一种缩宫素及至少十种杂质的分离方法和应用技术

技术编号：26302959 阅读：31 留言：0更新日期：2020-11-10 19:55

本发明专利技术公开了一种缩宫素及至少十种杂质的分离方法和应用。其包括下述步骤：利用高效液相色谱检测供试品溶液即可；供试品溶液为含有缩宫素的水溶液；高效液相色谱检测中，采用梯度洗脱方式进行洗脱，流动相A为水相和乙腈的混合液，水相为10‑150mmol/L磷酸二氢钠溶液，pH值为5.0～6.2；水相与乙腈的体积比为(95:5)～(85:15)；流动相B为乙腈。本发明专利技术检测方法能够同时有效分离缩宫素及其十种杂质，具有专属性强、分离度好、分析速度快、灵敏度高等特点，可用于缩宫素原料和制剂有关物质的检测，解决目前国内外药典及文献中没有控制缩宫素特定杂质方法的技术问题。

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【技术实现步骤摘要】
一种缩宫素及至少十种杂质的分离方法和应用
本专利技术涉及药物检测领域，更具体地，涉及一种缩宫素及至少十种杂质的检测方法。
技术介绍
缩宫素又名催产素，是由8种氨基酸组成的九肽药物，分子式：C43H66N12O12S2，分子量1007.2，结构式：Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2(1,6二硫键)。它能够刺激子宫收缩和乳汁排出，临床上主要用于诱导促进分娩、缩短第三产程、控制产后出血等。缩宫素对温度和pH比较敏感，因环境温度或pH的变化在制备和贮藏中都有可能生成杂质，如脱酰胺杂质、乙酰化杂质、三硫化物，缩宫素纯化过程浓溶液中易生成缩宫素二聚物。缩宫素生产工艺中主要工艺杂质和潜在降解杂质如表1所示。不同种类的杂质引入药物成品中，将会导致不同的用药安全性问题。因此，在缩宫素原料合成阶段和制剂阶段都需要对这些有关物质的含量进行严格控制。但是，国内外药典(中国药典(2020版)、欧洲药典(EP9.8)、美国药典(USP41)和日本药典(JP17版))收载的缩宫素原料药及其注射液质量标准中，只对单杂和总杂的量有要求，不涉及任何特定杂质，也就是说上述药典中均未涉及表1中特定杂质检测方法或检测限度的要求。表1缩宫素中潜在的12种有关物质缩宫素有关物质相关的文献中，AndreaHawe等(AndreaHawe,RobertPoole,StefanRomeijn,PiotrKasper,RobvanderHeijden,andWimJisk...

【技术保护点】
1.一种缩宫素及至少十种杂质的分离方法，其特征在于，其包括下述步骤：利用高效液相色谱检测供试品溶液即可；/n其中，所述供试品溶液为含有缩宫素的水溶液；所述高效液相色谱检测中，采用梯度洗脱方式进行洗脱，流动相A为水相和乙腈的混合液，所述水相为10-150mmol/L磷酸二氢钠溶液，pH值为5.0～6.2；所述水相与所述乙腈的体积比为(95:5)～(85:15)；流动相B为乙腈；/n所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：/n

【技术特征摘要】
1.一种缩宫素及至少十种杂质的分离方法，其特征在于，其包括下述步骤：利用高效液相色谱检测供试品溶液即可；
其中，所述供试品溶液为含有缩宫素的水溶液；所述高效液相色谱检测中，采用梯度洗脱方式进行洗脱，流动相A为水相和乙腈的混合液，所述水相为10-150mmol/L磷酸二氢钠溶液，pH值为5.0～6.2；所述水相与所述乙腈的体积比为(95:5)～(85:15)；流动相B为乙腈；
所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：

时间/min
流动相A％
流动相B％

0
90-98
2-10

7
85-92
8-15

10
80-90
10-20

12
70-80
20-30

13
70-80
20-30

13.1
90-98
2-10

16
90-98
2-10

所述十种杂质为“杂质1、杂质2、杂质5、杂质6、杂质7、杂质8、杂质9、杂质10、杂质11和杂质12”或者“所述杂质1、所述杂质2、杂质3、杂质4、所述杂质7、所述杂质8、所述杂质9、所述杂质10、所述杂质11和所述杂质12”；
其中，所述杂质1为[Glu4Asp5]缩宫素，所述杂质2为[Glu4]缩宫素，所述杂质3为[iso-Asp5]缩宫素，所述杂质4为[Gly9OH]缩宫素，所述杂质5为[Asp5]缩宫素，所述杂质6为[+Gly10]缩宫素，所述杂质7为[-Gly9]缩宫素，所述杂质8为缩宫素-Ac，所述杂质9为Ac-缩宫素，所述杂质10为[Trisulfide]缩宫素，所述杂质11为[Cis-dimer]缩宫素和所述杂质12为[Trans-dimer]缩宫素。

2.如权利要求1所述的缩宫素及至少十种杂质的分离方法，其特征在于，所述供试品溶液中，缩宫素的浓度为0.002～0.2mg/mL，优选0.01～0.1mg/mL，例如0.02mg/mL；
和/或，所述供试品溶液中含有的单个杂质的浓度为0.00002～0.2mg/mL，优选0.002～0.1mg/mL，例如0.001mg/mL；
和/或，所述高效液相色谱检测中，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，例如WatersXbridgeC18色谱柱；所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的规格优选为150mm×4.6mm，5μm。

3.如权利要求1所述的缩宫素及至少十种杂质的分离方法，其特征在于，所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：

时间/min
流动相A％
流动相B％

0
94-96
4-6

7
86-90
10-14

10
84-86
14-16

12
73-77
23-27

13
73-77
23-27

13.1
94-96
4-6

16
94-96
4-6

。

4.如权利要求3所述的缩宫素及至少十种杂质的分离方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件如下所示：

...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振平，贾存宇，李晓倩，丁金国，黄臻辉，
申请(专利权)人：上海上药第一生化药业有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31

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