一种检测倍硫磷含量的方法技术

本发明专利技术是有关于一种检测倍硫磷（ｆｅｎｔｈｉｏｎ）含量的方法，特别是有关于一种由酶免疫分析法来检测倍硫磷含量的方法，其步骤包含：（Ａ）在一反应溶液中，混入一种抗倍硫磷（ｆｅｎｔｈｉｏｎ）的抗体，以及葡萄糖六磷酸去氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤＨ）倍硫磷共轭（ｆｅｎｔｈｉｏｎｃｏｎｊｕｇａｔｅ）；（Ｂ）进行测试采样；（Ｃ）将ＮＡＤ↑［＋］及葡萄糖六磷酸（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）至混合溶液中；及（Ｄ）利用一光谱仪来检测在３４０ｎｍ的ＮＡＤＨ的成长速率。本发明专利技术以快速及方便的方法测出其倍硫磷的含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是有关于一种检测倍硫磷(Fenthion)含量的方法，其步骤包含(A)在一反应溶液，混入一种抗倍硫磷(fenthion)的抗体，以及葡萄糖六磷酸去氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PDH)倍硫磷共轭(fenthion conjugate)；(B)进行测试采样；(C)将NAD+及葡萄糖六磷酸去氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PDH)至混合溶液中；及(D)利用一光谱仪来检测在340nm之NADH的成长速率。
技术介绍
由于杀虫剂的广泛使用，使得对于环境及食物的污染日趋严重，在众多种类的杀虫剂之中，倍硫磷硫代磷酸酯](phosphorothioate])是一种全球普遍所使用的有机磷杀虫剂(organophosphorus insecticide)，其使用在不同类型的耕作上，以控制许多吸吮及咬噬的害虫，特别是果蝇、叶蝉、侵食叶子的虫(leafminers)、侵食茎部的虫(stem borers)及谷虫(cereal bugs)等(参考文献Tomlin，1997)。而倍硫磷是众所周知会释放出严重的致命剧毒，而且会经由皮肤的接触、吸入或是摄取而累积，在使用该倍硫磷之后，最敏感及毒性的相关影响是抑制了乙酰胆碱酯脢的活性(acetylcholinesterase activity)(参考文献Tomlin，1997)。使用倍硫磷杀虫剂而中毒的病患死亡率，比起使用其它有机磷杀虫剂(organophosphorus insecticide)来得更高(参考文献Eddleston et al.，2005)。因此，倍硫磷对于广泛种类的生物及环境上的污染测试采样分析是必要的。就目前的方法而言，例如气相层析法(gaschromatography)及高效率液相层析法(high-performance liquidchromatography)具有高敏感度及可信度，都曾经成功地被使用于分析许多种杀虫剂(参考文献AOAC International，1995)。然而，这些典型的方法都需要更高的成本及具备高技术的分析师，并且，需要费时的采样配制步骤(sample preparation steps)，因此，对于一种检测杀虫剂残留物的更快速及更具经济效益的方法，其需求日益增加。免疫分析法(immunoassays)，即可符合此项需求，除了传统的方法之外，近来免疫分析法的出现，日渐成为了另一项选择。 自从Yalow and Berson(1960)揭露了一种竞争性结合免疫分析法(competitive binding immunoassay)来侦测胰岛素(insulin)，目前免疫分析法是在医学分析上经常使用的一种方法(参考文献Andreotti et al.，2003；Tetin and Stroupe，2004)，在环境的检测上(参考文献Hennion andBarcelo，1998；Morozova et al.，2005)，以及为侦测出生化战剂(chemical andbiological warfare agents)的先前警告系统(参考文献Andreotti et al.，2003；Peruski and Peruski Jr.，2003)。组合具有高度专一性(high specificity)的抗体与放射性示踪剂(radiotracers)的敏感度，放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)可测出多种类极小基质的分析物(参考文献Petkam et al.，2005；Revoltella et al.，1998)。最近，非同位素标记物(non-isotopic labels)越来越普及，因为他们可以避免放射性同位素在使用上先天的缺点，放射性示踪剂取代基(substituents)标记物可包括荧光分子(fluorescent molecules)(参考文献Biagini et al.，2004)、化学发光前驱物(chemiluminescent precursors)(参考文献Chouhan et al.，2006)、噬菌体(bacteriophages)(参考文献Tout et al.，2001)、电气化学的卷标(electrochemical tag)(参考文献Killard er al.，2000)、DNA(参考文献Adler et al.，2005)、以及酶(enzymes)(参考文献Wang et al.，2005)，每一种类型的标记物(labels)都具有其特定的优点及限制，在这些标记物(labels)之中，以酶(enzymes)为最具吸引力的标记物(labels)，因为其活性(activities)可使他们扮演有如放大器的角色，而酶免疫分析法(enzymeimmunoassay，EIA)的最主要优点在于利用酶标记物(enzyme labels)来设计出竞争性结合分析测定法(competitive binding assays)，使含极少量分析物可由动力分析法(kinetic methods)在相对较短的时间内被测出(参考文献Brun et al.，2004；Cho et al.，2003；Kim et al.，2002；Wang et al.，2005)。在大部分的实例中，底物耗损速度(rate ofsubstrate depletion)或是生成物的形成可由简单的分光光度法(spectrophotometric method)来测定，EIAs可被分类为异质性(heterogeneous)(例如酶联免疫吸附分析法enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)或是同构型(homogeneous)(例如酶多重免疫分析法enzyme-multiplied immunoassay technique，EMIT)，由于较低敏感度，同构型的方法不需要费时的洗涤步骤来分离结合标记物(bound labels)及非结合标记物(unbound labels)，因此，可更快速且适合自动操作(automation)(参考文献Kim et al.，1990及1994)。在Rubenstein et al.，1972的文献中率先提出EMIT的方法，由抗-半抗原抗体(anti-hapten antibodies)，从溶液中抑制适当的酶半抗原(enzyme-hapten)(分析物的类似物analyte analogue)共轭催化活性而得出分析的标志结果。经抑制的酶活性(enzymatic activity)可恢复，在采样中其恢复程度与该自由分析物(free analyte)的浓度成正比，而对于会导致人类严重中毒的倍硫磷，其EMIT检测方法尚未有所揭露。 对于ELISAs敏感度的改良，可由强化分析物对于抗体的专一性(specificity)及亲和力(affinity)而获得，在实验上及理论上两者皆经证实(参考文献Bachas and Meyerhoff，1986)，自由分析物(free analyte)对于酶-半抗原共轭(enzyme-hapten conjugate的亲和力常数比本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测倍硫磷含量的方法，其步骤包含：（Ａ）在一反应溶液，混入一种抗倍硫磷（ｆｅｎｔｈｉｏｎ）的抗体，以及葡萄糖六磷酸去氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤＨ）倍硫磷共轭（ｆｅｎｔｈｉｏｎｃｏｎｊｕｇａｔｅ），如下列化学式：＊＊＊（Ｂ）进行测试采样；（Ｃ）将ＮＡＤ↑［＋］及葡萄糖六磷酸去氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤＨ）至混合溶液中；及（Ｄ）利用一光谱仪来检测在３４０ｎｍ的ＮＡＤＨ的成长速率。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：李相喜，金福姬，
申请(专利权)人：明知大学产学协力团，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]