Including the quantitative detection method, the case involving heparin: 1) using gold electrode as the working electrode, the gold electrode pretreatment; 2) polypeptide modified on the surface of the gold electrode; 3) will 6-mercapto-1-hexanol modified on the surface of the gold electrode for the gold electrode surface of the unmodified peptide on the occupying 4); the gold electrode inserted into the reaction liquid, and collecting the corresponding electrochemical impedance spectroscopy, calculate the impedance value; 5) according to the corresponding relationship between the impedance value and the concentration of heparin, the concentration of liquid in heparin; among them, the polypeptide sequence is CGSGRKRLQVQLSIRT. Detection method for heparin in this case has the characteristics of high sensitivity, good specificity, anti-jamming and low cost, the detection limit is 0.01 g/mL, by combining the design of specific peptides with electrochemical technology, application of heparin biosensor can be achieved.
【技术实现步骤摘要】
肝素的定量检测方法
本专利技术涉及一种肝素的定量检测方法,特别涉及一种基于特异性多肽修饰的对肝素的电化学检测方法。
技术介绍
肝素是一种天然存在的含高电荷密度的聚阴离子的生物大分子,是糖胺聚糖(GAG)家族中最结构复杂的成员。肝素通过与凝血酶抑制剂如抗凝血酶III(ATIII)的相互作用而在血液凝固级联中起静脉内抗凝剂作用。因此,肝素被认为是临床中广泛使用的预防和治疗剂,特别是作为医学上用于手术的抗凝血剂。传统的血液中的肝素浓度检测方法(例如aPTT技术、抗Xa测定法或血栓粘度计(TEG))存在一些难题,如成本昂贵,灵敏度低,有些不能提供精确定量的信息等。近年来,电化学技术发展迅速,具有许多优点,如高灵敏度、快速响应和使用价格低廉的仪器和试剂。而与此同时,多肽由于其对特异性分析物具有强的结合力、高生物相容性和在水溶液中的高溶解度而被广泛用于生物传感器。因此本专利技术开发出了一种选择性高、敏感性高的检测肝素的新方法。
技术实现思路
针对现有技术中存在的技术问题,本案提供一种肝素的定量检测方法,采用电化学的方法,在金电极上修饰多肽后,浸入待测试样品中,样本中的肝素会与之结合,并且发生电化学阻抗谱(EIS)的响应,可通过电化学工作站读出交流阻抗信息,经分析,其与肝素浓度在一定的浓度范围内存在线性关系,检测限为0.01μg/mL,远低于临床需要的肝素水平。此外,特异性多肽的结合显示出很高的亲和力,并且不受其他生物分子的干扰。所提出的方法也适用于人类全血中的肝素测量。为实现上述目的,本案通过以下技术方案实现:一种肝素的定量检测方法,其包括:1)以金电极作为工作电极,对金 ...
【技术保护点】
一种肝素的定量检测方法,其特征在于,包括:1)以金电极作为工作电极,对金电极进行预处理;2)将多肽修饰于所述金电极表面;3)将巯基己醇修饰于所述金电极表面,用于对未修饰上多肽的金电极表面进行占位;4)将所述金电极插入待测液中进行反应,并采集相应电化学阻抗谱,计算阻抗值;5)根据阻抗值与肝素浓度的对应关系,获得待测液中肝素的浓度;其中,所述多肽序列为CGSGRKRLQVQLSIRT。
【技术特征摘要】
1.一种肝素的定量检测方法,其特征在于,包括:1)以金电极作为工作电极,对金电极进行预处理;2)将多肽修饰于所述金电极表面;3)将巯基己醇修饰于所述金电极表面,用于对未修饰上多肽的金电极表面进行占位;4)将所述金电极插入待测液中进行反应,并采集相应电化学阻抗谱,计算阻抗值;5)根据阻抗值与肝素浓度的对应关系,获得待测液中肝素的浓度;其中,所述多肽序列为CGSGRKRLQVQLSIRT。2.如权利要求1所述的肝素的定量检测方法,其特征在于,对金电极进行预处理包括:将金电极在修饰前浸泡于水虎鱼洗液中,以除去电极表面吸附的杂质;其中,以体积比为计,所述水虎鱼洗液的组成为98%H2SO4∶30%H2O2=3∶1。3.如权利要求2所述的肝素的定量检测方法,其特征在于,对金电极进行预处理还包括:将金电极用碳化硅砂纸打磨至呈镜面光滑,随后将金电极分别在乙醇和蒸馏水中超声清洗。4.如权利要求3所述的肝素的定量检测方法,其特征在于,对金电极进行预处理还包括:将金电极用0.5MH2SO4溶液清洗,随后用氮...
【专利技术属性】
技术研发人员:缪鹏,孟凡渝,梁伟国,孙海旋,王弼陡,杨大威,
申请(专利权)人:中国科学院苏州生物医学工程技术研究所,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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