不论存在或不存在相对应的治疗用抗体而检测靶抗原制造技术

本发明专利技术涉及治疗用抗体领域。本发明专利技术特别涉及检测在样品中治疗用抗体的靶抗原的方法，所述方法包括下述步骤：ａ）提供待分析的样品，ｂ）在适合所述治疗用抗体与所述靶抗原结合的条件下，将所述样品与所述治疗用抗体温育，由此形成靶抗原－治疗用抗体－复合物，和ｃ）检测在（ｂ）中形成的复合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】不论存在或不存在相对应的治疗用抗体而检测耙抗原本专利技术涉及不论存在或不存在相对应的治疗用抗体而检测耙抗原的方法。本专利技术特别涉及在存在相对应的治疗用抗体时检测革E抗原。本专利技术公开检测治疗用抗体在样品中的靶抗原的方法，所述方法包括下述步骤a)提供待分析的样品，b)在适合所述治疗用抗体与所述靶抗原结合的条 件下，将所述样品与所述治疗用抗体温育，由此形成耙抗原-治疗用抗体-复合物，和c)检测在(b)中形成的复合物。本专利技术还涉及所述方法在患者 随访中的应用。
技术介绍
自从1974年K6hler和Milstein开发第一种单克隆抗体以来，已经有 许多努力致力于开发适用于人类治疗的抗体。可用的第一种单克隆抗体己 经在小鼠和大鼠中开发。当用于人类治疗时，由于抗-啮齿动物抗体，这 些抗体带来不需要的副作用。已经有许多努力致力于减少或者甚至消除所 述不需要的副作用。在过去十年里，不断增长数量的人单克隆抗体或人源化单克隆抗体已 经进入市场。公知的实例包括，例如，来自Hoffmann-La Roche, Basel (霍 夫曼-拉罗奇有限公司，巴塞尔)的Herceptin⑧和MabThera⑧。非常显著数量的人或人源化单克隆抗体正在研究中，并且在出于第一 试验目的可以考虑进入人类之前需要在实验动物中进行研究。治疗单克隆抗体典型地必须以在约1 ng/ml-约100 ^ig/ml范围的血清 水平应用。所述治疗用抗体，因此至少在治疗方案中的特定时间点，以非 常高的浓度存在，例如，以与相对应的靶抗原的浓度同样高或者甚至更高 的浓度存在。认为准确检测靶抗原本身是非常重要的，尤其是在治疗后并且特别是 在用相对应的治疗用抗体治疗后的患者随访中。由于在治疗方案的疗程 中，治疗用抗体的浓度将在很大程度上变化，所以在为检测其相对应的耙 抗原所建立的检测中对所述治疗用抗体的任何干扰可能并且非常可能将 导致对所述靶抗原的假检测。耙抗原的水平可以通过任何适当的方法检测。在临床途径中，在大多 数情形中所述方法将应用针对所述靶抗原的抗体，所谓的免疫测定。高和 /或可变浓度的治疗用抗体可能干扰用于检测其耙抗原水平的免疫测定。正如熟练的技术人员应该容易地理解，在检测其相对应的靶抗原中使 用治疗用抗体本身是不可能的，或者至少不是容易的任务。如果所述治疗 用抗体和用于免疫测定的至少一种抗体结合靶抗原的同一表位，那么将经 常遇到相同的困难。然而这一事实是公知的并且普遍接受的，现在已经惊 讶地发现，即使所述治疗用抗体结合这样的表位，即所述表位不与在用于 相对应的靶抗原的免疫测定中所用的一种或多种抗体结合，但是用于检测 耙抗原的免疫测定还可以受到存在或不存在治疗用抗体的危害。Jilani等(Jilani， I.，等，Blood (血液学)1032 (2003) 3514-3520)报道，为了检测细胞表面上的利妥昔单抗，使用特异性检测利妥昔单抗中的小鼠序 列并且不与人Ig交叉-反应的抗体。在WO 03/024993中，报道了一种检 测和监测治疗用抗体抗原复合物、可溶的抗原、游离的治疗用抗体和可 溶的总治疗用抗体的方法。本专利技术的任务是研究检测治疗用抗体在样品中的靶抗原的方法是否 可以改进。所述方法应该产生关于靶抗原浓度的真实并且准确的值，而不 管相对应的治疗用抗体存在或不存在，并且应该用于连续的检测，例如， 在患者随访中。这一任务己经由如下文和实施例部分所述并且如在后附的权利要求 中所要求保护的本专利技术完成。专利技术概述本专利技术包括检测治疗用抗体在样品中的靶抗原的方法，所述方法包括 下述步骤a) 提供待分析的样品，b) 在适合所述治疗用抗体与所述靶抗原结合的条件下，将所述样品与所 述治疗用抗体温育，由此形成靶抗原-治疗用抗体-复合物，全部靶抗原都 被所述治疗用抗体复合，和 C)检测在b)中形成的复合物。专利技术详述在第一个实施方案中，本专利技术涉及检测在样品中治疗用抗体的靶抗原 的方法，所述方法包括下述步骤a)提供待分析的样品，b)在适合所述 治疗用抗体与所述靶抗原结合的条件下，将所述样品与所述治疗用抗体温 育，由此形成靶抗原-治疗用抗体-复合物，和C)检测在b)中形成的复合 物。术语"靶抗原"涉及被其相对应的治疗用抗体结合的生物分子。通过举例的方式，针对HER2 (:ErbB2或p 185 的治疗用抗体如Herceptin 或Omnitarg⑧的靶抗原是HER2，针对CD52的治疗用抗体如Campath 的靶抗原是CD52，针对EGFr的治疗用抗体如Erbitux⑧的靶抗原是EGFr， 针对CD33的治疗用抗体如Mylotarg⑧的靶抗原是CD33，针对Tag-72的 治疗用抗体如OncoScint⑧的靶抗原是Tag-72，针对17-1A的治疗用抗体 如Panorex⑧的靶抗原是17-1A,针对CD20的治疗用抗体如Rituxan 、 MabThera⑧或Zevalin⑧的靶抗原是CD20，并且针对CD25的治疗用抗体 如Zenapax⑧的靶抗原是CD25。所述靶抗原可以是可溶的，即，分泌的或 释放的(shed)，靶抗原或(细胞-)膜结合的靶抗原。在另一个实施方案中，所述在步骤b)中形成的靶抗原-治疗用抗体-复 合物的形成，使得所有靶抗原被所述治疗用抗体复合。当在本申请中应用时，术语"可溶的靶抗原"表示可溶形式，即，分 泌的或释放的形式的治疗用抗体的膜-结合靶抗原。治疗用抗体大多数针 对它们结合的细胞表面抗原，例如，癌细胞的细胞表面抗原。除了细胞表 面抗原的膜-结合变体以外，细胞可以产生这样的抗原的分泌的或释放的， 即，可溶的变体。所述可溶的靶抗原可以在患病的个体的体液中发现。"可 溶的耙抗原"是膜-结合抗原的分泌的或释放的变体，因此，所述可溶的 变体具有与所述膜-结合抗原的至少一部分胞外结构域相同的氨基酸序列 和相同的二级结构，因而允许针对(膜-结合)靶抗原的胞外结构域的抗体还结合所述可溶的靶抗原。在另一个实施方案中，所述靶抗原是可溶的耙抗原。当在本申请中应用时，术语"表位"表示能够特异性地与抗体结合的 蛋白决定簇。表位通常由诸如氨基酸或糖侧链的分子的化学活性表面基团 组成，并且通常具有特异的三维结构特征，以及特异的电荷特征。构象和 非-构象表位区别在于，在存在变性溶剂时，与前者的结合而不是与后者的结合丢失。取决于所述表位所属的抗原的大小，每一抗原多于一个表位 可以是可行的，同样导致每一抗原多于一个的抗体结合位点(=表位)的 可能性。按照本专利技术的"样品"可以是取自实验动物、优选地取自哺乳动物的 任何组织或液体样品。优选地，所述样品应该是液体样品，如唾液、尿、 全血、血浆或血清。优选地，所述样品应该是全血、血浆或血清。优选地， 所述样品是不含细胞的样品，即，不含携带膜-结合靶抗原的细胞的样品。适于靶抗原与其相对应的"治疗用抗体"结合的条件是熟练的技术人 员公知的，或者可以容易地确定。在这些条件下，所述治疗用抗体结合所 述靶抗原，膜-结合的或可溶的变体，并且形成所述靶抗原与所述治疗用 抗体之间的免疫复合物，这形成靶抗原-治疗用抗体-复合物。这一复合物 可以通过任何适当的方法检测。在一个优选的实施方案中，靶抗原-治疗用抗体-复合物通过借助免疫 测定而检测。所用的免疫测定优本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测在样品中治疗用抗体的靶抗原的方法，该方法包括下述步骤：　　　　ａ）提供待分析的样品，　　　　ｂ）在适合所述治疗用抗体与所述靶抗原结合的条件下，将所述样品与所述治疗用抗体温育，由此形成靶抗原－治疗用抗体－复合物，和　　　　ｃ）检测在（ｂ）中形成的复合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：赫尔穆特伦茨，维尔纳朔伊尔，马丁娜蒂尔，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]