用于电化学检测的水溶性轭合物制造技术

本发明专利技术提供一种水溶性轭合物以及使用它们进行检测，诊断的方法。一个检测和定量检测的装置也在本发明专利技术能中被揭示。在很多实施方式中，这种水溶性轭合物被用在免疫和横向流动检测中。本发明专利技术还提供一种制备水溶性轭合物的方法，通过该方法可以让检测的灵敏度提高。另外，本发明专利技术还提供一种用于电化学检测的水溶性轭合物，使用这种检测可以提高检测的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于检测测定的水溶性轭合物组分，制备和使用轭合物的方法，免疫测定， 侧向横流检测，及检测装置。
技术介绍
人们一直需要一种制备轭合物的优越方法，使得轭合物能够在用于免疫化学测定比 如家用妊娠和生育化验中具有高灵敏度和特异性。用以提高免疫测定的灵敏度和可靠性的多种策略由L J Kricka在临床化学1994年 40期347-357页进行了综述。欧洲专利EP 0594772B1涉及一种水溶性、含有二乙烯基砜衍生部分的以聚合物为基 基的轭合物。欧洲专利EP0594772B1论述了利用所谓的盐析效应来增强分子种类比如抗 体和抗原与水溶性载体分子结合能力的可行性。但是,结果显示当盐浓度增加到1M时， 产生了不可逆的沉淀物。美国专利US6,627， 460 Lihme等人提供了水溶性交联轭合物及其使用方法。该专利提 供了进一步在反应混合物中提高盐浓度的方法，从而形成了含有一种水溶性轭合物的可 逆(即可重溶)沉淀物，该沉淀物可应用在各种免疫化学测定中比如侧向横流装置中。
技术实现思路
本专利技术提供了一种应用于诊断和检测化验中的水溶性轭合物组分，它们的制备和使 用方法。作为多种实施方案，轭合物在免疫测定和侧向横流检测中有效。本专利技术提供了 制备轭合物的方法，制备过程中收率更高，检测灵敏度更高。本专利技术还提供一种制备对 更加经济的水溶性轭合物。本专利技术还提供了就许多有用的配体进行检测和定量检测而应 用的装置。本专利技术还提供了利用电化检测方法并具有非常高灵敏度的水溶性轭合物。制备水溶性轭合物的方法在美国专利US6,627,460中已有论述，其全部内容包括所有 表格、图片和权利要求通过引用方式并入本文中。该些制备方法涉及的水溶性轭合物通 常含有一种载体组分， 一种连接组分， 一种间隔剂组分， 一种信号组分和一种待检配体 靶向组分或者待检配体(主要靶向组分)。信号组分共价结合到间隔剂组分上，间隔剂 组分经连接组分共价结合到载体组分上。该些方法包括a):将水溶性中间体轭合物与 至少一个主要靶向组分(待检配体靶向组分或者配体)反应，该中间体轭合物含有一种 载体组分， 一种连接组分， 一种间隔剂组分， 一种信号组分(信号组分共价结合到间隔 剂组分上，简隔剂组分经连接组分共价结合到载体组分上)。该反应在水溶液中进行， 反应中具有连接组分衍生的未反应活性基团。上述反应条件使得形成了可逆沉淀物。含 有水溶性轭合物的可逆沉淀物在水介质中重新溶解，以及c)该水溶性交联轭合物进行一 个提纯步骤。关于本专利技术的详细细节在美国专利US6,627,460中提供，其全部内容包括 所有表格、图片和权利要求通过引用方式并入本文中。作为多种实施方案，轭合物可互 相交联形成更大的共轭分子。虽然本文提供了水溶性轭合物的排列示例，其它 排列方式同样是可行的。例如，靶向组分可经连接组分结合到载体组分上，或者与间隔 剂组分结合，或者与一种非特异性蛋白质结合，可参见如下描述。同样，信号信号可与 载体组分，或者与间隔剂组分，或者甚至与靶向组分结合。各组分的精确排列可按任意 方式变化而产生一种可作为试剂的水溶性轭合物，轭合物进行化验后能得到一个有用的 结果。在第一方面，本专利技术提供了一种制备水溶性轭合物的方法，包括a)制备一种作为悬 浮液中的可逆沉淀物的水溶性轭合物，该轭合物包括至少一种载体组分，至少一种连接 组分，至少一种信号组分和至少一种待检配体靶向组分或者一种待检配体。该悬浮液经 超声波处理形成超声处理液，含有水溶性轭合物的上层清液从处理液中分离出来。可选 择的，该水溶性轭合物可从该上清液中提纯。作为一种实施方案，该水溶性轭合物经凝 胶过滤色谱(或层析)提纯。作为一种实施方案，凝胶过滤色谱采用一种平均尺寸排阻 300kD的介质进行。在本文描述的本专利技术多种实施方案中，水溶性轭合物也可含有一种间隔剂组分。作为 一种实施方案，载体组分与连接组分共价结合，信号组分共价结合到间隔剂组分上。水 溶性轭合物可通过使水溶性中间体轭合物与待检配体或者配体耙向组分在至少浓度为 1.25M的易溶盐溶液中接触而制备。作为另一种实施方案，易溶盐的浓度可以是至少大 约1.5M，或者至少大约1.75M，或者至少大约2.01/1，或者至少大约2,5M。水溶性轭合 物含有一种载体组分、 一种连接组分， 一种待检配体靶向组分或者一种待检配体， 一种 信号组分，可选择的含有一间隔剂组分。"水溶性中间体轭合物"是指含有一种载体组 分、 一种连接组分和一种信号组分的分子。水溶性中间体轭合物也可含有一间隔剂组分。"水溶性中间体前体"是指含有水溶性共轭分子中任意两个或更多组分的分子，它不是 水溶性轭合物或者中间体轭合物。作为一种实施方案，水溶性中间体前体含有一种载体 组分和一种连接组分。作为另一种实施方案，前体含有载体组分、连接组分和间隔剂组 分。作为一种实施方案，水溶性中间体轭合物含有载体组分、连接组分、信号组分和间 隔剂组分。"超声处理"是指应用于化学和生物中暴露在高频声波下的公知技术。其有 时也被称为"超声破碎"。超声处理可在任意合适的功率下进行，比如至少大约300瓦， 或者至少大约500瓦，或者至少大约700瓦，或者至少大约900瓦，或者至少大约1000 瓦，或者大于1000瓦。任意合适的频率皆可使用，比如从20到24KHz。本文的"大约"是指上下增减10%。术语"可逆沉淀物"是指形成的沉淀物经25"的水溶液稀释后可 以重新溶解。易溶盐可包括组分如锂、钠、钾、钙、和铵的硫酸盐，磷酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐， 可在浓度大约2.5 M下存在。作为一种实施方案，该盐为磷酸钾或者磷酸钠。在上下文中与轭合物连用的术语"水溶性"是指得到的轭合物应该在水介质中可溶， 比如室温下的水中，也即通过本专利技术披露的方法得到的交联轭合物应该得到经肉眼观察 透明、均质的溶液。作为多种实施方案,得到的轭合物应该在251C每ml水中具有至少0.1,或者至少0.2, 或者至少0. 5,或者至少1,或者至少3,或者至少5,或者至少7,或者从5到10,或者从4 到11，或者至少10，或者至少20,或者至少30,或者至少40，或者至少50,或者至少100, 或者在特殊情况下至少200rng的溶解度。本专利技术同时也提供了按照本专利技术的任一方法制 备的水溶性轭合物。在另一方面，本专利技术提供了制备水溶性轭合物的方法，包括制备本文描述的作为悬浮 液中沉淀物的水溶性轭合物。含有水溶性轭合物的颗粒从悬浮液中分离，颗粒用水溶液 洗涤形成二次悬浮液。含有水溶性轭合物的颗粒从二次悬浮液中分离。按照该些方法制 备的水溶性轭合物与本文描述的轭合物结构相同。比如，轭合物可进一步含有一间隔剂 组分，载体组分与连接组分共价结合，信号组分共价结合到间隔剂组分上。作为一种实施方案，水溶性轭合物通过下述工艺进行提纯将沉淀物与上清液分离， 形成沉淀物在水中的悬浮液，再将沉淀物与上清液分离。轭合物可含有一个经连接组分 (比如，牛血清白蛋白，免疫球蛋白)结合到载体组分上的非特异性蛋白质。作为一种 实施方案，靶向组分为经还原剂处理过的抗体。"还原剂"是指通过提供一个电子或多 个电子而化学还原其它物质的物质。还原剂的示例包括beta-巯基乙醇，二硫苏糖醇， 2-亚氨硫杂戊烷。"洗涤颗粒本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水溶性轭合物，包括：　至少一种载体组分；　至少一种连接组分，　至少一种经连接组分共价结合到载体组分上的电化信号组分；　至少一种待检配体靶向组分或者一种待检配体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：MW牛顿，AC威杰冉阿迪翰，
申请(专利权)人：因韦尔尼斯医药瑞士股份有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]