诊断肾病的方法和标志物技术

本发明专利技术涉及用于诊断肾病的方法，尤其是鉴别诊断的方法。本发明专利技术中的目标肾病是ＩｇＡ肾病、膜性肾小球肾炎（ＭＧＮ）、微小病变（ＭＣＤ）、局灶性节段性肾小球硬化（ＦＳＧＳ）和糖尿病肾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】诊断肾病的方法和标志物 本专利技术涉及肾病的诊断，特别是鉴别诊断。近年来，肾病患者的数目日益增多。因此，肾病对健康体系造成日益 严重的问题。由于许多肾病是不可逆转的，因此肾病的早期诊断和/或 鉴别诊断是很重要的。早期诊断和精确适合于每种特定疾病的治疗可降 低需要透析的患者数目，并且还可以降低患者的高心血管风险。目前，精确诊断和/或鉴别诊断主要依赖肾脏活组织检查。尽管活组 织检查成为当前肾脏诊断中的"黄金标准"，但是活组织检查具有侵入 性的缺点，因此仅在选定的患者进行。尿分析是诊断肾病的另一种方法。然而，目前仅常规测量几种尿参数，例如肌酸酐(creatinin)、尿素、白蛋白、血细胞(例如白细胞和 红细胞)、细菌、糖、尿胆素原、胆红素和pH值。这些分析的诊断价 值是有限的，因为它们缺乏足够的灵敏度和/或选择性，尤其用于鉴别 诊断时。已进行若干尝试来分析尿中含有的蛋白质。V. Thongboonkerd等使甩二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE ) 与基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质镨以及其后的质 量指紋镨的组合来研究正常人的尿蛋白质。鉴定了由47种独特蛋白质 的总共67种蛋白质形式(V. Thongboonkerd等(2001). Proteomic analysis of normal human urinary proteins isolated by acetone precipitation or ultracentrifugation. Kidney International,第 62巻， 1461-1469页)。C.S. Spahr等使用胰蛋白酶消化尿样中含有的蛋白质并借助液相层 析串联质4鉴定了来自124种蛋白质的751种肽(C.S. Spahr等(2001). Towards defining the urinary proteome using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. I. Profiling an unfractionated tryptic digest. Proteomics第1巻,93-107页)。这些研究仅涉及健康的个体。所述研究未曾提及尿多肽存在情况的 变化是否可用于肾病的诊断或鉴别诊断这一问题。已经提出使用尿中是否存在多肽来诊断膜性肾小球肾炎(membranous glomerulonephritis, MGN) (von Neuhoff等(2004). Mass Spectrometry for the Detection of Differentially Expressed Proteins: A Comparison of Surface-Enhanced Laser Desorption/Tonization and Capillary Electrophoresis/Mass Spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry,第18巻 149-156)。然而，该研究中仅使用了 8名患者的样品，其主要涉及不同 分析方法的比较。该标志物的实际诊断价值尚不明确。因此，需要用于肾病诊断、特别是鉴别诊断的快速且简单的方法和 手段。因此，本专利技术的一个目的是提供用于肾病诊断、特别是用于肾病鉴 别诊断的方法和手段。本专利技术的一个具体目的是提供用于诊断和/或鉴 别诊断IgA肾病(最常见的肾小球病)的方法和手段。根据本专利技术的一个方面，通过将尿样中至少一种多肽标志物的存在 状况用于肾病诊断(优选鉴别诊断)来解决该问题，其中所述多肽标志 物选自表l至22所示的多肽标志物。在本专利技术中已发现，借助于如表1至22所示的多肽标志物，分别 可靠地诊断或鉴别诊断不同肾病是可能的。与本领域的现状相比，本专利技术具有许多优势。首先，可以在尿样中 测定本专利技术多肽标志物的存在。因此，不需要进行活组织检查。这样， 本专利技术允许简单且快速地诊断肾病，从而可以对患者定期筛查肾病的存 在，以及在早期阶段诊断肾病。另外，本专利技术的多肽标志物可用于不同 肾病间的鉴别诊断。与仅使用单种或少数标志物相比，本专利技术中所鉴定 的多种标志物使诊断的特异性和灵敏度均得以提高。同时，本专利技术提供 了允许测量所述多肽标志物而无需使用特异性配体(如抗体或适配体) 的方法。表中所示的多肽标志物已通过毛细管电泳质镨(capillary electrophoresis國mass spectrometry, CE画MS )法进行鉴定，该方法将在 以下进一步描述。另外，该方法详细描述于von Neuhoff等(2004 )( Mass Spectrometry for the 'Detection of Differentially Expressed Proteins: A Comparison of Surface-Enhanced Laser Desorption/Ionization and Capillary Electrophoresis/Mass Spectrometry. Rapid Communicationsin Mass Spectrometry,第18巻149-156 )。从定义所述多肽标志物的参 数开始，有可能通过本领域已知的方法来鉴定相应多肽的序列,然后合成 或产生相应的多肽，例如借助于蛋白质合成或者在适当细胞中表达相应 的基因。所述标志物通过其质量及其在毛细管电泳(CE)中的迁移时间(特 别是质量及其根据实施例1得到的迁移时间)来定义。已知CE迁移时 间可以改变，通常在5分钟范围内，更通常在3分钟范围内。然而，对 于所应用的每种CE系统来说，所洗脱标志物的顺序通常是相同的或者 非常相似。可通过使用存在于几乎任何尿样中的多肽来对所述系统进行 校准，例如使用表23或24中给出的多肽。另外，SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 5中给出的多肽可用于校准。质量在测量间或不同质谱仪之间的变化相对较小，通常在正负 0.05%的范围内。在表1中，列出了优选用于区分健康个体和患有肾病(特别是患有 肾小球肾炎或肾小球病)的个体的多肽标志物。在表2中，列出了优选用于区分FSGS和健康状态的多肽标志物。在表3中，列出了可用于FSGS和MCD之间鉴别诊断的多肽标志物。在表4中，列出了优选用于FSGS和MGN鉴别诊断的多肽标志物。在表5中，列出了优选用于FSGS以及MCD或MGN之间鉴别诊 断的多肽标志物。在表6中，列出了优选用于与健康状态比较诊断MCD的多肽标志物。在表7中，列出了优选用于MCD和MGN之间鉴别诊断的多肽标 志物。在表8中，列出了优选用于MCD以及FSGS或MGN之间鉴别诊 断的多肽标志物。在表9中，列出了优选用于与健康状态比较诊断MGN的多肽标志物。在表10中，列出了优选用于MGN以及FSGS或MCD之间鉴别诊断的多肽标志物。在表ll中，列出了优选用于与健康状态比较诊断IgA肾病或MGN 的多肽标志物。在表12中，列出了优选用于与健康状态比较诊断IgA肾病的多肽 标志物。在表13中，列出了优选用于IgA肾病与MGN之间鉴别诊断的多 肽标志物。在表14中，列本文档来自技高网...

【技术保护点】
尿样中至少一种多肽标志物的存在情况用于诊断肾病的用途，其中所述多肽标志物选自如表１至２２所示的多肽标志物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：哈拉尔德米沙克，托尔斯滕凯泽，斯特凡维特克，迈克尔沃尔登，
申请(专利权)人：马赛奎斯诊断和治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]