一种新的多肽--人锌指蛋白49和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白４９，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白４９的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人锌指蛋白49，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。锌指蛋白为编码锌离子介导的核苷酸结合蛋白多基因家族中的成员，其在生物体内具有十分重要的生理学功能，参与调控各种基因在体内的转录与表达。研究发现，锌指蛋白家族的成员在不同生物的各种组织中均有表达，这些组织包括造血细胞、脑、神经系统、各种与肿瘤相关的组织和无限增殖细胞系组织等，它们在这些组织的基因表达过程中均起着极为重要的作用。锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.,1998)。人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种构型的锌指蛋白，其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.,1995)。C2H2型锌指蛋白与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病。C2H2型锌原子结合结构域最早在蛋白转录因子ⅢA中被得到，是真核生物转录因子中分布最广的DNA结合结构域。C2H2型锌指蛋白的蛋白序列中均含有下列保守的序列特征(Tyr,Phe)-X-Cys-X(2,4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3,5)-His(其中X表示任意氨基酸残基；半胱氨酸与组氨酸与锌原子形成配位键，结合锌原子；其它三个保守的氨基酸残基形成疏水性中心区域；其它变化的氨基酸残基负责介导蛋白与其它分子的相互作用)。一个锌指蛋白可能含有一个或多个锌指结构域，这些结构域在生物体内独立完成自己的生理学功能。在很多情况下，含有锌指结构域的蛋白与特殊的双链及单链DNA序列相互作用，起着转录调节因子的作用。现有研究发现，C2H2类型的锌指结构域不仅在一些组织的基因表达过程中起重要的调节作用，其在发育调节过程亦起着非常关键的作用。PHD锌指结构域是一种C4HC3型锌指结构相似的结构基序，最早在核蛋白中被发现。现已发现在多种不同的蛋白中均含有这一结构基序，这些蛋白在生物体内均参与各种染色质介导的转录调控过程。PHD结构域通常在蛋白作用过程中涉及蛋白与DNA、RNA的相互作用，其在生物体一些多组分复合物的聚集及活化过程中起着极为重要的作用，直接调控着染色质结构的形成。而染色质的结构又直接影响着一些基因的转录与表达过程。该结构基序由如下所示的一致性序列片段组成C(X){1,2}C(X){5,45}(V,W,F,L,W,I,E)XC(X){1,4}C(X){1,4}(W,Y,F,V,Q,H,L,T)HXXC(X){5,45}(W,F,L,Y,I)XCXXC；该一致性序列片段亦是蛋白发挥生理学功能的重要作用位点，其与C4HC3锌指结构域相似，通过与两个锌离子结合以形成具有活性的构象。该序列片段在生物体内通过调节相关蛋白的相互作用来调控一些基因的表达，从而影响相关组织细胞的增殖及分化。研究发现，该结构域在生物体的发育过程起着重要的作用，其突变将导致蛋白的功能异常，通常与一些相关组织的生长、发育紊乱性疾病及白血病等血液系统疾病的发生相关。生物体的繁衍与生长发育是一个非常复杂的过程，由多种不同的调控步骤来共同协调完成，其中的任何一步出现问题都将导致发育及生长紊乱，从而引发各种相关的疾病。在生物体细胞增殖过程中还存在着一类细胞增殖抑制蛋白，该类蛋白在细胞增殖过程中控制着各种基因及细胞增殖的量。这类蛋白的蛋白序列中均含有一重要的功能性结构域-----MYND结构域。该结构域在生物体内与蛋白的其它组成成分协同作用，以调控一些基因的转录与表达及生物生长发育过程中各组织细胞的增殖。其主要作用位点的突变通常将导致一些基因在体内的表达异常及相关组织细胞的异常增殖，从而引发相关组织的恶性疾病，如肿瘤及癌症等。本专利技术的新的人锌指蛋白同时含有C2H2型锌指结构域、PHD锌指结构域和MYND结构域。这三个结构功能基序在蛋白作用过程中协同作用，以调控各种基因在体内的转录与表达及相关组织细胞的分化与增殖。该蛋白的表达异常将导致相关组织的发育、生长异常，通常与生物体一些发育紊乱性疾病、相关组织的肿瘤及癌症的发生相关。其还可用于上述疾病的诊断与治疗。由于如上所述人锌指蛋白49蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白49蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白49蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白49以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白49的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白49的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白49的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人锌指蛋白49的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人锌指蛋白49的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白49异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO:1中205-1545位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1624位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白49蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白49蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白49表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白４９，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博道基因技术有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]