一种广谱型农药降解菌株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术适用于农药降解技术领域，提供了一种广谱型农药降解菌株及其制备方法和应用，该制备方法包括以下步骤：采集农田土壤；往含有复合农药的富集培养基中添加农田土壤，并进行富集培养，得到富集培养液；以复合农药为唯一碳源，将上述富集培养液接种于含有复合农药的无机盐培养基中进行驯化培养，得到驯化培养液；将上述驯化培养液稀释后，再涂布于以复合农药为唯一碳源的无机盐培养基上进行培养，得到降解菌株；将上述降解菌株置于含有复合农药的LB固体培养基上进行划线培养，得到所述农药降解菌株。本发明专利技术得到的农药降解菌株具有同时降解多种农药的能力，其克服了传统的单一农药降解菌的限制性，在实际生产中有良好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种广谱型农药降解菌株及其制备方法和应用
本专利技术属于农药降解
，尤其涉及一种广谱型农药降解菌株及其制备方法和应用。
技术介绍
随着农业的发展，除草剂、除虫剂等农药的使用在杀虫、除草的同时由于残留严重且难以降解、污染环境，造成作物、土壤中农药残留严重超标，不仅如此，对人或动物的呼吸道、肠胃、皮肤、神经系统等多方面造成威胁。目前，降解农药的方法主要是化学方法、沸石负载TiO2光催化法，但耗资大、成本高，因此在治理农药污染土壤问题上受到了极大的限制。另外，以微生物为主体的生物修复技术可用于降解各种农药污染物，具有高效、安全、无二次污染、费用低等优点。同时，在保护土壤生态、农业废弃物资源化利用、缓解水体污染、农药降解等方面也具有明显优势，是我国实现农业绿色发展不可或缺的产品。但是，目前的降解菌筛选主要是针对降解单一农药进行的，其极大地限制了其在农业生产等领域的应用。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供一种广谱型农药降解菌株的制备方法，旨在解决
技术介绍
中提出的问题。本专利技术实施例是这样实现的，一种广谱型农药降解菌株的制备方法，包括以下步骤：采集农田土壤；往含有复合农药的富集培养基中添加农田土壤，并进行富集培养，得到富集培养液；以复合农药为唯一碳源，将上述富集培养液接种于含有复合农药的无机盐培养基中进行驯化培养，得到驯化培养液；将上述驯化培养液稀释后，再涂布于以复合农药为唯一碳源的无机盐培养基上进行培养，得到降解菌株；将上述降解菌株置于含有复合农药的LB固体培养基上进行划线培养，得到所述农药降解菌株。作为本专利技术实施例的一个优选方案，每升所述富集培养基包括以下组分：蛋白胨8~12g、酵母提取物4~6g、K2HPO40.8~1.2g、葡萄糖0.8~1.2g、NaCl0.8~1.2g、复合农药400~800mg。作为本专利技术实施例的另一个优选方案，每升所述无机盐培养基包括以下组分：(NH4)2SO40.8~1.2g/L、KH2PO40.4~0.6g/L、K2HPO41~2g/L、MgSO4·7H2O0.08~0.12g、NaCl0.8~1.2g、复合农药400~800mg。作为本专利技术实施例的另一个优选方案，每升所述LB固体培养基包括以下组分：蛋白胨8~12g、酵母提取物4~6g、NaCl8~12g、琼脂15~20g、复合农药400~800mg。作为本专利技术实施例的另一个优选方案，所述复合农药为六六六、DDT、艾氏剂、敌百虫、辛硫磷、甲基对硫磷、草甘膦和百草枯中的至少两种。作为本专利技术实施例的另一个优选方案，所述步骤中，每升富集培养基添加的农田土壤的质量为50~100g。作为本专利技术实施例的另一个优选方案，所述步骤中，富集培养液的接种量为5%~10%。作为本专利技术实施例的另一个优选方案，所述步骤中，富集培养的温度为28~35℃，驯化培养的温度为28~35℃，划线培养的温度为28~35℃。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述制备方法制得的农药降解菌株。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述的农药降解菌株在降解农药中的应用。本专利技术实施例提供的一种广谱型农药降解菌株的制备方法，具有简单、高效、低成本等优点，其以长期受农药污染的农田土壤作为降解菌株的来源，从中筛选能够降解复合农药的土著微生物，由于微生物来自土壤，其对污染环境具有良好的稳定性和适应性，因此，本专利技术实施例利用微生物降解技术对解决多种农药污染的土壤问题具有良好的应用价值。另外，本专利技术实施例得到的农药降解菌株具有同时降解多种农药的能力，其克服了传统的单一农药降解菌的限制性，在实际生产中有良好的应用价值。附图说明图1为本专利技术实施例1得到的降解菌株在LB培养基上的菌落形态图。图2为本专利技术实施例1得到的农药降解菌株对敌百虫、六六六、DDT、草甘膦的降解率曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1该实施例提供了一种广谱型农药降解菌株的制备方法，其包括以下步骤：S1、采集威海市文登区西洋参种植的农田土壤。S2、往100mL含有复合农药的富集培养基中添加10g的农田土壤，并置于30℃、150rpm的条件下进行富集培养7天，得到富集培养液。其中，复合农药为六六六、DDT、敌百虫和草甘膦按照等质量比混合的混合物；每升富集培养基是由蛋白胨10g、酵母提取物5g、K2HPO41g、葡萄糖1g、NaCl1g、复合农药500mg以及余量的无菌水混合得到的。S3、以复合农药为唯一碳源，将上述富集培养液按照10%的接种量（体积浓度）接种于含有复合农药的无机盐培养基中，并置于30℃、150rpm的条件下进行驯化培养7天，得到驯化培养液。其中，每升无机盐培养基是由(NH4)2SO41g/L、KH2PO40.5g/L、K2HPO41.5g/L、MgSO4·7H2O0.1g、NaCl1g、复合农药500mg和余量的无菌水混合得到的。S4、取0.2mL上述驯化培养液稀释104倍后，再涂布于以复合农药为唯一碳源的无机盐培养基上，并置于30℃的条件下进行培养7天，得到降解菌株。S5、挑取长势良好、菌落规则的上述降解菌株置于含有复合农药的LB固体培养基上，并置于30℃的条件下进行多次划线培养7天，以分离纯化菌株，即可得到农药降解菌株。其中，每升LB固体培养基是由蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g、琼脂18g、复合农药500mg和余量的无菌水混合得到的。实施例2该实施例提供了一种广谱型农药降解菌株的制备方法，其包括以下步骤：S1、采集威海市文登区西洋参种植的农田土壤。S2、往100mL含有复合农药的富集培养基中添加5g的农田土壤，并置于28℃、130rpm的条件下进行富集培养7天，得到富集培养液。其中，复合农药为艾氏剂和百草枯按照等质量比混合的混合物；每升富集培养基是由蛋白胨8g、酵母提取物4g、K2HPO40.8g、葡萄糖0.8g、NaCl0.8g、复合农药400mg以及余量的无菌水混合得到的。S3、以复合农药为唯一碳源，将上述富集培养液按照5%的接种量（体积浓度）接种于含有复合农药的无机盐培养基中，并置于28℃、130rpm的条件下进行驯化培养7天，得到驯化培养液。其中，每升无机盐培养基是由(NH4)2SO40.8g/L、KH2PO40.4g/L、K2HPO41g/L、MgSO4·7H2O0.08g、NaCl0.8g、复合农药400mg和余量的无菌水混合得到的。S4、取0.2mL上述驯化培养液稀释103倍后，再涂布于以复合农药为唯一碳源的无机盐培养基上，并置于28℃的条件下进行培养7天，得到降解菌株。S5、挑取长势良好、菌落规则的上述降解菌株置于含有复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种广谱型农药降解菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n采集农田土壤；/n往含有复合农药的富集培养基中添加农田土壤，并进行富集培养，得到富集培养液；/n以复合农药为唯一碳源，将上述富集培养液接种于含有复合农药的无机盐培养基中进行驯化培养，得到驯化培养液；/n将上述驯化培养液稀释后，再涂布于以复合农药为唯一碳源的无机盐培养基上进行培养，得到降解菌株；/n将上述降解菌株置于含有复合农药的LB固体培养基上进行划线培养，得到所述农药降解菌株。/n

【技术特征摘要】
1.一种广谱型农药降解菌株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
采集农田土壤；
往含有复合农药的富集培养基中添加农田土壤，并进行富集培养，得到富集培养液；
以复合农药为唯一碳源，将上述富集培养液接种于含有复合农药的无机盐培养基中进行驯化培养，得到驯化培养液；
将上述驯化培养液稀释后，再涂布于以复合农药为唯一碳源的无机盐培养基上进行培养，得到降解菌株；
将上述降解菌株置于含有复合农药的LB固体培养基上进行划线培养，得到所述农药降解菌株。


2.根据权利要求1所述的一种广谱型农药降解菌株的制备方法，其特征在于，每升所述富集培养基包括以下组分：蛋白胨8~12g、酵母提取物4~6g、K2HPO40.8~1.2g、葡萄糖0.8~1.2g、NaCl0.8~1.2g、复合农药400~800mg。


3.根据权利要求1所述的一种广谱型农药降解菌株的制备方法，其特征在于，每升所述无机盐培养基包括以下组分：(NH4)2SO40.8~1.2g/L、KH2PO40.4~0.6g/L、K2HPO41~2g/L、MgSO4·7H2O0.08~0.12g、NaCl0.8~1.2g、复合农药400~800mg。

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【专利技术属性】
技术研发人员：于德爽，姜文杰，王晓霞，陈光辉，苗圆圆，
申请(专利权)人：青岛大学威海创新研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37