ECEL1重组腺相关病毒载体及应用制造技术

本申请涉及一种腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体含有编码内皮素转化酶样1的核苷酸序列。

Recombinant adeno-associated virus vector ecel1 and its application

【技术实现步骤摘要】
ECEL1重组腺相关病毒载体及应用
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种ECEL1重组腺相关病毒载体及应用。
技术介绍
视神经属于中枢性传导束，视神经损伤是视神经传导通路内某种病因所致传导功能障碍的疾病。常见的病因有外伤、缺血、中毒、脱髓鞘、肿瘤压迫、炎症、代谢等。视神经损伤后，视网膜神经节细胞(RGCs)大量死亡，导致轴突再生困难，引导轴突再生的细胞缺乏、抑制再生的微环境、神经营养因子的不足等导致视神经损伤后RGCs的再生能力低下，最终导致视神经损伤后再生失败、视神经萎缩、视功能受损。因此，急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病的治疗仍是未被满足的医学需求，急需能够帮助患者保持，甚至改善视力的药物。
技术实现思路
本申请提供了一种腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体含有编码内皮素转化酶样1(ECEL1)的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述核苷酸序列选自下组的核苷酸序列：a)所述核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；b)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥98％相同性；c)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥95％相同性；d)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥90％相同性。在某些实施方式中，所述载体的血清型选自AAV2、AAV5、AAV7或AAV8或其组合。在某些实施方式中，所述的腺相关病毒载体还包括启动子、增强子，可选地，所述启动子选自CMV，CAG；可选地，所述启动子选自视神经特异性启动子。另一方面，本申请提供了一种重组核酸，包括选自下组的核苷酸序列：a)所述核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；b)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥98％相同性；c)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥95％相同性；以及d)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥90％相同性。另一方面，本申请提供了一种药物制剂，含有本申请所述的载体或本申请所述的重组核酸，以及药学上可接受的载体或赋形剂。在某些实施方式中，所述药物制剂为液体制剂。另一方面，本申请提供了一种如本申请所述的载体，如本申请所述的重组核酸，或如本申请所述的药物制剂在治疗急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病中的用途。在某些实施方式中，所述急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病为缺血性视神经病变、青光眼、常染色体显性视神经萎缩(DOA)、Leber’s遗传视神经病变(LHON)等。在某些实施方式中，将所述载体，所述重组核酸或所述药物制剂在眼内注射。在某些实施方式中，所述眼内注射为玻璃体腔。在某些实施方式中，所述载体，所述重组核酸或所述药物制剂能够在视网膜细胞内产生ECEL1蛋白的长效高表达。在某些实施方式中，所述载体，所述重组核酸或所述药物制剂能够增加视网膜神经节细胞和/或视神经的存活率。在某些实施方式中，所述载体，所述重组核酸或所述药物制剂能够减缓视网膜神经节细胞和/或视神经的死亡。另一方面，本申请提供了内皮素转化酶样1(ECEL1)在制备治疗急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病的药物中的应用。在某些实施方式中，所述药物包含一个腺相关病毒载体，所述腺相关病毒载体包含编码所述内皮素转化酶样1(ECEL1)的核苷酸序列。在某些实施方式中，所述急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病为缺血性视神经病变、青光眼以及遗传性视神经病变(DOA、LHON)等。在某些实施方式中，将所述药物在眼内注射。在某些实施方式中，所述眼内注射为玻璃体腔。在某些实施方式中，所述药物能够在视网膜细胞内产生ECEL1蛋白的长效高表达。在某些实施方式中，所述药物能够增加视网膜神经节细胞和/或视神经的存活率。在某些实施方式中，所述药物能够减缓视网膜神经节细胞和/或视神经的死亡。本申请所述的载体具有选自下组的至少一个有益效果：1)在视网膜细胞内长效高表达ECEL1蛋白；2)增加视网膜神经节细胞和/或视神经的存活率；3)减缓视网膜神经节细胞和/或视神经的死亡；以及4)治疗急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病(例如青光眼、DOA、LHON、以及缺血性视神经病变)，改善患者的视力。本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及专利技术的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。附图说明本申请所涉及的专利技术的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及专利技术的特点和优势。对附图简要说明书如下：图1显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染293细胞后绿色荧光蛋白表达情况。图2显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染293细胞后ECEL1基因的表达水平。图3a显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染小鼠视网膜后小鼠视网膜全组织铺片荧光照片及高倍放大图像；图3b显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染小鼠视网膜后视网膜神经节细胞层以及视神经纤维层绿色荧光蛋白的表达情况。图4显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染小鼠视网膜后3周、6周、12周、24周的ECEL1基因的转录水平。图5a显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染视神经损伤模型小鼠后，正常组(不进行视神经损伤手术组)、对照组(进行视神经损伤手术并注射rAAV-GFP对照病毒组)和实验组(进行视神经损伤手术并注射rAAV-ECEL1-2A-GFP病毒组)小鼠视网膜全组织铺片照片；图5b显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染视神经损伤模型小鼠后，正常组(不进行视神经损伤手术组)、对照组(进行视神经损伤手术并注射rAAV-GFP对照病毒组)和实验组(进行视神经损伤手术并注射rAAV-ECEL1-2A-GFP病毒组)小鼠视网膜神经节细胞密度统计，其中实验组和对照组结果具有统计学差异，P<0.05。图6显示的是本申请所述病毒载体rAAV-ECEL1-2A-GFP感染视神经损伤模型小鼠后，正常组(不进行视神经损伤手术组)、对照组(进行视神经损伤手术并注射rAAV-GFP对照病毒组)和实验组(进行视神经损伤手术并注射rAAV-ECEL1-2A-GFP病毒组)小鼠视神经轴突计数，其中统计显著性用星号表示：*表示P<0.05。图7显示的是本申请所述重组pAAV-ECEL1-2A-GFP质粒的特征图谱，包括增强子、启动子，目的基因序列，poly(A)信号，AAV反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体含有编码内皮素转化酶样1(ECEL1)的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种腺相关病毒载体，其特征在于，所述载体含有编码内皮素转化酶样1(ECEL1)的核苷酸序列。


2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述核苷酸序列选自下组的核苷酸序列：
a)所述核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；
b)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥98％相同性；
c)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥95％相同性；
d)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥90％相同性。


3.如权利要求1或2所述的载体，其特征在于，所述载体的血清型选自AAV2、AAV5、AAV7或AAV8或其组合。


4.如权利要求1-3任一项所述的载体，其特征在于，所述的腺相关病毒载体还包括启动子、增强子，可选地，所述启动子选自CMV，CAG；可选地，所述启动子选自视神经特异性启动子。


5.一种重组核酸，其特征在于，所述重组核酸的序列包括选自下组的核苷酸序列：
a)所述核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；
b)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥98％相同性；
c)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥95％相同性；以及
d)所述核苷酸序列与SEQIDNO:1有≥90％相同性。


6.一种药物制剂，其特征在于，所述药物制剂含有如权利要求1-4任一项所述的载体或如权利要求5所述的重组核酸，以及药学上可接受的载体或赋形剂。


7.如权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为液体制剂。


8.如权利要求1-4任一项所述的载体，如权利要求5所述的重组核酸，或如权利要求6-7任一项所述的药物制剂在治疗急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病中的用途。


9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述急性或慢性视神经损伤/退化/病变等相关疾病为缺血性视神经病变、青光眼、常染色体显性视神经萎缩(DOA)、Leber’s遗传视神经病变(LHON)等。

【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，刘婷，
申请(专利权)人：武汉纽福斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42