【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经改良的免疫亲和富集法和质谱法
本公开涉及通过免疫亲和富集和质谱法检测和定量蛋白质的领域。
技术介绍
质谱法(MS)正日益成为选择用于测定蛋白质丰度和翻译后修饰的检测方法。免疫沉淀(IP)通常在MS的上游用作低丰度蛋白质靶标的富集工具。参见Gingras等人,《自然综述：分子细胞生物学(Nat.Rev.Mol.Cell.Biol.)》,2007年8月,8(8),645-54；和Carr,S.A.等人,《分子细胞蛋白质组学(Mol.Cell.Proteomics)》,2014年3月,13(3),907-17。还可以使用在MS的上游富集感兴趣的蛋白质的另外的方法。参见例如Lin等人,《蛋白质组研究杂志(J.ProteomeRes.)》,2013年12月6日；12(12)；5996-6003；Schwertman等人,《分析生物化学(AnalyticalBiochemistry)》,第440卷,第2期,2013年9月15日,227-236；以及Rafalko等人,《分析化学(Anal.Chem.)》,2010,82(21),899
【技术保护点】
1.一种用于检测生物样品中的一种或多种靶蛋白的方法，所述方法包括：/na.通过使所述一种或多种靶蛋白与固相载体结合来从生物样品中富集所述一种或多种靶蛋白；/nb.通过以下过程使所富集的一种或多种靶蛋白片段化：/ni.在与所述固相载体结合的同时通过第一酶消化处理所述所富集的一种或多种靶蛋白，/nii.在单个反应容器中还原并烷基化经过消化的一种或多种靶蛋白，以及/niii.在第二酶消化中消化经过还原、烷基化和消化的一种或多种靶蛋白，其中任选地允许所述第二酶消化进行达到18小时；/nc.检测所述样品中的一种或多种靶蛋白。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180227 US 62/636,0061.一种用于检测生物样品中的一种或多种靶蛋白的方法，所述方法包括：
a.通过使所述一种或多种靶蛋白与固相载体结合来从生物样品中富集所述一种或多种靶蛋白；
b.通过以下过程使所富集的一种或多种靶蛋白片段化：
i.在与所述固相载体结合的同时通过第一酶消化处理所述所富集的一种或多种靶蛋白，
ii.在单个反应容器中还原并烷基化经过消化的一种或多种靶蛋白，以及
iii.在第二酶消化中消化经过还原、烷基化和消化的一种或多种靶蛋白，其中任选地允许所述第二酶消化进行达到18小时；
c.检测所述样品中的一种或多种靶蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述通过使一种或多种靶蛋白与固相载体结合来从生物样品中富集所述一种或多种靶蛋白包括用能够从生物样品中免疫亲和富集所述一种或多种靶蛋白的至少一种抗体处理所述生物样品。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测样品中的一种或多种靶蛋白包括通过质谱法测定经过片段化的一种或多种蛋白质，以确定所述一种或多种靶蛋白中至少一种肽的存在与否。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述肽的长度为小于或等于40个氨基酸。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测样品中的一种或多种靶蛋白包括ELISA、蛋白质印迹法、珠基多分析物分析、基于荧光的成像或基于化学发光的成像。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶消化和/或所述第二酶消化包括用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、AspN、GluC、LysC、LysN、ArgC、蛋白酶K、胃蛋白酶、梭菌蛋白酶、弹性蛋白酶、GluCbiocarb、LysC/P、LysNpromisc、蛋白质内肽酶、葡萄球菌蛋白酶或嗜热菌蛋白酶进行消化。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶消化和/或所述第二酶消化包括用胰蛋白酶进行消化。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一酶消化和/或所述第二...
【专利技术属性】
技术研发人员：B·B·帕特尔，J·C·罗杰斯，P·J·詹森，
申请(专利权)人：皮尔斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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