HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法技术

本发明专利技术涉及一种HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法，即测量金银清瘟合剂中绿原酸的含量。采用水煎提取和蒸馏浓缩法提取处方中各药材有效成分制成合剂，采用HPLC法测定，Diamonsil G8ODS色谱柱(4.6nm×200mm，5μm)；以50%甲醇‑0.4%磷酸水为流动相，流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测波长为327nm，进样量10μl。绿原酸保留时间为18.126min，线性范围为0.991～9.93（r=0.9999），平均加样回收率为99.16%，检测限为0.1μg/ml。金银清瘟合剂制备工艺稳定，HPLC法测定绿原酸含量高效、准确、稳定，质量标准可行。

【技术实现步骤摘要】
HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法
本专利技术涉及一种HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法，即测量金银清瘟合剂中绿原酸的含量。
技术介绍
金银清瘟合剂（原金银合剂）为某医院多年自制合剂，在医院内应用多年，特别是手足口病流行暴发的前几年，在临床使用西药无很好疗效时，该制剂在治疗时发挥了积极作用，受到医生和患者的一致好评。该制剂含有金银花、连翘、金银花、连翘、广藿香、滑石粉、茵陈、防风、白芷、芦根、葛根、板蓝根、拳参、黄芪、白术、甘草共计14味中药，由于该制剂中药品种类多达14种，存在一定的相互干扰，在质量控制特别是主要成分含量测定上未有很好方法。目前尚未发现有关金银清瘟合剂有效成分含量测定的方法。
技术实现思路
本专利技术为了弥补现有技术的不足，提供了一种方法简单、抗干扰、测量结果稳定准确的HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术的HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）溶液的制备对照品溶液：精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品适量，加50%甲醇使其溶解，制成含绿原酸0.1mg/ml的对照品溶液；供试品溶液：精密量取金银清瘟合剂10ml,置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即为供试品溶液；（2）对照品溶液的检测分别精密量取一定量的对照品溶液置于容量瓶中加50%甲醇定容，然后取10μl进样，采用高效液相色谱法测定，得到峰面积并记录；以峰面积为纵坐标Y，以进样品的浓度为横坐标X，进行线性分析，得到回归方程；（3）供试品溶液的检测取供试品溶液进行高效液相色谱法检测，得到其峰面积，将其峰面积作为Y值代入步骤（2）的回归方程，根据Y值计算X，即可得到金银清瘟合剂中绿原酸的含量。作为优选方案,回归方程为Y=1563200.216X-1638.212（r=0.9999）,绿原酸在0.991～9.93mg/ml浓度范围内线性良好。作为优选方案，所述滤膜采用孔径大小为0.5μm的微孔滤膜。作为优选方案，对照品溶液检测中量取的对照品溶液分别为1ml、2ml、4ml、6ml和8ml，容量瓶为10ml。作为优选方案，色谱条件：采用DiamonsilG8ODS色谱柱(4.6nm×200mm，5μm)；流动相为50%甲醇-0.4%磷酸水溶液，流速为1.0ml/min，检测波长为327nm，柱温为30℃，进样量为10μl。本专利技术的有益效果：1.本专利技术依据《中华人民共和国药典》2015年版四部通则首次建立了HPLC法测定金银清瘟合剂中君药金银花主要有效成分绿原酸含量的方法。2.本专利技术的测定方法简单、高效稳定、测定结果准确且具有一定的抗干扰性。3.本专利技术还有利于金银清瘟合剂的进一步研究与开发。附图说明图1是本专利技术的对照品溶液色谱图；图2是本专利技术的供试品溶液色谱图；图3是本专利技术的阴性对照溶色谱图。具体实施方式下面结合附图及具体的实施例对本专利技术进行进一步介绍。一、仪器与试药1.仪器Waters-HPLC（美国Waters）；2847紫外检测器（青岛盛瀚色谱技术有限公司）；TC0-250型超声波清洗器（广州华南超声波设备有限公司）；EYELAN-1100型旋转蒸发仪（日本东京理化器械株式会社）；AUW120D电子分析天平（日本岛津）。2.试药与试剂对照品绿原酸（批号：110753-201615），中国食品药品检定研究院；色谱纯甲醇，（上海振兴化工一厂）；磷酸（分析纯，贵阳麟山化工有限公司）。二、金银清瘟合剂处方组成和制备方法金银清瘟合剂，菏泽市中医院多年自制合剂（批准文号：鲁药制字Z20150039，规格：100m/瓶）。1.处方组成金银花、连翘、广藿香、滑石粉、茵陈、防风、白芷、芦根、葛根、板蓝根、拳参、黄芪、白术、甘草。2.制备工艺以上十四味，连翘、广藿香、防风、茵陈、白芷、炒白术加水蒸馏，收集蒸馏液约200ml；药渣与其余金银花等八味加水煎煮二次，第一次加水10倍药材量煎煮2.5小时，第二次加水8倍药材量煎煮2小时，合并煎液，静止12小时，自然沉淀，过滤上清夜浓缩至相对密度为1.20～1.30（80℃），加入上述蒸馏液及苯甲酸钠3g，混匀，静置，滤过，加水至1000ml，搅匀，灌装，即得。三、方法与结果1.色谱条件采用DiamonsilG8ODS色谱柱(4.6nm×200mm，5μm)；流动相为50%甲醇—0.4%磷酸水溶液，流速为1.0ml/min，检测波长为327nm，柱温为30℃，进样量为10μl。2.溶液的制备对照品溶液：精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品适量，加50%甲醇适量使其溶解，制成含绿原酸的0.1mg/ml的对照品溶液。供试品溶液：精密量取金银清瘟合剂10ml，置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.5μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液取续滤液即为供试品溶液。阴性对照溶液：取不含金银花外其他配方和配制方法均同金银清瘟合剂，精密量取10ml，置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用0.5μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即为阴性对照溶液。3.方法学考察线性关系：分别精密量取对照品溶液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml置于10ml容量瓶中加50%甲醇定容，各取10μl进样，按照上述的色谱条件进行测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标Y，以进样品浓度为横坐标X（mg/ml），进行线性回归，得方程Y=1563200.216X-1638.212（r=0.9999），绿原酸在0.991～9.93线性范围内良好（r=0.9999）。特异性考察：取上述制备的供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液在色谱条件下检测绿原酸保留时间18.126min，分离良好，如图1-3所示。4.精密度实验：精密吸取对照品溶液10μl，按照上述色谱条件进行检测，连续进样8次，相对标准偏差（RSD）为0.86%，说明精密度良好。5.重复性实验：分别取用同一批号金银清瘟合剂9份，按照上述供试品溶液的制备方法配制，再根据上述色谱条件进行检测，结果相对标准偏差（RSD）为1.1%，表明该方法重复性良好。6.稳定性试验：取同一批号供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12h内进样测定，记录峰面积，结果相对标准偏差（RSD）为１.6%，表明供试品溶液在12h内保持稳定。7.加样回收实验：分别精密量取已知含量的供试品溶液9份，3份1组，每组分别加入精密称定的低、中、高的绿原酸对照品，按上述色谱条件进行分别测定，计算回收率结果见表1：。8.检测限和定量限：取对照溶液加50%甲醇分别稀释成不同浓度的溶液测定，检测限为0.1μm/ml，此时信噪比≥3：1，定量限为1.0μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）溶液的制备/n对照品溶液：精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品适量，加50%甲醇使其溶解，制成含绿原酸0.1mg/ml的对照品溶液；/n供试品溶液：精密量取金银清瘟合剂10ml,置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即为供试品溶液；/n（2）对照品溶液的检测/n分别精密量取一定量的对照品溶液置于容量瓶中加50%甲醇定容，然后取10μl进样，采用高效液相色谱法测定，得到峰面积并记录；以峰面积为纵坐标Y，以进样品的浓度为横坐标X，进行线性分析，得到回归方程；/n（3）供试品溶液的检测/n取供试品溶液进行高效液相色谱法检测，得到其峰面积，将其峰面积作为Y值代入步骤（2）的回归方程，根据Y值计算X，即可得到金银清瘟合剂中绿原酸的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种HPLC法测定金银清瘟合剂中有效成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）溶液的制备
对照品溶液：精密称取干燥至恒重的绿原酸对照品适量，加50%甲醇使其溶解，制成含绿原酸0.1mg/ml的对照品溶液；
供试品溶液：精密量取金银清瘟合剂10ml,置25ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即为供试品溶液；
（2）对照品溶液的检测
分别精密量取一定量的对照品溶液置于容量瓶中加50%甲醇定容，然后取10μl进样，采用高效液相色谱法测定，得到峰面积并记录；以峰面积为纵坐标Y，以进样品的浓度为横坐标X，进行线性分析，得到回归方程；
（3）供试品溶液的检测
取供试品溶液进行高效液相色谱法检测，得到其峰面积，将其峰面积作为Y值代入步骤（2）的回归方程，根据Y值计算X，即可得到金银清瘟合剂中绿原酸的含量。


2.根据权利要求1所述的一种HPLC法测定金银...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙国栋，杜世霞，廉英杰，
申请(专利权)人：孙国栋，
类型：发明
国别省市：山东;37