适用于诊断肝炎病的ＤＮＡ序列和编码多肽制造技术

分离出的新ｃＤＮＡ克隆２０Ｅ，其特征为它编码一个以前未知的，由带非甲非乙肝炎（ＮＡＮＢＨ）的特定的患者的血清中的抗体识别的多肽抗原。在丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的基因组中没有该核酸序列。在人基因组中也没有该核酸序列。资料表明，相当于克隆２０Ｅ的ＲＮＡ序列被包含在一个外部感染因子的基因组中而不是ＨＣＶ，因此可以代表一个附加的病原因子，或者说是人类患者中ＮＡＮＢＨ流行的散播因子。因此２０Ｅ核酸和相应的多肽及其不同的变异体在各种针对预防和诊断ＮＡＮＢＨ的方法中是有用的。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种DNA序列和编码多肽，其中编码多肽表示一种可由带非甲非乙(NonA NonB)肝炎的某些患者体内的抗体特异性认别的抗原。具体说来，本专利技术涉及在丙型肝炎(hepatitis C)病毒的基因组中没有的核酸序列和编码多肽。可将本专利技术的核酸和编码多肽用于非甲非乙肝炎的各种检测。有关对甲型肝炎(Hepatitis A)和乙型肝炎(Hepatitis B)病毒特异和敏感的免疫诊断检测方法的发展导致鉴别出数种被统称之为非甲非乙型肝炎(NANBH或NANB肝炎)的综合症(由Hollinger综述的，Non-A Non B Hepatitis.InFields and Knipe，eds.Virology，2nd Ed.New York;Raven Press，pp2239-73，1990)。一种综合症已明显地与输血或其他经皮下处理有关，称其为非甲非乙输血后肝炎(Non-A Non B Post-Transfusion Hepatitis)(NANBPTH)。另一综合症流行学上与粪便-口污染有关，称之为肠非甲非乙肝炎。由于未认别出感染途径，而称第三种综合症为散发性NANBH。分子病毒学领域的应用技术被用来鉴别一种与NANBPTH有关的新的病毒因子(丙型肝炎病毒)(Kuo et al.，Science 244362(1989))，以及一种与肠NANBH有关的新的病毒因子(E型肝炎病毒)(Reyes et al.，Science 247133(1990))。人们已经进行过与NANBPTH传染有关的，来自浓缩的血液产品或血浆的类似病毒的颗粒的生物物理和生物化学特征描述。这些研究表明，存在直径为25-40nm的包封病毒颗粒，若用有机溶剂处理，其感染性消除(Bradley et al.Gastroenterology 88773(1985))，另外也单独观察到直径平均27nm的非包封类似病毒，或与上述的包封颗粒相联合(Bradley et al.J.Med.Virol.(1979))。使用交叉刺激研究说明不止一种类型的病毒因子可以引起NANBPTH(Bradley et al.，J.Med.Virol.6185(1980);Hollinger et al.，J.Infect.Dis.142400(1980);Yoshizawa et al.，Gastroenterology 81107(1981))。已经表明在受NANBPTH感染的黑猩猩和人血浆中发现的RNA分子克隆，存在与包封黄热病病毒或鼠疫病毒的基因组结构相似的约10Kb的病毒基因组(Houghton et al.，EPO申请No.88310922.5(1988);Houghton et al.，EPO申请No.90302866.0(1990);Arima和Fukai，EPO申请No.89309261.9(1989);Choo et al.，Science 244359(1989);Okamoto et al.，Japan J.Exp.Med.60167(1990);Kato et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA879524(1990))，并参见Miller and Purcell，Proc.Natl.Acad.Sci.USA872057(1990)。称这种新病毒类型为丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus)(HCV)，且最后在约60-80%的NANBPTH患者中发现了抗该病毒编码蛋白质的抗体(Alter et al.，New Engl.J.Med.3211494(1989);Esteban et al.，New Engl.J.Med.3231107(1990)。Maeno et al.，Nucl.Acid.Res.182685(1990))。还没有研究出清楚说明HCV为NANBPTH根原与Koch's假设一致的感染性数据，然而，可以得出一个相关的论点许多NANBPTH的引起与HCV感染有关。虽然已经广泛地接受用HCV作为一种诊断NANBPTH的有力标记物，但仍不清楚是否其它病毒因子也能引起这种综合症，以及在被认为是散发NANBH的情形中，HCV起什么作用。包括本专利技术人之一的(T.A.)的几个研究人员已经分辨出了编码与来自NANBPTH患者的血清反应的多肽的cDNA序列，该cDNA序列在HCV和其变异体的已知序列中没有(Arima et al.，Gastroenterology Jpn.24540(1989);Arima et al.，Gastroenterology Jpn.24545(1989);Arima et al.，Gastroenterology Jpn.24685(1989);Arima et al.，Gastroenterology Jpn.25218(1990);Arima和Fukai，EPO申请No.89309261.9(1989))。这些cDNA明显地不由人基因组编码，因此对肝炎病态不具宿主特异性应答。虽然已经确立了它们在诊断中的效用，但仍不清楚它们的来源和与病程的关系。申请人从NANBH患者的血浆成分制备核酸。通过物理和化学方法，使这些成分富集病毒和类似病毒颗粒。将提取的核酸转变成双链互补DNA(cDNA)并将其导入到λ噬菌体的衍生物中，然后筛选这些含有来自NANBH患者的重组DNA的λ噬菌体，生产能与NANBH患者的血液所含的抗体反应的重组编码蛋白质。发现称作20E的重组噬菌体包含编码多肽序列的重组DNA插入序列，该多肽序列能与NANB肝炎患者中得到的特定血清发生特异性反应。该多肽抗原检测存在于几个NANB肝炎患者血液中的抗体，并看来在该疾病的检测和筛选中有效用。克隆20E的核苷酸序列和它编码的多肽与被认为引起大多数NANB肝炎病例的病毒(即HCV)无关。另外，看来在人染色体DNA中不含有克隆20E的核苷酸序列。以后的研究结果表明克隆20E包含在与NANB肝炎而不是丙型肝炎病毒相连系的一个外部感染因子的染色体中，因此，它可代表在人类患者中传播NANB肝炎的附加的病原因子或促进因子。本专利技术另一方面，申请人描述了各种检测患者样品中抗-20E多肽抗体和20E-相关的核酸的免疫诊断和探针检测方法。通过在重组噬菌体或重组质粒载体相容的宿主细胞中表达或通过化学合成来生产上述的20E多肽。将抗由克隆20E表示的因子的保护性疫苗配成包括一种或多种在20E多肽中代表的免疫诊断抗原决定基的组合物。此外，用本领域技术人员已知的技术很容易生产直接抗一种或多种20E多肽的免疫诊断抗原决定基的多克隆或单克隆抗体。上述抗体或其活性片段被用作抗由克隆20E代表的因子的被动免疫试剂。另外，位于本专利技术描述的那些DNA序列侧面的DNA序列将在诊断NANBH和其它疾病中有效用。用标准技术可以容易地分离出这些附加序列得出克隆20E序列。附图说明图1(A)从含有用野生型λgt11克隆20E感染的大肠杆菌的细菌盘中揭下的，并与患NANB肝炎患者处采集的血浆反应的膜。通过生色酶反应检测与膜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纯化和分离的ＤＮＡ分子，包含编码具有多肽免疫诊断效用的多肽的ＤＮＡ序列，该序列在序列表中定义为ＳＥＱＩＤＮＯ∶６。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：TE瑞安，B赛义德，MK基塞尔堡，PE伯恩，PW斯蒂芬斯，T阿里马，JA托德，
申请(专利权)人：巴克斯特诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]