一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，涉及微生物技术领域。该方法通过对接种前的嗜盐四联球菌进行热预适应处理，利用微生物的应激保护方式，使菌体细胞在介于最适生长条件和致死生长环境中进行培养时，产生一种适应性反应所诱导的保护作用，从而可以保护细胞抵御更为恶劣的极端环境，进而显著提高嗜盐四联球菌在极端条件下的存活率；且本发明专利技术方法简单、可靠，适用性好，成本低廉，适合大规模推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法。
技术介绍
嗜盐四联球菌(Tetragenococcushalophilus)属于乳酸菌科中的四联球菌属，被广泛应用于高盐食品发酵领域，如酱油、鱼酱、豆制品等。在食品发酵过程中，通过添加嗜盐四联球菌可显著提高食品中有机酸、醛类和酯类等风味物质含量,具有较高的应用价值。但是，在传统发酵产品的生产过程中，极端环境(高盐、低酸、高温)严重抑制了菌体的生长性能和相关代谢酶的活力，从而影响了菌体细胞的正常生理活动，导致菌体在极端环境中的存活率低，繁殖能力差，在应用过程中使产品的品质受到严重影响。因此，提高嗜盐四联球菌在极端环境条件下的存活率、保证菌体细胞的正常生理活动具有重要意义。为了保证嗜盐四联球菌发酵产品的品质，提高嗜盐四联球菌在极端环境条件下的存活率、保证菌体细胞的正常生理活动，人们要么在发酵时增加嗜盐四联球菌的接种量，要么减弱极端环境的条件，要么选用或培育抗逆性更好的新菌株，然而，上述方法虽然能一定程度的保证发酵产品品质和提高嗜盐四联球菌的存活率，但却会显著增加生产成本或导致产品品质降低，从而严重限制了嗜盐四联球菌的应用范围和领域。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，该方法能显著提高嗜盐四联球菌在极端条件下的存活率，且方法简单可靠，实用性好，对嗜盐四联球菌的大规模应用具有积极作用。一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，包括以下步骤：在将嗜盐四联球菌接种至极端条件下进行培养之前，将嗜盐四联球菌进行热预适应处理；所述的热预适应处理为将嗜盐四联球菌置于40-50℃的条件下进行培养1-5h。本专利技术一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，通过接种前的热预适应处理，利用微生物的应激保护方式，使菌体细胞在介于最适生长条件和致死生长环境中进行培养时，产生一种适应性反应所诱导的保护作用，从而可以保护细胞抵御更为恶劣的极端环境，进而显著提高嗜盐四联球菌在极端条件下的存活率；且本专利技术方法简单、可靠，适用性好，成本低廉，适合大规模推广应用。其中，所述热预适应处理过程中，温度是提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的主要影响因素，当温度过低(＜40℃)，处于嗜盐四联球菌的最佳生长温度，嗜盐四联球菌不会产生适应性反应，从而不会保护细胞抵御更为恶劣的极端环境，对提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率没有作用；当温度过高(＞50℃)，嗜盐四联球菌会在短时间内大量死亡，得到热预适应处理后的嗜盐四联球菌量很少，不利于实际应用；优选的，所述的热预适应处理为将嗜盐四联球菌置于43-48℃的条件下进行培养；最优选的，所述的热预适应处理为将嗜盐四联球菌置于45℃的条件下进行培养；通过优选，得到的热预适应处理嗜盐四联球菌数量多，在极端条件下的存活率较高。其中，优选的，所述的热预适应处理时间为1-3h；时间过长，培养周期长，培养基消耗大，不利于该方法的大规模推广应用，时间过短，嗜盐四联球菌不能产生适应性反应；最优选的，所述的热预适应处理时间为1.5h。其中，所述的热预适应处理过程中，培养嗜盐四联球菌的培养液为适合嗜盐四联球菌繁殖生长的常规培养液；优选的，所述的培养液包括以下组分配置而成：10g/L蛋白胨，4g/L酵母浸粉，5g/L三水乙酸钠，8g/L牛肉膏，20g/L葡萄糖，1ml吐温80，2g/L磷酸氢二钾，2g/L柠檬酸三铵，0.2g/L七水硫酸镁，0.05g/L四水硫酸锰，60g/L氯化钠,余量为水；pH值为6.2；优选的培养液组分更适合嗜盐四联球菌的生长，有利于嗜盐四联球菌产生适应性反应。其中，优选的，所述的培养液的pH值为6.0-6.5；优选的培养液pH值更适合嗜盐四联球菌的生长，有利于嗜盐四联球菌产生适应性反应；最优选的，所述的培养液的pH值为6.2。其中，优选的，所述的热预适应处理过程中，嗜盐四联球菌培养时接种量为1.0×106-1.0×107cfu/mL；优选的嗜盐四联球菌接种量，嗜盐四联球菌生长状态更好，有利于嗜盐四联球菌产生适应性反应；最优选的，所述嗜盐四联球菌培养时接种量为5.0×106cfu/mL。其中，优选的，所述嗜盐四联球菌的保藏编号为CGMCCNo.3792。其中，所述一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，还包括：将预适应处理后的嗜盐四联球菌从培养液中分离的方法；所述分离方法为离心处理。其中，优选的，所述的离心转速为7000-9000r/min，离心温度为3-5℃，离心时间为3-8min；优选的离心条件，对嗜盐四联球菌的分离效果更好，得到的嗜盐四联球菌活性更好；最优选的，所述的离心转速为8000r/min，离心温度为4℃，离心时间为5min。其中，所述的极端条件是指对嗜盐四联球菌生长具有一定抑制作用的环境，其能一定程度的降低嗜盐四联球菌的生物活性和繁殖速度，并可能导致一定量的嗜盐四联球菌死亡，是处于嗜盐四联球菌最佳生长条件和致死条件之间的一种生存环境。其中，优选的，所述的极端条件包括但不限于高温环境、酸性环境、高盐环境、乙醇环境和/或过氧化氢环境中的一种或多种。其中，优选的，所述高温环境的温度55℃；温度过高，会直接导致嗜盐四联球菌死亡，温度过低，起不到对嗜盐四联球菌的胁迫作用。其中，优选的，所述酸性环境的pH值2.5；pH值过低，会直接导致嗜盐四联球菌死亡，pH值过高，起不到对嗜盐四联球菌的胁迫作用。其中，优选的，所述高盐环境中的氯化钠的质量浓度为35％(g/100ml)；浓度过高，会直接导致嗜盐四联球菌死亡，浓度过低，起不到对嗜盐四联球菌的胁迫作用。其中，优选的，所述过氧化氢环境中过氧化氢的质量浓度为0.03％；浓度过高，会直接导致嗜盐四联球菌死亡，浓度过低，起不到对嗜盐四联球菌的胁迫作用。其中，优选的，所述乙醇环境中的乙醇的体积百分数为10％；浓度过高，会直接导致嗜盐四联球菌死亡，浓度过低，起不到对嗜盐四联球菌的胁迫作用。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：1、本专利技术通过对接种前的嗜盐四联球菌进行热预适应处理，使其产生了一种适应性反应所诱导的保护作用，从而可以保护细胞抵御更为恶劣的极端环境，进而显著提高嗜盐四联球菌在多种极端条件下的存活率。2、本专利技术方法简单、可靠，适用性好，成本低廉，适合大规模推广应用。具体实施方式下面结合试验例及具体实施方式对本专利技术作进一步的详细描述。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本
技术实现思路
所实现的技术均属于本专利技术的范围。本专利技术具体实施方式中，所采用的嗜盐四联球菌均为取至-80℃保藏于甘油储藏液中的嗜盐四联球菌(Tetragenococcushalophilus)CGMCCNo.3792。该菌种由实验室从酱醪中分离，经形态、生理生化特性试验和16SrDNA测序鉴定，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，其特征在于，包括以下步骤：在将嗜盐四联球菌接种至极端条件下进行培养之前，将嗜盐四联球菌进行热预适应处理；所述的热预适应处理为将嗜盐四联球菌置于40-50℃的条件下进行培养1-5h。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高嗜盐四联球菌在极端条件下存活率的方法，其特征在于，包括以下步骤：在将嗜盐四联球菌接种至极端条件下进行培养之前，将嗜盐四联球菌进行热预适应处理；所述的热预适应处理为将嗜盐四联球菌置于40-50℃的条件下进行培养1-5h。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的热预适应处理为将嗜盐四联球菌置于43-48℃的条件下进行培养。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的热预适应处理时间为1-3h。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的热预适应处理过程中，培养嗜盐四联球菌的培养液包括以下组分配置而成：10g/L蛋白胨，4g/L酵母浸粉，5g/L三水乙酸钠，8g/L牛肉膏，20g/L葡萄糖，1ml吐温80，2g/L磷酸氢二钾，2g/L柠檬酸三铵，0.2g/L七水硫酸镁，0.05g/L四水硫酸锰，60g/L氯化钠,余量为水；所述培养液的pH值为6.2。...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴重德，杨欢，金垚，黄钧，周荣清，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51