复方利血平片中多种组分含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及药物组分的含量测定方法，具体地，本发明专利技术涉及复方利血平中多个组分含量的离子抑制色谱法测定方法。该方法使得可以在硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6的测定中进行梯度洗脱，并同时洗脱利血平、氢氯噻嗪和盐酸异丙嗪，进而延长色谱柱的使用寿命。本发明专利技术的方法改善了利血平、盐酸异丙嗪和氢氯噻嗪测定时的杂质峰问题。本发明专利技术还提供了泛酸钙的测定方法。

【技术实现步骤摘要】
复方利血平片中多种组分含量的测定方法
本专利技术涉及药物成分的测定方法，具体地，涉及复方利血片中多种组分的含量测定方法。
技术介绍
复方利血平片(曾用名复方降压片)临床常用于治疗早期和中期高血压病，含有利血平、氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、盐酸异丙嗪、维生素B1、维生素B6、泛酸钙、氯化钾和三硅酸镁等成分，其中治疗高血压的主要药物为肾上腺素能神经阻滞药利血平，血管扩张药硫酸双肼屈嗪及利尿降压药氢氯噻嗪，三药联合应用有显著的协同作用。其处方如下：目前该品种已收载于《中华人民共和国药典》2015年版，分别采用梯度洗脱HPLC法测定利血平、氢氯噻嗪、盐酸异丙嗪(以下简称利血平组)、采用离子对HPLC色谱等度洗脱测定硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6(以下简称双肼屈嗪组)。其测定方法主要存在以下几个问题：1、在双肼屈嗪组的测定中，维生素B1、维生素B6极性强，在反相色谱保留行为弱，因此药典采用离子对色谱方法以增大分离系数，用以解决保留问题(即二者出峰较晚)，改善分离效果，但是会导致测定过程稳定性极差，不易平衡，且对试剂要求较高；此外，也不能使用梯度洗脱，而采用等度洗脱会导致利血平组的三个组分不能被有效洗脱而残留于色谱柱中，而如果冲洗色谱柱，则有很大麻烦：如果水相比例高，则容易出现利血平、氢氯噻嗪、盐酸异丙嗪组分由于在水中溶解度较低而析出；如果有机相比例高，则离子对试剂(己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠)容易析出，导致色谱柱寿命缩短，增加检测成本。2、利血平组中氢氯噻嗪、盐酸异丙嗪色谱峰附近有大小不同的辅料及杂质峰，且与主成分未能完全分离，严重影响测定的准确度。4、利血平组中检测波长为268nm，虽然268nm也是利血平的最大吸收波长之一，但在该波长下利血平紫外吸收远小于另外一个最大吸收波长(216nm)，加之处方中利血平量极低(为氢氯噻嗪的百分之一)，所以该组分测定响应极小，测定误差较大。5、利血平组和双肼屈嗪组中的盐酸异丙嗪、硫酸双肼屈嗪两组分在溶液状态下极容易氧化，如盐酸异丙嗪成分在其稀释剂溶液中15小时下降约8％；硫酸双肼屈嗪成分在其稀释剂中12小时下降约7％。6、处方中含有大量的三硅酸镁，该辅料有强烈的吸附作用，导致部分活性成分(如：维生素B1、硫酸双肼屈嗪)的死吸附(缔合效应)，通过弃去初滤液的方式不能解决问题，导致测定结果偏低。目前没有关于复方利血平片中泛酸钙的测定方法。
技术实现思路
本专利技术提供了一种复方利血平片中硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6(以下简称为双肼屈嗪组)的含量的离子抑制色谱法测定方法，包括以下步骤：制备复方利血平片供试品1，使用苯基键合硅胶填充的色谱柱进行离子抑制色谱，流动相A为磷酸铵溶液-甲醇，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱，在276nm波长处进行检测。在本专利技术双肼屈嗪组含量测定方法的一些实施方案中，所述流动相A为体积比为91-95:9-5磷酸铵溶液-甲醇，优选地，所述流动相A为体积比为93:7的磷酸铵溶液-甲醇。在本专利技术双肼屈嗪组含量测定方法的一些实施方案中，所述流动相A中磷酸铵溶液通过以下步骤来制备：配制0.05mol/L磷酸溶液，使用氨水调节pH值至2.8-3.2，优选地，使用氨水调节pH至2.9。在本专利技术双肼屈嗪组含量测定方法的一些实施方案中，使用含抗氧化剂的稀释剂制备复方利血平片供试品1；优选地，所述抗氧化剂为亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，所述稀释剂为磷酸溶液。在本专利技术双肼屈嗪组含量测定方法的一些实施方案中，使用含三乙胺或氨水的稀释剂制备复方利血平片供试品1。在本专利技术双肼屈嗪组含量测定方法的一些实施方案中，所述洗脱的梯度为：本专利技术还提供了一种复方利血平片中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法，该测定方法包括3组：(一)上文所述复方利血平片中硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6(双肼屈嗪组)的含量测定方法；(二)离子抑制色谱法测定复方利血平片中利血平、氢氯噻嗪和盐酸异丙嗪(以下简称为利血平组)含量：制备复方利血平片供试品2，使用十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱进行离子抑制色谱，流动相A为磷酸铵溶液-甲醇，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱，在216nm波长处进行检测；(三)离子抑制色谱法测定复方利血平中泛酸钙含量：制备复方利血平片供试品3，使用十八烷基硅烷键合硅胶填充的色谱柱，流动相A为磷酸铵溶液-甲醇，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱，在205nm波长处进行检测。在本专利技术的复方利血平中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法的一些实施方案中，在(二)和(三)组测定中，所述流动相A为体积比为88-92:12-8的磷酸铵溶液-甲醇；优选地，所述流动相A为体积比为90:10的磷酸铵溶液-甲醇。在本专利技术的复方利血平中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法的一些实施方案中，在(二)和(三)组测定中，所述流动相A中磷酸铵溶液通过以下步骤来制备：配制0.05mol/L磷酸溶液，使用氨水调节pH值至2.5-3.2；优选地，使用氨水调节pH至2.8。在本专利技术的复方利血平中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法的一些实施方案中，在(二)组测定中，使用含有抗氧化剂的稀释剂制备供试品2；优选地，所述抗氧化剂为维生素C，所述稀释剂为醋酸钠溶液和乙腈。在本专利技术的复方利血平片中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法的一些实施方案中，在(二)组测定中，所述洗脱的梯度为：在本专利技术的复方利血平片中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法的一些实施方案中，在(三)组测定中，使用水作为稀释剂制备供试品3。在本专利技术的复方利血平片中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法的一些实施方案中，在(三)组测定中，所述洗脱的梯度为：本专利技术双肼屈嗪组测定方法中可以进行梯度洗脱，并同时洗脱利血平、氢氯噻嗪和盐酸异丙嗪，进而延长色谱柱的使用寿命。本专利技术利血平组测定方法中，药物组分峰无杂质峰影响。本专利技术采用离子抑制色谱法测定复方利血平中7个组分的含量，使得液相色谱系统容易得到平衡；洗脱方式可以采用梯度洗脱，可将每组中该产品中的其他成分洗脱，使色谱柱寿命延长。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例和现有技术的技术方案，下面对实施例和现有技术中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为双肼屈嗪组测定图谱，横坐标为时间轴(min)，纵坐标为响应轴(mAu)，出峰顺序依次为：维生素B1(4.857min)、维生素B6(6.183min)、硫酸双肼屈嗪(7.520min)、氢氯噻嗪(19.011min)、盐酸异丙嗪(21.862min)、利血平(27.395min)；维生素C(3min)。图2为利血平组测定图谱，横坐标为时间轴(min)，纵坐标为响应轴(mAu)，出峰顺序依次为：氢氯噻嗪(9.090min)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复方利血平片中硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6的含量的离子抑制色谱法测定方法，包括以下步骤：制备复方利血平片供试品1，使用苯基键合硅胶填充的色谱柱进行离子抑制色谱，流动相A为磷酸铵溶液-甲醇，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱，在276nm波长处进行检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种复方利血平片中硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6的含量的离子抑制色谱法测定方法，包括以下步骤：制备复方利血平片供试品1，使用苯基键合硅胶填充的色谱柱进行离子抑制色谱，流动相A为磷酸铵溶液-甲醇，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱，在276nm波长处进行检测。


2.权利要求1的测定方法，所述流动相A为体积比为91-95:9-5磷酸铵溶液-甲醇，优选地，所述流动相A为体积比为93:7的磷酸铵溶液-甲醇；任选地，所述流动相A中磷酸铵溶液通过以下步骤来制备：配制0.05mol/L磷酸溶液，使用氨水调节pH值至2.8-3.2，优选地，使用氨水调节pH至2.9。


3.权利要求1的测定方法，使用含抗氧化剂稀释剂制备复方利血平片供试品1，优选地，所述抗氧化剂为亚硫酸钠或亚硫酸氢钠，所述稀释剂为磷酸溶液；任选地，使用含三乙胺或氨水的稀释剂制备复方利血平片供试品1。


4.权利要求1的测定方法，所述洗脱的梯度为：





5.一种复方利血平片中七个组分含量的离子抑制色谱法测定方法，该测定方法包括3组：
(一)权利要求1所述的复方利血平片中硫酸双肼屈嗪、维生素B1和维生素B6的含量测定方法；
(二)离子抑制色谱法测定复方利血平片中利血平、氢氯噻嗪和盐酸异丙嗪含量，包括以下步骤：制备复方利血平...

【专利技术属性】
技术研发人员：李运莉，尚琳，李慧蓉，薛欢鸽，牛慧敏，夏振华，
申请(专利权)人：亚宝药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山西;14