一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法，包括以下步骤：步骤一，将各乳酸乳球菌菌株分别在Ox/H条件下和No Ox/No H条件下进行培养；步骤二，培养后分别提取各菌株菌液中的总RNA；步骤三，对总RNA样品进行质量检测以筛选出合格样品；步骤四，构建合格样品的RNA‑seq测序文库，获得cDNA文库，并对cDNA文库进行高通量测序，获得各个cDNA文库的5’端和3’端的reads序列。本发明专利技术还公开了上述筛选方法在乳制品、肉制品、酒类、咖啡、蔬菜和青贮的生产加工中的应用。本发明专利技术可以高效准确地筛选出能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌，然后选择它们对食品进行优质加工。

【技术实现步骤摘要】
一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法及其应用
本专利技术涉及一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法及其应用，属于乳酸菌

技术介绍
乳酸乳球菌属于兼性厌氧菌，主要进行发酵代谢，代谢能量的原始来源是通过底物磷酸化以ATP的形式供给。然而在某些条件下乳酸乳球菌可以利用环境中存在的氧气进行有氧呼吸代谢，从而消除氧气对菌体细胞的危害。有氧呼吸代谢对乳酸乳球菌的影响主要体现在提高其生长速率、生物量和存活率，产生这些对乳酸乳球菌有益作用的原因主要是来自于以下三个方面。首先，当乳酸乳球菌进行有氧呼吸代谢时，它能够将氧气转化成水，从而避免了有氧条件下氧气对其菌体细胞的损伤。其次，呼吸链中的NADH氧化酶通过氧化NADH来减少可供乳酸脱氢酶利用的NADH，使乳酸的产量降低，从而细菌细胞内得以保持pH近中性的环境，降低了酸胁迫对菌体细胞的损伤。最后，有氧呼吸时乳酸乳球菌通过NADH脱氢酶将质子排到细胞外，而不是通过利用H+-ATPase水解ATP产生的能量将质子泵到胞外，这样能够减少能量的消耗。然而，研究表明，并不是所有的乳酸乳球菌都本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一，将各乳酸乳球菌菌株分别在Ox/H条件下和No Ox/No H条件下进行培养；/n步骤二，培养后分别提取各菌株菌液中的总RNA；/n步骤三，对总RNA样品进行质量检测以筛选出合格样品；/n步骤四，构建合格样品的RNA-seq测序文库，获得cDNA文库，并对cDNA文库进行高通量测序，获得各个cDNA文库的5’端和3’端的reads序列；/n步骤五，对reads序列进行筛选以获得合格reads序列；/n步骤六，对RNA-seq测序文库进行有参考基因组的拼接；/n步骤七，对编码血红素摄取的相关基因的基因表达量进行...

【技术特征摘要】
1.一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，将各乳酸乳球菌菌株分别在Ox/H条件下和NoOx/NoH条件下进行培养；
步骤二，培养后分别提取各菌株菌液中的总RNA；
步骤三，对总RNA样品进行质量检测以筛选出合格样品；
步骤四，构建合格样品的RNA-seq测序文库，获得cDNA文库，并对cDNA文库进行高通量测序，获得各个cDNA文库的5’端和3’端的reads序列；
步骤五，对reads序列进行筛选以获得合格reads序列；
步骤六，对RNA-seq测序文库进行有参考基因组的拼接；
步骤七，对编码血红素摄取的相关基因的基因表达量进行计算，编码血红素摄取的相关基因包括P620_03635、P620_03640和P620_03645；
步骤八，将在Ox/H条件下和在NoOx/NoH条件下的同一菌株的同一基因的基因表达量相除，若P620_03635和P620_03640的基因表达量上调，P620_03645的表达量下调，则说明该菌株能够进行有氧呼吸代谢。


2.根据权利要求1所述的一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，步骤一中，Ox代表氧气，H代表血红素，Ox/H代表有氧气和血红素；培养时间为至少6h；NoOx代表无氧，NoH代表无血红素，NoOx/NoH代表没有氧气和血红素。


3.根据权利要求1所述的一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选方法，其特征在于，步骤二中，总RNA的提取方法为：取菌液1mL，12000r/min离心90s，去除上清液，加入20mg/mL的溶菌酶180μL，用移液枪重悬菌体，放在37℃金属浴中处理10min，随后按照细菌RNA提取试剂盒操作说明书分别提取总RNA。


4.根据权利要求1所述的一种能够进行有氧呼吸代谢乳酸乳球菌的筛选...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘飞，焦月华，李柏良，霍贵成，侯俊财，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23