一种适用于猪的快速、高效的基因改造和转基因方法技术

本发明专利技术提供了一种适用于猪的快速、高效的基因改造方法，它是将基因编辑工具包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管。本发明专利技术的方法相比传统的体细胞核移植方法和胚胎显微注射方法，操作简便高效，基因改造效率高，极具应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种适用于猪的快速、高效的基因改造和转基因方法
本专利技术属于动物基因改造领域，尤其涉及一种适用于猪的快速、高效的基因改造方法。
技术介绍
出于提高猪的生产性能、增加猪的抗病能力，或者将其运用于医用器官移植的培养载体等等目的，适用于猪的基因改造技术逐渐凸显其应用价值。猪的基因改造技术主要包括2个部分，第一部分是基因编辑工具，具体来说，是具有基因编辑功能的质粒；第二部分是将基因编辑工具导入合子(受精卵或胚胎)的方法。早期的基因编辑工具，如：锌指核酸内切酶(zincfingernucleases，ZFNs)和转录激活子样效应核酸酶(transcriptionactivator-likeeffectornucleases，TALENs)技术工具，均存在操作步骤繁琐、载体构建时间长、打靶效率低、成本高昂等缺陷，限制了基因编辑猪的广泛应用。而规律性短重复回文序列簇(clusteredregulatoryinterspacedshortpalindromicrepeat，CRISPR)和CRISPR相关蛋白9(CRISPR-asso本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基因改造猪的快速繁育方法，其特征在于，它是将基因编辑工具包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管，待母猪产下的小猪，即可获得基因改造猪；/n所述基因改造为：使猪原有的基因组序列发生碱基缺失、替换和/或序列插入。/n

【技术特征摘要】
1.一种基因改造猪的快速繁育方法，其特征在于，它是将基因编辑工具包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管，待母猪产下的小猪，即可获得基因改造猪；
所述基因改造为：使猪原有的基因组序列发生碱基缺失、替换和/或序列插入。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因编辑工具包括CRISPR/Cas9基因编辑技术所用到的表达gRNA的基因片段。


3.如权利要求2所述方法，其特征在于，当母猪本身无法表达Cas9蛋白时，所述基因编辑工具还包括Cas9基因。


4.如权利要求1所述方法，其特征在于，注射时间是母猪完成交配24h后，优选地，完成交配后24-30h。


5.如权利要求1所述方法，其特征在于，注射病毒的剂量是(2-6)×1011GC；优选地，为4.5×1011GC。
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【专利技术属性】
技术研发人员：包骥，杨光，杨阳，步宏，高孟雨，廖光能，何宇婷，张炳琪，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51