一种基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法技术

本发明专利技术提供了一种基于混合抗体的α1‑AT免疫比浊法检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。试剂R1包括HEPES、NaOH、EDTA‑Na

【技术实现步骤摘要】
一种基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法
本专利技术涉及基因工程及免疫学测定分析领域，尤其涉及一种基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法。
技术介绍
α1抗胰蛋白酶(α1-AT)是一种糖蛋白，含糖10％-20％，主要由肝脏合成，广泛分布于正常人血清和体液中。α1抗胰蛋白酶是血清中最主要的蛋白酶抑制剂，对凝血酶、尿激酶等其他酶也有抑制作用。α1抗胰蛋白酶也是一种急性时相反应蛋白，在炎症性疾患时，α1抗胰蛋白酶可透过毛细血管进入组织液，在炎症局部往往浓度很高，对急性炎性疾病有一定限制作用。目前，检测α1-AT的方法主要有抗原抗体反应和酶速率法两种。其中，酶速率法检测灵敏度不够，临床检测出现较大偏差，且重复性和稳定性较差，临床难以推广应用。二十世纪九十年代，免疫比浊法作为一种均相测定方法开始用于α1-AT测定的常规研究，该方法可于生化仪自动化检测，便于临床检验使用。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体的制备，是利用特定抗原处理过的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞，经HAT培养基筛选、ELISA检测效价后就得到阳性克隆株，最后进行细胞培养获将细胞注入到动物腹腔中腹水培养，收集上清液/腹水纯化后就得到单克隆抗体。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体。多克隆抗体的制备，是将抗原直接注入到动物体内进行免疫，经过3-4次免疫，ELISA检测其效价合格后，收集血液离心得到上清液，纯化后即得到多克隆抗体。目前临床中应用的α1-AT的免疫比浊法检测试剂盒，从抗体使用角度，又可分为“多克隆抗体”试剂盒和“单克隆抗体”试剂盒两大类。实际应用发现，多克隆抗体类试剂存在检测特异度较差的问题，而单克隆抗体类试剂存在灵敏度较差的问题。其中，单克隆抗体特异性较高，它能专一性的识别某一特定抗原表位，但它对抗原检测具有低的灵敏度。而多克隆抗体，则正好能与单克隆抗体进行互补，其高灵敏度能够弥补单克隆抗体的低灵敏度问题，但却存在检测特异度差的问题。据此，目前急需一种同时采用高特异性的单克隆抗体与高敏度的多克隆抗体的基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法，从而提高对试剂盒样本检测的特异性以及灵敏度。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种同时采用高特异性的单克隆抗体与高敏度的多克隆抗体的基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法。本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：一种基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；所述试剂R1包括的成分及相应含量为：HEPES20-30g/L，NaOH0.2-0.8g/L，NaCl5-10g/L，EDTA-Na21-1.2g/L，PEG-600010-20g/L，PEG-80005-10g/L，吐温200.1-0.6％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水；所述试剂R2包括的成分及相应含量为：NaH2PO4·2H2O1-2g/L，Na2HPO4·12H2O6-10g/L，NaCl5-10g/L，EDTA-Na21-1.2g/L，BSA1-5g/L，抗α1-AT混合抗体1-20％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水；其中，所述抗α1-AT混合抗体由抗α1-AT单克隆抗体I、抗α1-AT单克隆抗体II以及抗α1-AT多克隆抗体III混合而成。作为本专利技术的优选方式之一，所述抗α1-AT混合抗体中，抗α1-AT单克隆抗体I的含量为0.5-2mg/mL，抗α1-AT单克隆抗体II的含量为0.1-1mg/mL，抗α1-AT多克隆抗体III的浓度为0.1-1mg/mL。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R1包括的成分及相应含量具体为：HEPES23.83g/L，NaOH0.4g/L，NaCl9.0g/L，EDTA-Na21.1g/L，PEG-600015g/L，PEG-80008g/L，吐温200.5％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水。作为本专利技术的优选方式之一，所述试剂R2包括的成分及相应含量具体为：NaH2PO4·2H2O1.48g/L，Na2HPO4·12H2O9.71g/L，NaCl9.0g/L，EDTA-Na21.1g/L，BSA2.4g/L，抗α1-AT混合抗体10％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水。作为本专利技术的优选方式之一，还包括α1-AT校准品；所述α1-AT校准品包括的成分及相应含量为：NaH2PO4·2H2O1-2g/L，Na2HPO4·12H2O6-10g/L，BSA5-10g/L，海藻糖0.4-4g/L，α1-AT蛋白0.1-20g/L，NaN30.01g/L，甘油5-15％，其溶剂为纯化水。作为本专利技术的优选方式之一，所述α1-AT校准品包括的成分及相应含量具体为：NaH2PO4·2H2O1.48g/L，Na2HPO4·12H2O9.71g/L，BSA8g/L，海藻糖2g/L，α1-AT蛋白10g/L，NaN30.01g/L，甘油10％，其溶剂为纯化水。作为本专利技术的优选方式之一，所述抗α1-AT混合抗体中的抗α1-AT单克隆抗体I、抗α1-AT单克隆抗体II、抗α1-AT多克隆抗体III以及α1-AT校准品中的α1-AT蛋白均为本领域内可直接购买得到的常规产品。其中，抗α1-AT单克隆抗体I与抗α1-AT单克隆抗体II，只要是能与α1-AT特异性结合的单克隆抗体，即可。抗α1-AT多克隆抗体III则优选为兔抗α1-AT多克隆抗体。一种上述基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)抗α1-AT混合抗体的制备准备两株抗α1-AT的单克隆抗体与一株抗α1-AT多克隆抗体，即抗α1-AT单克隆抗体I、抗α1-AT单克隆抗体II以及抗α1-AT多克隆抗体III；将所述抗α1-AT单克隆抗体I、抗α1-AT单克隆抗体II以及抗α1-AT多克隆抗体III进行混合制成抗α1-AT混合抗体，并使得所述抗α1-AT混合抗体中，抗α1-AT单克隆抗体I的含量为0.5-2mg/mL，抗α1-AT单克隆抗体II的含量为0.1-1mg/mL，抗α1-AT多克隆抗体III的含量为0.1-1mg/mL；(2)α1-AT免疫比浊法试剂盒校准品的制备①配制试剂R1：按照试剂R1的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得试剂R1；②配制试剂R2：按照试剂R2的组分含量，将步骤(1)制得的抗α1-AT混合抗体以及余下的其他组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得试剂R2；③配制α1-AT校准品：α1-AT校准品的相应成分及相应含量为：NaH2PO4·2H2O1-2g/L，Na2HPO4·12H2O6-10g/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；/n所述试剂R1包括的成分及相应含量为：HEPES 20-30g/L，NaOH 0.2-0.8g/L，NaCl 5-10g/L，EDTA-Na

【技术特征摘要】
1.一种基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：HEPES20-30g/L，NaOH0.2-0.8g/L，NaCl5-10g/L，EDTA-Na21-1.2g/L，PEG-600010-20g/L，PEG-80005-10g/L，吐温200.1-0.6％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水；
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：NaH2PO4·2H2O1-2g/L，Na2HPO4·12H2O6-10g/L，NaCl5-10g/L，EDTA-Na21-1.2g/L，BSA1-5g/L，抗α1-AT混合抗体1-20％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水；
其中，所述抗α1-AT混合抗体由抗α1-AT单克隆抗体I、抗α1-AT单克隆抗体II以及抗α1-AT多克隆抗体III混合而成。


2.根据权利要求1所述的基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述抗α1-AT混合抗体中，抗α1-AT单克隆抗体I的含量为0.5-2mg/mL，抗α1-AT单克隆抗体II的含量为0.1-1mg/mL，抗α1-AT多克隆抗体III的浓度为0.1-1mg/mL。


3.根据权利要求1所述的基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括的成分及相应含量具体为：HEPES23.83g/L，NaOH0.4g/L，NaCl9.0g/L，EDTA-Na21.1g/L，PEG-600015g/L，PEG-80008g/L，吐温200.5％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水。


4.根据权利要求1所述的基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2包括的成分及相应含量具体为：NaH2PO4·2H2O1.48g/L，Na2HPO4·12H2O9.71g/L，NaCl9.0g/L，EDTA-Na21.1g/L，BSA2.4g/L，抗α1-AT混合抗体10％，NaN30.01g/L，其溶剂为纯化水。


5.根据权利要求1-4任一所述的基于混合抗体的α1-AT免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，还包括α1-AT校准品；所述α1-AT校准品包括的成分及相应含量为：NaH2PO4·2H2O1-2g/L，Na2HPO4·12H2O6-10g/L，BSA5-10g/L，海藻糖0.4-4g/L，α1-AT蛋白0.1-20g/L，NaN30.01g/L，甘油5-15％，其溶剂为纯化水。


6.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮双印，高耀辉，
申请(专利权)人：安徽大千生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34