一种新的多肽--人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人锌指蛋白相似的Ｒ１ｆ蛋白２３．１，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如胚胎发育紊乱症、生长发育障碍性疾病、肿瘤等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人锌指蛋白相似的Ｒ１ｆ蛋白２３．１的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。R1f蛋白与Zn-15锌指蛋白在序列上非常相似，参与转录调节过程。RLF全长cDNA含有6000多对碱基，包含一个短的5’端非翻译区域。起始密码子ATG之后的长开放阅读框编码一条含有1914个氨基酸残基的多肽，即为R1f蛋白。R1f蛋白包含一个亮氨酸拉链结构域(Landschulz et al.，1988)，该段结构通常能够参与二聚化作用或蛋白与蛋白相互作用。R1f还包含6个锌指结构域，通常在DNA或RNA结合蛋白中发现(Rhodes and Klug，1993)，锌指结构域在R1f蛋白上占据了很广泛的区域。序列比较显示，R1f蛋白与Zn-15锌指蛋白(Lipkin et al.，1993)较为相似。Zn-15存在15个锌指结构域，是一种转录因子，与Pit-1一起，对于生长激素基因的转录活化起到一定的调节作用，其15个锌指结构域中，只有3个涉及DNA结合作用。将两者进行比较，R1f与Zn-15具有50％的相似序列以及30％的相同序列，表明Zn-15的DNA结合和转录活化功能在R1f中也可能存在。但Zn-15也包含一些区域与R1f蛋白不同源，另外，R1f蛋白的锌指区域之前还包含一个长的N末端区域，在Zn-15蛋白中不存在。尽管如此，R1f与Zn-15组成一个新的家族，具有相似的锌指空间分布，属于锌指转录因子超家族。Northern blot实验显示，RLF的mRNA在肌肉、肝、脑和脾中含量最高(6.7Kb)，除了肺以外，在成人的所有其它组织中都有一定水平的表达。但是，在婴儿的肺中也发现有RLF的mRNA表达，说明从胚胎发育到成熟阶段，肺中的RLF表达是下调节的。L-myc原癌基因的扩大与小细胞肺癌相关(Nau et al.，1985)，在一些情况下，这种扩大作用伴随着1p32位置的染色体内重排，使得L-myc基因与RLF基因发生融合(Hellsten et al.，1991b，1992a，1995；Sekido et al.，1992)，形成重排RLF-L-myc融合基因。重排L-myc融合基因在SCLC细胞中参与生长的优化，引起L-myc正常的严格的控制表达的解调节作用。变更的L-Myc蛋白的N末端能够影响L-Myc蛋白的活化，该蛋白的N末端具有转录活性区域(K Saksela)。本专利技术的多肽与上述锌指蛋白相似的R1f蛋白有56％的相同性，78％的相似性，并且包含锌指蛋白家族特征性的保守序列，因此认为此蛋白是一种新的DNA结合相关蛋白，在细胞内参与转录调节作用，具有与R1f蛋白相似的生物学功能，并命名为人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1。由于如上所述人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中146-778位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-2148位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人锌指蛋白相似的R1f蛋白23.1表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人锌指蛋白相似的Ｒ１ｆ蛋白２３．１，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]