一种新的多肽——人锌指蛋白44和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白４４，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如各种肿瘤、神经系统疾病、血液性恶性疾病、发育紊乱症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白４４的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人锌指蛋白44，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。存在着很大一类蛋白，它们的蛋白序列中均含有一个至多个锌原子结合结构域，这类蛋白在生物体内参与各种蛋白与核酸、蛋白与蛋白间的相互作用，它们通常作为转录因子及信号传导分子参与相关组织基因的表达与调控，这类蛋白构成了一个很大的蛋白家族，被称为锌指蛋白。在人的基因组中约含有300到700个锌指蛋白，这些锌指蛋白在生物体内与核苷酸结合，发挥着许多重要的生物学功能，最重要的作用就是调节基因的转录与表达。研究发现，锌指蛋白在不同生物的各种组织中均有表达，这些组织包括造血细胞、脑、神经系统、各种与肿瘤相关的组织和无限增殖细胞系组织等。其在这些组织的基因转录与表达过程中起极为重要的调控作用。锌指蛋白的锌指结构主要有以下几种C2H2构型、C2C2构型、C2HC构型、C2HC4C构型、C3H构型、C3HC4构型(Dai KS et al.，1998)。其中含C2H2构型的锌指蛋白基因构成人类基因组最大的一族基因(Berker et al.，1995)。近些年，人们已从酵母、果蝇、鼠及人等多种生物体中分离得到了各种构型的锌指蛋白，并对这些锌指蛋白的生物学功能及其染色体定位等进行了深入地研究。C2H2型锌指蛋白与基因的转录活化及抑制有关，这些蛋白的表达异常将引发各种发育紊乱性疾病、各种肿瘤的发生、各种遗传性疾病及免疫系统疾病。C2H2型锌指蛋白的蛋白序列中均含有下列保守的序列特征(Tyr，Phe)-X-Cys-X(2，4)-Cys-X3-Phe-X5-Leu-X2-His-X(3，5)-His(其中X表示任意氨基酸残基；半胱氨酸与组氨酸与锌原子形成配位键，结合锌原子；其它三个保守的氨基酸残基形成疏水性中心区域；其它变化的氨基酸残基负责介导蛋白与其它分子的相互作用)。一个C2H2型锌指蛋白可能含有一个或多个如上所述的锌指结构域，这些结构域在生物体内独立完成自己的生理学功能。在很多情况下，含有锌指结构域的蛋白与特殊的双链及单链DNA序列相互作用，起着转录调节因子的作用。现有研究发现，C2H2类型的锌指结构域不仅在一些组织的基因表达过程中起重要的调节作用，其在生物体的发育调节过程亦起着非常关键的作用。在所有的C2H2型锌指蛋白中又有一部分蛋白，其蛋白序列中含有一果蝇分节基因相关的序列片段，这些蛋白构成了C2H2型锌指蛋白的Kruppel亚家族。所有的C2H2型锌指蛋白Kruppel亚家族的成员均含有如上所述的C2H2型锌指蛋白家族的保守的序列片段。这一序列在很多不同的锌指蛋白中均含有多个拷贝，其拷贝数不同(锌指个数不同)则功能也不同。锌指蛋白与不同长度的DNA的结合依赖于指结构的数量，多指结构可能与复合物的结合稳定性有关，而复合物是RNA聚合酶转录的作用位点。研究发现，许多锌指蛋白Kruppel亚家族的锌指结构域相互连接区域也是高度保守的，这一区域通常含有下列序列His-Thr-Gly-Gly-Lys-Pro-(Tyr，Phe)-X-Cys，其中组氨酸与半胱氨酸为金属离子的结合位点，而X为可变氨基酸残基。这一区域对于锌指结构的形成是必需的，指结构的数量将直接影响锌指蛋白与不同长度的DNA结合，且多指结构与复合物的结合稳定性有关。1991年，Rosati等人又从人中克隆得到了锌指蛋白ZNF41，该蛋白亦含有如上所述的C2H2型锌指蛋白家族的特征性锌指结构基序及Krupple型锌指蛋白亚家族的特征性序列片段，其为C2H2型锌脂蛋白Krupple蛋白亚家族的新成员，并与该蛋白家族中的其它成员具有相似的结构及功能特征。另外，该蛋白氨基酸序列的N末端还含有一保守的指结构盒结构片段---FPB，该盒结构由FPB-A和FPB-B组成，其在生物体内亦与锌指结构区域协同作用，调控多种重要的生物学反应的进行。该蛋白在生物体内参与调控多种相关组织的基因的转录与表达，其突变或表达异常将直接影响相关的基因在体内的表达，进而引发各种相关的发育及代谢紊乱性疾病。该蛋白在生物体内通常与一些胚胎发育紊乱性疾病、神经系统疾病、免疫系统疾病及相关组织的恶性紊乱性疾病，如肿瘤及癌症等疾病的发生密切相关。其还可用于诊断及治疗上述各种相关的疾病。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人锌指蛋白41的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人锌指蛋白44。由于如上所述人锌指蛋白44蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白44蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白44蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白44以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白44的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白44的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白44的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人锌指蛋白44的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人锌指蛋白44的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白44异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中15-1214位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1645位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白44蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白44本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白４４，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]