一种去除细胞悬液中死亡细胞的方法技术

本发明专利技术涉及一种细胞悬液中死亡细胞分离去除的方法。本申请发明专利技术人发现明胶能够极大吸附活性细胞，而对死亡细胞及其碎片和释放的损失因子基本无吸附能力，并基于所述发现，设计一种将细胞悬液中活细胞与明胶吸附后，再采用细胞分离介质通过密度离心方法去除死细胞和细胞碎片及其释放的损伤相关分子的方法。本发明专利技术的方法简单、高效，且活细胞得率高，基本无损伤相关因子，得到的活细胞活性也不受影响。

【技术实现步骤摘要】
一种去除细胞悬液中死亡细胞的方法
本专利技术主要涉及生物细胞培养分离纯化技术，特别涉及细胞悬液中死亡细胞分离去除的方法，属于生物细胞培养

技术介绍
在悬浮细胞的非连续性培养过程中，根据整体细胞生长分裂的状况可以将整个细胞培养周期分为四个时期：潜伏期、对数生长期、稳定期、衰亡期。在细胞培养过程中，细胞由于衰老、培养液PH值改变，培养液中不良物质刺激以及操作方式不当等诸多因素，不可避免会出现部分细胞死亡的现象。通常，对数生长期后期开始有一小部分细胞会出现凋亡的迹象，进入稳定期后凋亡的细胞就会越来越多，细胞死亡后由于细胞结构的破坏会释放出损伤相关分子，主要包括HAMGB1、ATP、尿酸、热激蛋白、组氨酸、线粒体蛋白、核苷酸以及各种溶解酶等，这些物质大多能影响活细胞的生长状态，最终导致培养细胞的整体死亡。因此，及时有效去除死亡细胞对于细胞的成功培养以及下游应用至关重要。对于贴壁生长的细胞来说，这些死亡细胞由于失去贴壁能力而悬浮在培养液中，可以通过更换培养液的方式去除。但对于悬浮生长的细胞来说，死亡细胞与存活细胞共同悬浮存在于培养液中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种去除细胞悬液中死亡细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：/n（1）配制明胶溶液，并滤膜过滤除菌；/n（2）调整细胞悬液中细胞数量；/n（3）将细胞悬液与明胶溶液混匀，并室温下静置；/n（4）将细胞分离液和步骤（3）中制备的含明胶细胞悬液加入离心管中，室温下离心；/n（5）弃去步骤（4）中离心管中的液体，将离心管管底的细胞沉淀重悬后，再次室温下离心；/n（6）弃去步骤（5）中的液体，使用细胞培养液重悬细胞沉淀，即得去除死亡细胞后的活细胞悬液。/n

【技术特征摘要】
1.一种去除细胞悬液中死亡细胞的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
（1）配制明胶溶液，并滤膜过滤除菌；
（2）调整细胞悬液中细胞数量；
（3）将细胞悬液与明胶溶液混匀，并室温下静置；
（4）将细胞分离液和步骤（3）中制备的含明胶细胞悬液加入离心管中，室温下离心；
（5）弃去步骤（4）中离心管中的液体，将离心管管底的细胞沉淀重悬后，再次室温下离心；
（6）弃去步骤（5）中的液体，使用细胞培养液重悬细胞沉淀，即得去除死亡细胞后的活细胞悬液。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中细胞悬液与明胶溶液混合溶液中明胶的终浓度为0.01g/ml-0.05g/ml。


3.据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中细胞悬液与明胶溶液混合溶液中明胶的终浓度为0.02g/ml。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）中调整后的细胞数量为106-107个/ml。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的静置为室温下静置8分钟以上。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（4）中的细胞分离液选自Percoll细胞分离液、含聚蔗糖分离液、含泛影葡胺分离液中任意一种或其组合。


7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘勇，王春香，
申请(专利权)人：北京健为医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11