一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，涉及生物工程技术领域。该方法包括：在变色栓菌漆酶发酵过程的菌丝体生长阶段，向发酵培养基中添加儿茶素没食子酸酯，并继续发酵以产生漆酶。应用该方法能够大幅提高变色栓菌的漆酶产量；并且该方法操作简单，易于放大生产，适于大规模漆酶发酵，从而降低漆酶生产成本，满足规模化应用的要求。

A method of increasing laccase production by adding catechin gallate

【技术实现步骤摘要】
一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法
本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种提高变色栓菌漆酶产量的方法。
技术介绍
漆酶(二醇∶氧氧化还原酶，EC1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，能氧化多种不同结构的底物，同时将分子氧还原成水。漆酶首先在Toxicodendronvernicifluum(日本漆树，以前称为Rhusvernicifera)中被发现，而后通过大量的研究发现漆酶在自然界中分布于多种植物、真菌、少数细菌和昆虫中，其中真菌漆酶是漆酶的主要来源。目前漆酶主要用于有机合成、环境污染物的降解和染料脱色、生物检测和电化学分析、造纸工业中的纸浆漂泊和废水处理、纤维原料的降解等，正在不断地推进漆酶走向工业化应用的步伐。然而，目前漆酶在工业化应用中还存在发酵表达水平低、分离纯化操作复杂、实际应用成本高等问题，因此，提高漆酶发酵水平、降低应用成本成为漆酶相关研究中急需解决的问题。漆酶的生产主要采用两种发酵方式：液态发酵和固态发酵。液态发酵具有传质好、混合均匀、易放大的优势，采用这种方式进行漆酶生产在一定程度上降低了漆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，其特征在于按照下述步骤进行/n(1)将预培养的变色栓菌菌丝体接种到漆酶发酵培养基中，进行发酵培养；/n(2)在所述发酵培养过程的菌丝体生长阶段，向发酵液中添加儿茶素没食子酸酯溶液；/n(3)在菌丝体对数生长期结束并进入漆酶主要合成阶段后，选择适于漆酶表达和分泌的发酵培养条件和发酵培养时间，并继续培养以产生漆酶；/n(4)培养至发酵液中漆酶活力达到峰值时，结束发酵并收集固态发酵基质。/n

【技术特征摘要】
1.一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，其特征在于按照下述步骤进行
(1)将预培养的变色栓菌菌丝体接种到漆酶发酵培养基中，进行发酵培养；
(2)在所述发酵培养过程的菌丝体生长阶段，向发酵液中添加儿茶素没食子酸酯溶液；
(3)在菌丝体对数生长期结束并进入漆酶主要合成阶段后，选择适于漆酶表达和分泌的发酵培养条件和发酵培养时间，并继续培养以产生漆酶；
(4)培养至发酵液中漆酶活力达到峰值时，结束发酵并收集固态发酵基质。


2.根据权利要求所述的一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，其特征在于所述步骤(1)中所述变色栓菌菌丝体预培养物培养方法，按照下述步骤进行：
斜面菌丝体的活化方法如下：采用常用土豆葡萄糖琼脂(PDA)培养基配置方法配制斜面菌丝体活化用培养基，其中土豆200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂粉15g/L；将变色栓菌(CICC14001)菌丝(0.5cmx1cm)1块接种到该培养基试管斜面上，30℃培养7天；
采用常用土豆葡萄糖培养基配制方法配制菌丝预培养用的培养基，其中土豆200g/L、葡萄糖20g/L；将活化后的斜面菌丝体(0.5cmx1cm)3块接种于100mL土豆葡萄糖培养基中，于25℃、150r/min条件下培养7天；将该培养物均质后按10％(v/v)接种量再次转接入新鲜的土豆葡萄糖培养基中，于25℃、150r/min条件下培养5天，即得预培养的菌丝体，用于漆酶固态发酵。


3.根据权利要求所述的一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，其特征在于所述步骤(1)中所述漆酶固态发酵培养基：麦麸和基础无机盐培养基按1:3(w/w)比例混合；其中基础无机盐培养基组成为Ca(NO3)2.4H2O0.5g/L、KH2PO40.5g/L、MgSO4.7H2O0.5g/L，其余为水。


4.根据权利要求所述的一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，其特征在于所述步骤(1)中发酵培养的具体条件：发酵培养基起始pH为6.1～8.0，优选为6.5～7.5，更优选为6.5～7.0。


5.根据权利要求所述的一种添加儿茶素没食子酸酯提高变色栓菌漆酶产量的方法，其特征在于所述步骤(1)中所述变色栓菌菌丝体接种后发酵基质中的初始生物量为0.02～0.15mg/g，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王锋，李湘，徐玲，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32