从人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的早期蛋白Ｅ２，Ｅ４，Ｅ６，Ｅ７，后期蛋白Ｌ１编码区（Ｌ１）和肿瘤相关蛋白分离的蛋白的可溶性多肽经特殊的空间序列将ＨＰＶ的早期蛋白Ｅ２，Ｅ４，Ｅ６，Ｅ７编码区和后期蛋白（Ｌ１）分离的蛋白多肽以及肿瘤相关蛋白分离的蛋白多肽序列联接成重组多肽序列结构，这些重组多肽序列由＞５０％的亲水性氨基酸所组成，可以被特异性抗体所识别。同样的发明专利技术是：从肿瘤蛋白Ｋ－Ｒａｓ，Ｈ－Ｒａｓ，编码区分离的蛋白多肽序列，肿瘤阻抑蛋白ＰＴＥＮ编码区的多肽，以及沙眼衣原体热休克蛋白ＣＨＳＰ６０ ｇｒｏＥＬ１编码区的多肽序列以及用来检测诊断肿瘤或细胞异常的多肽复合物分子。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是抗人乳头瘤病毒(HPV)特异性抗体与特异多肽结合反应的一项技术。该专利技术技术是通过分离纯化HPV早期蛋白(如E2，E4，E6及E7)和后期外壳蛋白(L1)编码区，肿瘤基因蛋白(H-Ras，K-Ras)肿瘤阻抑制蛋白(PTEN)以及衣原体热休克蛋白60(CHSP60groEL1)相关的多肽序列，用免疫检测方法，以达到检测子宫上皮细胞变异，临床癌变前的普查以及应用于HPV感染相关的子宫颈癌，和癌基因蛋白和肿瘤抑制蛋白突变缺损相关的肿瘤的早期诊断的多肽复合物分子。
技术介绍
在全球范围内，子宫颈癌的发病率占妇女的恶性肿瘤发病的第二位。据国际癌症协会(IARC)报导，全球范围内，在2000年大约有50万子宫颈癌病例。在美国每年约有13万新的子宫颈癌病例产生，而亡率大于4千例。在发展中国家，妇女患子宫颈癌的发病率占全球患子宫颈癌发病率的80％，而且约80-85％的患者往往在后期才被诊断发现，导致相对的死亡率增加。据全球统计比较，大约1千万患者属高度发育异常期，大约3千万患者属于低度发育异变期，而且约三亿妇女患有子宫颈感染HPV，但没出现组织细胞异常。这种疾病是由感染了人乳头瘤病毒(HPV)所致。除外，感染了HPV还可以诱发头颈部、生殖道、尿道和膀胱肿瘤的发生。根据HPV的致病强度与子宫颈癌相关的程度，可将它们分为三大类即高危险型HPV(例如HPV16、18、31和45)，患这些类型的HPV感染在子宫颈中的5％以上；中度危险型HPV(例如HPV33、35、39、51、52、56、58、59、68)，患这些型感染在子宫颈癌中分别占1-5％；低度危险型的HPV(例如HPV6、11及其它型)，在子宫颈癌患者中极少感染这些HPV型，但是这些低度危险型的HPV感染与女性或男性生殖道尖锐湿疣有密切相关。此外，由于母体感染了这些型的HPV，导致婴儿出生后出现喉头的乳头瘤，全球每年约2万5千的新生儿死于该疾病。这是由于缺乏先进的医疗设备体系进行检测HPV感染的检测所致。应通过世界卫生组织(WHO)机构进行健康卫生的普查，制定出全球性健康教育课程(JHPIEGO)，从而对该疾病的认识。在中国，子宫颈癌仍然是一种常见疾病。西方国家对中国妇女感染HPV与子宫颈癌发病相互关系较少报导。子宫颈癌现已确认与感染HPV16、18型密切相关，而且与HPV31、33、35、45、51、52、56和58型同样有相关。经研究证明，在中国四川省，患子宫颈癌的妇女中与感染了HPV16、33型有密切相关。而且异著差异占95％。而且，大多数患子宫颈部的妇女多半是感染了HPV16、33型。而且专利技术率极高，特别是在山西省的普查发现，大约有10％的发病率，相反在上海的患子宫颈患者大多是感染了HPV52、58型相关。上述的HPV型的感染在欧美国家以及非洲中的子宫颈癌妇女中较少见。HPV的感染尤其是癌基因型的HPV感染与子宫颈部的发病极为密切。在浸润型子宫颈癌妇女中几乎100％的患者感染了HPV。大多数妇女在早期并无症状，而且往往在子宫内膜涂片及脱落细胞(巴氏染色法)的检查一般是正常，这是增加了子宫颈癌的发生的危险性的重要原因之一。特别是对混合型HPV的感染者危险性更加严重。热休克蛋白(CHSP60)已被证实是一种衣原体抗原免疫原，流行病调查发现，它与衣原体沙眼的免疫力相关。抗(CHSP60)抗体的产生与子宫鳞状细胞癌的发生密切相关。Cjorma paavonen.，et al；Am J Obst；Gynecol 2003；189，1287-92；Tarja Anttila；etalJAMA，285(1)47-51，2001。在子宫颈缺损的恶变前发展过程中，肿瘤基因K-Ras发生突变，加上合并HPV的感染对恶变发展起到关键性的作用。(Prokopakis P.Sourvinos G.，etaloncolRep，9(1)129-33，2002)。大约36％感染了HPV患者中，可以检测出HPV的基因组，同时占159的患者出现肿瘤基因的突变(K-Ras)。尤其是感染了HPV18型的患者中有71％的患者的K-Ras基因空变发生，而感染HPV16型患者约有29％的患者出现K-Ras基因突变，而且患合并有中度子宫变异性肿瘤发生。(Stenzel A.，et alPathol Res Pract，9591-603，2001)。肿瘤基因蛋白(H-Ras)，(K-Ras)以及(N-Ras)分别位于人染色体的第11、12以及1号染色体上。该三种Ras基因为21Kda蛋白(统称为P21)，由189个氨基酸所组成。当感染了HPV时，可以激活这些肿瘤基因，从而导致肿瘤基因的转化过程。现已证明细胞内的Ras基因转化过程与HPV的E6/E7基因是共同起效应的(Ioannis N. Mammas.，etalGynecologic Oncology 92941-948，2004)。肿瘤阻抑制蛋白(PTEN)是与子宫颈鳞状细胞癌变发生有密切相关。它对内、外遗传的改变过程起到关键性的作用，而且也起到预测性诊断的因子。PTEN位于人染色体的10q23.3位置上。它主要是调控细胞的生长，同时对细胞的周期、阻抑制或调控肿瘤的发生起重要的作有。由于在许多肿瘤患者中，PTEN的突变(基因突变)或缺损使调控功能缺失，同时使PTEN的起动区发生甲基化，使体内产生相应的抗PTEN的免疫抗体，约36％的子宫内膜部患者或子宫内皮细胞癌变期患者均出现PTEN的突变，产生相应的特异抗体。因此，检测特异抗PTEN抗体，是早期诊断子宫内膜部的有效方法。(Tak-Hong Cheung，etalGynocologic Oncology，93；621-627，2004；Takeo Minagch.，etalCancer Letters210；57-62，2004)。当HPV的癌基因蛋白，肿瘤基因蛋白，肿瘤阻抑制蛋白，以及衣原体热休克蛋白CHSP60经体内降解后的小分子多肽被主要组织相容复合物分子(MHC)受体结合。(MHC)是人类白细胞抗原(HLA)分子。它的生物学功能是与多肽结合，起到免疫学的作用，HLAI型分子对抗病毒和抗肿瘤的免疫作用起重要作用，HLA II型分子对调控抗体的产生以及细胞毒性反应起作用。MHC的I、II型分子大于90％是由寡聚多肽氨基酸组成(通常是8-11氨基酸组成)，它是病毒基因，肿瘤基因，肿瘤阻抑制基因以及衣原体热休克蛋白基因编码的多肽分子。这些多肽分子来自本身的蛋白，经降解后形成小分子多肽，它的可以对免疫宿主起激活作用。在中国人群中的HLA可以分为两大类即南方人群和北方人群；逮族、布衣族和锦族属南方人群。常见的等位基因有DPB1 0501，*1301，*0401，以及*020102；DRB1等位基因有DRB1*150201，030101，*090102。占优势的DQB1等位基因有DQB1*030101/0309，*050201和0201/0202。利用HMCPrep应用程序可以预测多肽分子的亲和性，同时还可以分析发现不同种族人群的MHC等位基因多肽的特异性结合的模式。HLA的I型等位基因包括HLA-A*0101，*0102，*0202，*0203，*0206，*0301，6801，本文档来自技高网...
【技术保护点】
从人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的早期蛋白Ｅ２，Ｅ４，Ｅ６，Ｅ７编码区和后期蛋白（Ｌ１）编码区的分离的水溶性多肽，这些多肽经一种空间序列和其它的多肽联接构成一种具有特殊的结构的重组多肽，这些重组多肽序列由＞５０％的亲水性氨基酸所组成，同时保留了被特异性抗体所识别的抗原决定族。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡耀雄，
申请(专利权)人：胡耀雄，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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