红细胞的悬浮介质制造技术

红细胞的悬浮介质包含任何一组的氨基酸的组合，以及磷酸盐缓冲液、氯化钠、葡萄糖、腺嘌呤、防腐剂、ＥＤＴＡ以及甘氨酸，还包含肌苷、柠檬酸盐、柠檬酸以及碳酸氢盐。氨基酸的浓度高于那些需要降低离子强度的浓度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新的红细胞的悬浮介质，用于在医院和血液输血中心进 行需要红血球的主要免疫血液学凝集测试。血清型的确定、非常规抗体 的探测和辨认、正负对照的制备，和用于反常结果研究的样品保存需求 均需要红细胞，以及在溶液介质中再悬浮以维持它们的功能。
技术介绍
输血提供的临床进展带来了免疫血液学的发展。如果没有免疫血液 学的发展，目前在意外伤害、手术中或在白血病治疗以及癌症和其他疾病中不可能进行若干数量的输血。在西班牙，2004年中共有160万献血者 (1),在美国，每年捐赠约为1500万袋血(2),世界卫生组织根据178 个国家的数据，估计每年捐赠的总血单位约为8100万个(3)。如果没有 事先进行免疫血液学的确定，这些捐赠则没有意义。待确定的主要血型 为ABO系和RH系，特别是RH系中的抗原D (腿)。在紧急情况下，所有的人都可以接受O型的红细胞或红血球，AB型 的人可接受任何ABO型的红细胞或红血球。因此，O型血的人被称为万能 献血者，而AB型血的人被称为万能受血者。是否能够接受对来自具有特 定血型的人的红细胞或红血球，取决于接受者血浆中的抗体。因此，0型 个体中存在对抗原A和B的抗体，A型个体中存在对抗原B的抗体，反之，B 型个体中存在对抗原A的抗体，而AB型个体中不存在那些抗体。因此，可 以捐献给所有血型的不是红细胞，而是AB型个体的血浆。免疫血液学分析的基础是确定ABO型和RH型。ABO系是通过抗原和抗 体(常规抗体)来确定，而RH系和其它的血系只有在怀孕和输血后才会产生抗体(非常规抗体)。然而，尽管它们在人群中的发生频率较低， 但对非常规抗体的确定是最为重要的。为避免危险的发生以及确保输血 安全，非常规抗体的确定都需要在所有的医院和输血中心进行。另外，为了诊断新生儿溶血病的可能性，以及预防出现母亲为Rh-(缺少抗原 D),而小孩为汕+ (存在抗原D)的情况，均需要新生儿非常规抗体的确 定。在免疫血液学中，用于红细胞类型鉴定、相容性测试以及常规和非 常规抗体的检测的新技术的引进代表了本领域最为重大的进展。这些进 展涉及促进特异性凝集的成分(例如，Coombs溶液、LISS溶液(低离子 强度溶液)，具有清蛋白的溶液，具有蛋白水解酶的溶液，或其他抗原-抗体联合物的增效剂)，活性抗体的改进(例如，单克隆抗体)，以及用于展示凝集的全新的或基本上不同的技术(例如，微片和凝胶技 术)。微管柱技术、也被称为凝胶或卡技术的出现，奠定了现代免疫血 液学的基础。微管柱技术(4)自1986年出现以来，不断得到引入注目的发 展。由于其易于实现自动化，该技术将取代其他的技术，而成为唯一的 表型确定技术。与流行的基因型技术相结合，它们将形成免疫学分析的 基础。目前，用于基因型确定的主要方法还处于初级阶段，仅限于研究 类实验室。凝胶技术借助由凝胶小球(EP 194212， EP 305337 )、玻璃小球或 其他球型材料的小球(EP 485228， EP 725276， EP 755719)形成的过滤基 质，通过离心而将那些凝集的细胞与未凝集的细胞进行分离。将样品分 散于在微管的上部，位于凝胶柱之上的反应室。在含有凝胶或过滤基质 的柱中，根据分析所使用的緩冲液可含有特异性抗体(例如，抗-A,抗-B,抗-D)或人抗J求蛋白(人抗-IgG或人抗-IgM抗体)，这被称为Coombs 溶液。过滤基质由置于緩冲水溶液中的球状颗粒构成。为了展现免疫血 液学凝集，进行离心使细胞(红细胞)通过过滤基质。颗粒之间的空间 足够大，使那些未凝集的细胞，即个体细胞通过。尽管在此过程中发生 凝集，但凝集的细胞会被保留在小球间。严格地讲，尽管这是一个定性 技术，但细胞通过过滤基质使得对不同程度的凝集进行区分成为可能。例如，在阳性样品中，非常强的凝集的细胞将被保留在凝胶的上半部 分，而弱的凝集的细胞可以在基质中通过 一 段距离而被保留在中间位 置。没有发生凝集意味着所有的细胞将会到达微管的底部(阴性反 应)。如在常规的免疫血液学中所出现的，由于红细胞具有明显的红 色，因此该技术对抗原(红细胞)-抗体联合物不需要使用任何标记或 放大试剂。凝胶技术使得将阳性产物从阴性产物中进行物理分离成为可能，如 阳性产物(高强度凝集)位于凝胶的上部分，柱中部分(中度或弱凝 集)，以及阴性产物(未凝集的红细胞)位于凝胶的下部分。在免疫血液测试中，使用试剂红细胞测试血浆或血清中的常规和非 常规抗体。在溶液中制备所述的红细胞从而维持这些细胞的功能性和完整性一段时间，通常在1到4周。在血库实验室或那些负责输血的机构 中，通常选择具有特异性抗原的红细胞从而使其能够在每个免疫血液测 试中充当试剂红细胞。为制备筛选细胞需进行一定的组合，如将2， 3或 4个具有具体抗原特异性的红细胞组合可探测抗体，将ll或更多个红细胞 组合可鉴别所探测到的抗体的特异性，但这种组合并不容易制得并且在 中级机构这种搡作也很难进行。本领域内的技术人员都熟知得到所述的 筛选细胞或细胞群的难度以及需要频繁地制备这些试剂红细胞，同时还 需制备用于这些红细胞的悬浮溶液或稀释液。此外，为了加强特异性血 型的反应性还需要使用酶处理(如木瓜蛋白酶作用)来制备筛选细胞或细 胞群。通过这种处理加强的血系也为本领域技术人员所熟知。当前使用的溶液是将Alsever溶液进行适当的改进所得到。这些溶 液通常含有抗凝血剂(如柠檬酸盐)、磷酸盐緩沖液、能量源(如葡萄 糖)、嘌呤和核苷(如腺噤呤和肌苷)、氯化钠以及防腐剂(抗生 素)。然而，使用这些常规的溶液制备的试剂红细胞在凝胶技术的使用 中可能会存在问题。因为一些没有凝集的红细胞通常会残留在柱中，所 以在使用的凝胶技术可对物理分离产生影响。因为这些非特异性的存留 物与中等或弱凝集物混乱，所以会产生假阳性结果。用于试剂红细胞的悬浮液应能够使得没有发生凝集的红细胞维持其 功能特征和它们通过凝胶柱从而到达凝胶柱底部的能力。根据上面所述 的在免疫血液学实验室中制备红细胞所存在的困难，所以应维持这些特征尽可能长的时间。其中pH、摩尔渗透压浓度以及离子强度这些参数在 这段时间内应维持恒定。同样，提供葡萄糖和腺噪呤以维持红细胞的保 活性也是必要的。这些物质的组成和浓度会增加离子强度，而离子强度 会被加入的甘氨酸所降低。因为红细胞已经失去了遗传核以及任何生物 合成的能力，因此加入这种氨基酸不会对蛋白合成有影响。
技术实现思路
为了减少试剂红细胞中所观察到的特异性的丢失，专利技术者们在研究 中意外发现加入稀释溶液的浓度在高于为降低离子浓度所需的浓度时， 可使试剂红细胞与氨基酸结合而与甘氨酸分离，从而可降低试剂红细胞 中观察的特异性的丟失，即很大程度上降低了没有凝集的红细胞在凝胶 柱中的非特异性保留。由于此原因，在本专利用于试剂红细胞的稀释溶液组合物的申请 中，将进行描述，其中稀释溶液组合物能够使得试剂红细胞在延长的时 间内，如8个星期内维持其完整性和功能性。在这段时间内，红细胞维持 其通过凝胶或其它狭窄空间的能力以及不会发生非特异性的凝集，保持 其形变能力、完整性以及抗原性，从而其可被用作免疫血液学的试剂用 在确定血清型、探测常规抗体测试以及非常规抗体的研究和识别中。根据本专利技术，在用于红细胞的稀释液本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于需要红细胞的分析技术中的试剂红细胞的悬浮介质，其特征在于，该悬浮介质含有任何一组的氨基酸的组合。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔马托瑞尔皮纳，迈蒂尔卡门特拉弗斯波罗，朱迪法雷利昂，约瑟芬娜卡斯特尔帕雷拉，
申请(专利权)人：基立福有限公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]