多肽Neh2、表达载体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，特别涉及多肽Neh2、表达载体及其应用。本发明专利技术针对机体内Nrf2蛋白易降解，不稳定的特点，本发明专利技术提供了一种小分子多肽Neh2，与Nrf2竞争性结合KEAP1蛋白，增加Nrf2蛋白稳定性，提高Nrf2对下游基因调控作用，保护视神经性损伤。保护视神经性损伤。

【技术实现步骤摘要】
多肽Neh2、表达载体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及多肽Neh2、表达载体及其应用。

技术介绍

[0002]核因子E2相关因子2(Nrf2)抗氧化的核心作用已经得到多项研究的认证和学术界的公认。在复杂的体内调节中，氧化应激与炎症、肿瘤、衰老、细胞损伤、生育等多方面关系密切。
[0003]Nrf2是携带有亮氨酸拉链结构的转录因子。Nrf2基因含有7个功能区，分别命名为Neh1
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7。Neh2介导Nrf2的降解，起负调节作用。Nrf2基因几乎在所有细胞中表达，正常情况下，其在胞质中通过Neh2与keap1结合而被降解。当机体处于氧化应激状态或体内的氧化磷酸化作用可促使Nrf2与keap1解体，随后Nrf2转位进入细胞核，在各个功能区的配合下与ARE结合，启动Nrf2
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ARE信号通路并促使下游解毒酶或抗氧化酶基因的表达。
[0004]神经损伤往往是不可逆的，其原因是神经元无法再生。神经一次损伤后，紧接着会在损伤的局部形成炎症反应、氧化应激反应、水肿等病理改变造成机体的二次损伤。由于神经细胞还原性GSH含量少，神经细胞对氧化应激造成的二次损伤更加敏感，所以减轻或避免神经组织的二次损伤有重要的意义。Nrf2
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ARE通路可以通过产生AST等对抗氧化应激，在创伤性眼损伤中，Nrf2高表达并促进释放HO
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1、GSH
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Px、SOD等抗氧化抗炎蛋白，从而显著降低神经细胞遭受损伤的数量和程度。/>[0005]但是机体内Nrf2蛋白易降解，不稳定的特点，因此，提高Nrf2蛋白稳定性具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了小分子多肽Neh2，与Nrf2竞争性结合KEAP1蛋白，增加Nrf2蛋白稳定性，提高Nrf2对下游基因调控作用，保护视神经性损伤。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供了多肽，其具有如下所示的序列：
[0009](I)、具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；和/或
[0010](II)、如(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；和/或
[0011](III)、与(I)或(II)所述氨基酸序列具有80％以上同一性的氨基酸序列。
[0012]第二方面，本专利技术还提供了编码所述多肽的核酸分子。
[0013]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述核酸分子具有如下所示的序列：
[0014](1)、具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或
[0015](2)、具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的互补序列；或
[0016](3)、与(1)、(2)或(3)所示的核苷酸序列至少有95％同一性的核苷酸序列；
[0017]第三方面，本专利技术还提供了重组载体或表达盒，包括所述核酸分子。
[0018]第四方面，本专利技术还提供了转化或转染所述重组载体或表达盒的宿主细胞。
[0019]第五方面，本专利技术还提供了所述多肽、所述核酸分子、所述重组载体或表达盒或所述宿主细胞直接或间接在提高Nrf2蛋白稳定性中的应用。
[0020]第六方面，本专利技术还提供了所述的多肽、所述核酸分子、所述重组载体或表达盒或所述宿主细胞直接或间接在制备预防和/或治疗与Nrf2通路相关的疾病的药物中的应用。
[0021]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述与Nrf2通路相关的疾病包括但不限于：氧化应激与炎症、肿瘤、衰老、细胞损伤或生育中的一种或多种。
[0022]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述细胞损伤包括神经损伤；所述神经损伤包括视神经损伤相关疾病。
[0023]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述视神经损伤相关疾病包括但不限于常染色体显性视神经萎缩、Leber
’
s遗传视神经病变、缺血性视神经病变或青光眼。
[0024]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述视神经损伤相关疾病为急性视神经损伤或慢性视神经损伤。
[0025]第七方面，本专利技术还提供了药物，包括所述多肽、所述核酸分子、所述重组载体或表达盒或所述宿主细胞，以及药学上可接受的辅料。
[0026]第八方面，本专利技术还提供了药物组合，包括所述多肽、所述核酸分子、所述重组载体或表达盒或所述宿主细胞，以及其他任意有效成分。本领域的技术人员在本专利技术提供的所述药物基础上，与其他任意有效成分组合制得的药物组合，均在本专利技术的保护范围之内。
[0027]第九方面，本专利技术还提供了药物制剂，包括所述多肽、所述核酸分子、所述重组载体或表达盒或所述宿主细胞，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0028]第十方面，本专利技术还提供了药物的递送方法，将所述药物、所述药物组合、所述药物制剂施用于动物体。
[0029]第十一方面，本专利技术还提供了提高Nrf2蛋白稳定性的方法，施用所述药物、所述药物组合、所述药物制剂。
[0030]第十二方面，本专利技术还提供了与Nrf2通路相关的疾病的治疗方法，施用所述药物、所述药物组合、所述药物制剂。
[0031]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述与Nrf2通路相关的疾病包括但不限于：氧化应激与炎症、肿瘤、衰老、细胞损伤或生育中的一种或多种。
[0032]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述细胞损伤包括神经损伤；所述神经损伤包括视神经损伤相关疾病。
[0033]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述视神经损伤相关疾病包括但不限于常染色体显性视神经萎缩(DOA)、Leber
’
s遗传视神经病变(LHON)、缺血性视神经病变或青光眼。
[0034]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述视神经损伤相关疾病包括急性视神经损伤或慢性视神经损伤。
[0035]本专利技术针对机体内Nrf2蛋白易降解，不稳定的特点，本专利技术提供了一种小分子多肽Neh2，与Nrf2竞争性结合KEAP1蛋白，增加Nrf2蛋白稳定性，提高Nrf2对下游基因调控作用，保护视神经性损伤。
附图说明
[0036]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0037]图1示构建多肽载体电泳图；其中，泳道1～5依次是该多肽载体的5个克隆的电泳图；
[0038]图2示构建多肽载体酶切鉴定图；其中，泳道1～5依次是该多肽载体5个克隆的酶切鉴定图；
[0039]图3示多肽质粒图谱；
[0040]图4示WB检测多肽载体表达结果；其中，泳道1：蛋白marker；泳道2：GFP载体；泳道3、4、5：多肽载体表达；
[0041]图5示多肽蛋白表达与定位图；
[0042]图6示HO
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1基因表达图。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多肽，其特征在于，其具有如下所示的序列：(I)、具有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列；和/或(II)、如(I)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)所述氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；和/或(III)、与(I)或(II)所述氨基酸序列具有80％以上同一性的氨基酸序列。2.编码如权利要求1所述多肽的核酸分子。3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子具有如下所示的序列：(1)、具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或(2)、具有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的互补序列；或(3)、与(1)、(2)或(3)所示的核苷酸序列至少有95％同一性的核苷酸序列。4.重组载体或表达盒，包括如权利要求2或3所述的核酸分子。5.转化或转染如权利要求4所述的重组载体或表达盒的宿主细胞。6.如权利要求1所述的多肽、如权利要求2或3所述的核酸分子、如权利要求4所述的重组载体或表达盒或如权利要求5所述的宿主细胞直接或间接在提高Nrf2蛋白稳定性中的应用。7.如权利要求1所述的多肽、如权利要求2或3所述的核酸分子、如权利要求4所述的重组载体或表达盒或如权利要求5所述的宿主细胞直接或间接在制备预防和/或治疗与Nrf2通路相关的疾病的药物中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述与Nrf2通路相关的疾病包括但不限于：氧化应激与炎症、肿瘤、衰老、细胞损...

【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，刘婷，
申请(专利权)人：武汉纽福斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：