的有益效果：大曲中的产酸功能菌经过黄水多轮次的驯化和富集，使黄水可转换成具有再利用价值的功能菌液。通过再次向发酵液中添加乙醇或乳酸，可使代谢乳酸或乙醇的功能菌在此发酵环境中形成优势菌群，从而直接达到富集有益于白酒酿造功能微生物的目的。本方案的方法不仅可快速获得大曲中的产酸功能菌，对于获得的菌群和单菌还具有较好的实际应用价值。具体实施方式下面通过具体实施方式对本专利技术作进一步详细的说明：实施例1：一种大曲功能菌液的制备方法，包括如下步骤：S102、取1份黄水加入5份水，将大曲粉碎后混合均匀后按质量占比1％加入稀释后的黄水中，调节pH至5.0，于30℃下厌氧培养10～20d，从而获得种子液；S104、将S102所述的种子液按质量占比10％转接于与S102步骤中相同稀释倍数的黄水中，调节pH至5.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；S106、重复4次S104所述步骤，可得到含有产酸菌群的大曲功能菌液。将上述功能菌液经气相谱－质谱联用仪检测，与按份数稀释后黄水中有机酸含量对比，如表1所示：表1：稀释后的黄水与发酵完的黄水中有机酸的含量对比乙酸(g/L)丙酸(g/L)丁酸(g/L)己酸(g/L)乳酸(g/L)稀释后的黄水0.620.080.270.3227.51发酵完的黄水2.280.172.551.1810.51由表1可以看出，相较于稀释后的黄水，大曲中的菌群发挥着巨大的产酸作用，其中乙酸增加了2.68倍，丙酸增加了1.13倍，丁酸增加了8.44倍，己酸增加了2.69倍，乳酸降低了0.62倍。由此可见，在此条件下，黄水可对大曲中的产酸菌群进行富集，并且具有较好的产酸效果。一种大曲功能菌的制备方法，包括如下步骤：S108、向S106的功能菌液中添加15g/L的乙醇或20g/L的乳酸，调节pH至5.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；S110、按30％的接种比例将S108的菌液转接于以乙醇或乳酸为唯一碳源的巴氏培养基中，调节pH至5.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养7～15d。上本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大曲功能菌液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：/nS102、取1份黄水加入5～7份水，将大曲粉碎并混合均匀，按质量占比1％～5％加入稀释后的黄水中，调节pH至5.0～7.0，于30℃下厌氧培养10～20d，从而获得种子液；/nS104、将S102所述的种子液按质量占比10～50％转接于与S102步骤中相同稀释倍数的黄水中，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；/nS106、重复4～6次S104所述步骤后，可得到含有产酸菌群的功能菌液。/n

【技术特征摘要】
1.一种大曲功能菌液的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S102、取1份黄水加入5～7份水，将大曲粉碎并混合均匀，按质量占比1％～5％加入稀释后的黄水中，调节pH至5.0～7.0，于30℃下厌氧培养10～20d，从而获得种子液；
S104、将S102所述的种子液按质量占比10～50％转接于与S102步骤中相同稀释倍数的黄水中，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；
S106、重复4～6次S104所述步骤后，可得到含有产酸菌群的功能菌液。


2.一种大曲功能菌液在白酒酿造及酿酒废水的物质转化中应用。


3.一种大曲功能菌的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
S108、向S106所述的功能菌液中添加乙醇或乳酸，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养10～20d；
S110、按10～30％的接种比例将S108所述菌液转接于以乙醇或乳酸为唯一碳源的巴氏培养基中，调节pH至5.0～7.0，氮吹除氧20～30min，于30℃下厌氧培养7～15d；
S112、将S110所述菌液稀释涂布于巴氏培养基中，在30℃下厌氧培养7～15d；挑取平板上的单菌落于液体巴氏培养基中，于30℃下厌氧培养7～15d，采用气相色谱－质谱联用仪对菌液中的有机酸进行检测，从而筛选出产酸菌株。
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄治国，任志强，卫春会，邓杰，郭燕，
申请(专利权)人：四川轻化工大学，
类型：发明
国别省市：四川;51