层析用试验片及其制造方法技术

一种免疫层析用试验片（１０），如图１所示，由备有样品导入部（１２）、标记部（１３）和固定化部的基材（１１）构成。基材（１１）由浸含有检测对象物质的样品液的材料形成。这些材料可以通过毛细管现象将样品液的溶剂展开。样品导入部（１２）是导入（例如滴下）含有检测对象物质的样品的区域，负载着金属盐。在标记部（１３）中含有可洗脱到样品液中状态的标记抗体（１５）。用标记物质标记的标记抗体（１５）使用可与检测物质特异结合的抗体。在固定化部（１４）上固定固定化抗体（１６）。固定化抗体（１６）使用与检测对象物质特异结合的抗体。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及对于样品液中特定成分能够简便地进行迅速而且高精度的定量的层析用试验片。
技术介绍
以往，作为对样品液中的特定成分不进行样品液的稀释或搅拌等而简易定量方法有干式化学法。所谓干式化学法是将液体状的样品滴到以干燥状态保存在薄膜、试纸那样的固相基质中试剂上，对样品液中的检测对象物质进行测定的方法。作为干式化学法中使用的装置，有使试剂负载在滤纸的单层式以及使展开层、反应层、试剂层等层叠的多层式。无论哪一种装置，由于试剂已经负载到固相基质上，都具有不需要制备试剂、可以保存在小的空间、需要的样品液量很少的特征。作为代表性的干式化学检查法，如利用抗原抗体反应和毛细管现象的检查法即免疫层析(例如，特开平10-73592号公报记载)。作为免疫层析中使用的装置，有如下试验片，即，由在以膜滤片为代表的浸渍含样品液的溶剂的材料构成的固相基质上，分别以干燥状态负载了被固定的抗体(以下略称为固定化抗体)和用标记物质标记的抗体(以下略称为标记抗体)的试验片。测定时，就象图5(a)所表示的那样，如果将含有检测对象物质104的样品液由试验片的一端导入的话，就象图5(b)所表示的那样，由于毛细管现象样品液到达含有可洗脱到样品液中状态的标记抗体105的标记部102，在那里通过抗原抗体反应形成标记抗体105和检测对象物质104的混合物107。然后就象图5(c)所表示的那样，形成的复合物107沿着由于样品液的毛细管现象形成的液流，到达负载了固定化抗体106的固定化部103，在那里通过抗原抗体反应被捕获在固定化抗体106上。复合物107以外的物质沿着毛细管现象的液流，通过固定化部103，所以在固定化部103只剩下了复合物108。因此，通过对来自标记物质105的输出，可以进行样品液中检测对象物质104的检测或浓度的测定。作为抗原抗体反应的状态，除了夹层型的反应以外，还有利用竞争型反应的免疫层析法，试验片的构造和测定的方法是同样的。作为使用免疫层析法的测定方法的优点，除了上述的干式化学法带来的优点外，还有操作简便、判定迅速、以及测定的费用低等优点。因此不止适用于临床检查，也适用于在近年受到人们注目的即时检验(以下略称为POC)。所谓POC是在临床现场，最受到重视的缩短从检体採集到结果出来的时间的临床检查的总称。在实际的医疗现场等，在利用上述那样的免疫层析法对检测对象物质进行检测或对检测对象物质的浓度进行测定时，将使用注射针採集到採血管的血液的一部分作为样品液使用。对于採血管根据用途可以含有各种各样的试剂。例如在血糖、醛固酮、或前列腺素E2测定用的採血管中可以含有作为螯合剂的EDTA等。而EGTA也可以预期有同样效果，也可以添加到採血管中。另外柠檬酸、苯二甲酸、草酸等羧酸类也同样表现出螯合效果，特别是柠檬酸往往包含在採血管中。检测对象物质是蛋白质，而且其蛋白质的结构中含有钙离子等2价金属离子时，如样品液中含有具有上述螯合效果的物质，由于具有螯合效果的物质整合了金属离子，所以2价金属离子从作为检测对象物质的蛋白质的结构内被排除掉。由于金属离子被排除，该检测对象物质蛋白质的立体结构发生了变化。例如，CRP是由5个亚基组成的五聚体，5个亚基中的4个都含有钙离子，如果与具有螯合效果的EDTA等共存在于溶液内，钙离子从CRP内脱落，立体结构发生变化。而在採血后的血液保存的状态不好时，有时钙离子从CRP脱落后，立体结构也发生变化。在免疫层析法中，由于使用与含有2价金属离子状态的检测对象物质结合的抗体，因此，有时与结构变化了的检测对象物质不结合，或检测对象物质和抗体的亲和性发生了变化。因此，担心得不到正确的结果。
技术实现思路
本专利技术正是借鉴于上述事情而完成的专利技术，目的在于提供能够正确地测定样品液中检测对象物质的层析用试验片。本专利技术的层析用试验片，是用于测定样品液中含有的检测对象物质的层析用试验片，含有样品导入部、标记部、固定化部，由配置了上述样品导入部、上述标记部和上述固定化部的基材构成，以便使被导入到上述样品导入部的上述样品液经上述标记部移动到上述固定化部，而且试验片至少在上述样品导入部、上述样品导入部到上述标记部之间的部分以及上述标记部中的任一个部位含有金属盐。利用本专利技术，即使在检测对象物质在内部保持金属离子时，即使由于检测对象物质与具有螯合效果的物质进行接触，放出金属离子，其立体结构既便变化，在接触标记部之前，样品液与金属盐进行接触。由此，检测对象物质通过整合金属离子又回到原来的立体结构。因此使用含有有螯合效果物质的採血管等对样品液进行处理时，也能正确测定和检测样品液中的检测对象物质。上述金属盐存在于上述基材的表面或内部。上述标记部含有被标记物质标记的与上述检测对象物质特异结合的第1结合物质，上述固定化部含有与上述检测对象物质特异结合的第2结合物质。上述第1结合物质和上述第2结合物质可以是与上述检测对象物质特异结合的抗体。由此，能够进行基于免疫层析法的检测对象物质的测定。上述金属盐可以是2价金属离子盐。上述2价金属离子可以是钙离子。上述第1结合物质和上述第2结合物质可以是CRP抗体。上述金属盐可以是氯化钙。本专利技术的其他层析用试验片，是用于测定样品液中含有的检测对象物质的层析用试验片，备有基材；设置在上述基材上并且具有金属盐的样品导入层；在所述基材上与所述样品导入层接触而设置的、含有可洗脱到样品液中状态的通过标记物质标记的与上述检测对象物质特异结合的第1结合物质的标记层；在所述基材上与所述标记层接触而设置的、含有固定化状态的与上述检测对象物质特异结合的第2结合物质的固定化层。利用本专利技术，即使在检测对象物质内部保持金属离子，通过检测对象物质与具有螯合效果的物质进行接触，放出金属离子，其立体结构即使变化，在接触标记部之前，样品液与金属盐进行接触。通过接触，检测对象物质通过整合金属离子又回到原来的立体结构。因此使用含有有螯合效果的物质的採血管等对样品液进行处理时，也能正确测定和检测样品液中的检测对象物质。另外，利用本专利技术，由于上述样品导入层是与标记层接触而设置的，所以在样品液的展开途中失去的样品液中的溶剂量减少。因此可以向标记层以及固定化层供给充足量的样品液。试验片还可以备有在上述基材上与所述固定化层接触而设置的、用于吸收所述样品液的吸收层。本专利技术的层析用试验片的制造方法，是作为用于测定样品液中含有的检测对象物质的层析用试验片的制造方法，包括准备基材片的工序(a)；在上述基材片上使金属盐负载区域、含有标记抗体区域、固定化抗体区域彼此相互平行延伸、而且以含有上述标记抗体区域被配置在金属盐负载区域和上述固定化抗体区域之间的方式形成的工序(b)；沿着与所述金属盐负载区域、所述含有标记抗体区域、以及所述固定化抗体区域垂直的方向，切成长方形的工序(c)，上述金属盐负载区域负载金属盐，上述含有标记抗体的区域含有可洗脱到样品液中状态的被标记物质标记的与上述检测对象物质特异结合的第1结合物质，上述固定化抗体区域含有固定化状态的与上述检测对象物质特异结合的第2结合物质。通过该制造方法可以得到能够正确测定样品液中的检测对象物质的层析试验片。附图说明图1是表示免疫层析用试验片的模式图。图2(a)～图2(c)是表示使用免疫层析试验片的测定的原理的模式图。图3(a)～本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种层析用试验片，用于测定样品液中含有的检测对象物质，具有样品导入部、标记部、固定化部，由配置了上述样品导入部、上述标记部和上述固定化部的基材构成，以便使被导入到上述样品导入部的上述样品液经上述标记部而移动到上述固定化部，至少在上述 样品导入部、上述样品导入部到上述标记部之间的部分以及上述标记部中的任一个部位含有金属盐。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：汤川系子，北胁文久，河村达朗，
申请(专利权)人：松下电器产业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]