一种副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品、制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品、制备方法及其应用，属于微生物检测领域，该参考样品采用包含来源于不同副溶血弧菌菌株的tdh、trh、tlh及toxR基因的片段插入质粒中形成，各基因以1:1比例串联，基因间以不相关的基因片段进行隔开；本参考品包含明确的tdh、trh、tlh及toxR四种检测基因，序列来源清晰，而且均按照单拷贝方式保存于质粒中，不仅可以用于定性检测，还可以作为量值可溯源的参考品进行试剂性能鉴定和实验室之间能力评价。

【技术实现步骤摘要】
一种副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品、制备方法及其应用
本专利技术涉及微生物检测领域，特别是涉及一种副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品、制备方法及其应用。
技术介绍
副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus，VP)是一种革兰氏阴性嗜盐性细菌，大量分布在近海岸的海水、海底沉积物和海产品中。目前，已成为许多沿海国家细菌性食物中毒的首位病原菌。同时也是引起我国沿海地区细菌性食物中毒的首位食源性致病菌，是全国食源性疾病微生物病因的主要致病物质之一。目前，由VP引起的食源性疾病已超过沙门氏菌，跃居于食源性致病菌的首位，成为当前世界上分布最广泛、最常见的疾病之一，是国内外极为重视的公共卫生安全问题之一。VP致病性主要通过与宿主细胞的相互作用体现，一系列研究表明致病性VP的毒力因子主要有溶血性毒素、脂多糖、尿素酶等。其中，溶血素类毒力因子包括耐热直接溶血素Tdh、不耐热直接溶血素Tlh、和耐热直接相关溶血素Trh，分别由tdh、tlh、trh基因编码。其中，Tdh能使人或兔红细胞发生溶血，称为“神奈川现象”，该现象常用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，采用包含来源于不同副溶血弧菌菌株的tdh、trh、tlh及toxR全长基因的片段插入质粒中形成；/n所述副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；/n所述tdh、trh、tlh及toxR基因以等比例串联；/n所述tdh、trh、tlh及toxR基因间以不相关的基因片段进行隔开。/n

【技术特征摘要】
1.一种副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，采用包含来源于不同副溶血弧菌菌株的tdh、trh、tlh及toxR全长基因的片段插入质粒中形成；
所述副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；
所述tdh、trh、tlh及toxR基因以等比例串联；
所述tdh、trh、tlh及toxR基因间以不相关的基因片段进行隔开。


2.根据权利要求1所述的副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，在260nm和280nm处的光密度值比值在1.8-2.0之间。


3.根据权利要求1所述的副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，所述不相关的基因片段的核苷酸序列为aagtcg。


4.一种权利要求1-3任一项所述的副溶血弧菌核酸检测质粒DNA参考样品的制备方法，其特征在于，包括：
人工合成副溶血...

【专利技术属性】
技术研发人员：许龙岩，陈瑶，袁慕云，郝文波，刘二龙，
申请(专利权)人：广州海关技术中心，
类型：发明
国别省市：广东;44