槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒、方法及应用技术

本发明专利技术基于植原体tuf基因序列设计特异性引物Atf/Atr和探针AtProbe，建立槟榔黄化植原体ddPCR检测技术，并采用建立的ddPCR技术对采自我国海南省不同地区槟榔黄化病样品及发病组织不同部位进行检测分析。引物Atf/Atr和探针AtProbe可特异性地在槟榔黄化病发病组织中检测到植原体信号，每个反应微滴生成数大于10000，绝对定量结果可信。基于建立的槟榔黄化植原体ddPCR技术检测分析表明：在海南定安、三亚、屯昌、文昌、万宁等不同市县槟榔黄化病样品中均检测到植原体，植原体浓度最低为0.07copies/μL，与LAMP检测技术相比灵敏灵提高约1000倍；本发明专利技术建立的ddPCR检测技术对于槟榔黄化植原体定量检测、病害流行监测、传播媒介昆虫和中间寄主筛选、槟榔种苗检疫及槟榔黄化病综合防治等研究具有较为重要的意义。

Detection kit, method and application of areca yellow phytoplasma by microdrop digital PCR

【技术实现步骤摘要】
槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒、方法及应用
本专利技术属于生物
，涉及一种微滴式数字PCR检测试剂盒，具体涉及一种基于植原体tuf基因序列设计特异性引物Atf/Atr和探针AtProbe，建立槟榔黄化植原体ddPCR检测技术，并采用建立的ddPCR技术对采自我国海南省不同地区槟榔黄化病样品及发病组织不同部位进行检测分析。
技术介绍
植原体是一类寄生于植物韧皮部、尚不能分离纯化的原核致病菌(Doietal,1967)。槟榔(ArecacathecuL.)是一种棕榈科常绿乔木，我国重要的南药资源之一，具有很高的药用价值和经济价值。由植原体引起的槟榔黄化病是是我国海南槟榔生产上的一种毁灭性病害。我国槟榔黄化病已由发病初期的海南省屯昌县蔓延至海南省琼海、万宁、陵水、文昌、琼中、定安、乐东、保亭、三亚、五指山等10余个市县，在海南不同地区的槟榔产区均有不同程度的发生，且发病地区及面积仍在不断扩大，严重影响我国槟榔产业健康可持续发展(罗大全等,2001；车海彦等,2010a,2010b；周亚奎等,2010)。植原体病害是系统性侵染病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒，其特征在于：含有槟榔黄化植原体ddPCR检测特异性引物对和特异性探针，其中，引物Atf的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO:1所示，引物Atr的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，探针AtProbe的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒，其特征在于：含有槟榔黄化植原体ddPCR检测特异性引物对和特异性探针，其中，引物Atf的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:1所示，引物Atr的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:2所示，探针AtProbe的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO:3所示。


2.根据权利要求1所述的槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒，其特征在于：所述探针AtProbe的5’端由VIC修饰，3’端由BHQ1修饰。


3.根据权利要求1所述的槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒，其特征在于：检测到的槟榔黄化植原体最低浓度为0.07copies/μL。


4.权利要求1所述的槟榔黄化植原体微滴式数字PCR检测试剂盒在槟榔黄化植原体定量检测、病害流行监测、传播媒介昆虫和中间寄主筛选、槟榔种苗检疫及槟榔黄化病综合防治的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：于少帅，覃伟权，唐庆华，宋薇薇，赵蕊玲，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院椰子研究所，
类型：发明
国别省市：海南;46