定量评价体液样品所含多肽的装置和方法以及检测病理状态的标志物制造方法及图纸

本发明专利技术公开了定量评价体液样品所含多肽的装置和方法以及检测病理状态的标志物。所述多肽与数据库中保存的参考值进行比较。所述参考值作为状态相关多肽的数据记录而被保存，其中分别包含与健康和疾病对象样品中病理状态相关的多肽出现或浓度概率的至少一种指标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及定量评价体液样品所含多肽并与数据库中保存的参考值进行比较的装置和方法以及识别病理状态的标志物。从DE 100 21 737 C2已知可以定性和/或定量测定液体样品中种蛋白质和/或多肽模式的方法和装置。液体样品中的蛋白质和/或多肽通过毛细管电泳被分离，随后直接离子化并通过接口转移到在线偶联的质谱仪进行检测。为了长期监测人或动物的身体状态，描述这种状态的参考和样品值以及由此而来的偏差和对应关系都被自动存入数据库中，并且当再次测定蛋白质和/或肽模式时自动搜索最优对应关系。已经发现，已经有可能用目前所得的多肽模式非常可靠的描述人和动物体的状况。它们可以补充或替代现在常用的检查和诊断方法。尤其是对于糖尿病和糖尿病肾病，现已获得测定多肽模式的大量参考和样品值。糖尿病经常是糖尿病肾病的先兆，它可以经几年和几十年发展形成。糖尿病肾病要经过几个阶段。用现有手段几乎不可能早期诊断糖尿病肾病，并且要很高费用且仅在相对晚些时间才有可能。明显肾病的及时诊断和持续治疗不仅可阻止或推迟强制性透析，而且可降低糖尿病患者的高心血管风险。已经发现，液体样品如尿的多肽模式使在疾病早期阶段进行诊断成为可能。进一步研究显示，通过多肽模式也可以诊断上述糖尿病和糖尿病肾病以外的其它疾病。本专利技术的目的是提供在定量评价体液样品所含多肽并与数据库中保存的参考值进行比较的装置和方法中适于计算机辅助保存和评价的确定多肽。这个目的在定量评价体液样品所含多肽并与数据库中保存的参考值进行比较的装置和定量评价体液样品所含多肽并与数据库中保存的参考值进行比较的方法中被实现，所述装置的特征在于所述参考值作为与状况相关的多肽的数据记录而被存储，其中分别包含与健康和疾病对象样品中病理状况相关的多肽出现和/或浓度概率的至少一些信息，所述方法的特征在于通过比较体液样品中多肽出现和/或浓度概率的值与健康和疾病对象样品中病理状况相关的多肽出现和/或浓度概率的至少一种参考值，所述参考值作为与状况相关的多肽的数据记录而被用于比较。本专利技术的进一步目的是通过适于保存和评价的所含的确定多肽，提供识别病理状况的标志物。这个目的已经用识别病理状况的标志物实现，其特征在于分别与一些信息联系的多种与状况相关的多肽，这些信息与健康和疾病对象样品中病理状况相关的多肽出现和/或浓度概率的至少一种参考值有关。从各个从属权利要求中可以预见进一步的发展和优选实施方案。本专利技术中，与正常状况比较，病理状况中体液浓度明确改变的多肽的数据被评价。在初步研究中，可用大量对象确定这些多肽。每种多肽与一些信息相联系，其中包含与病理状态相关的健康和疾病对象中出现和/或浓度概率的信息。液体样品中多肽与参考值比较时，根据其出现和/或浓度是否代表健康或疾病状况，液体样品中比较过的每种多肽被归类。通过比较大量多肽，可以减少或者避免由少数与典型出现和浓度概率的个体偏差引起的总体结果的误差。根据进一步的实施方案，也可以通过描述它们的相关质量和在毛细管电泳中的相关保留时间确定所述多肽。由此，毛细管电泳和质谱数据直接被采用。这些数据对所有多肽是不同的，但又是明确的，使得这些数据足以用于定义。例如，使用内径(ID)75μm和外径(OD)360μm的90cm长的玻璃毛细管在30kV电压下进行毛细管电泳，其中样品溶剂使用30％甲醇、0.5％甲酸的水溶液，可以测定毛细管电泳保留时间。为诊断“糖尿病”和“肾脏损伤”，与状况相关的多肽的具体数据已被总结在数据库中，该数据库已建立并已使用大量对象的尿样确认。可以比较单个多肽、多肽组合或所有多肽。因为很多多肽对健康和病理状态的代表性是冗余的，最简单的情况下仅比较这些多肽中一个可能已足够。然而，为消除由统计不确定性或个体偏差引起的误差，应寻求比较与状况相关的多肽组合。如果比较列举的所有多肽，可以获得最优结果。作为标志物的这些多肽也可以是潜在的治疗靶。因此，可以开发以这些多肽为基础或作为靶结构的治疗剂。因此，这些多肽的出现和/或浓度分别以一种方式被身体中的补体(Erg_nzung)和/或抗体改变，这种方式中它们在体液中再次检查的浓度采用正常值。下面本专利技术将用图表举例说明附图说明图1表示确定多肽模式的数据获取中独立的中间步骤；图2表示多肽模式和它们的相互关系。在本专利技术实施例中，分析了尿样中大量多肽的存在和浓度。目前这是采用毛细管电泳偶联质谱仪(CE-MS)来实现，但也可以用其他方法选择性实现。CE-MS测量结果在图1a上用三维表示法标出，其中在x轴标记保留时间、在y轴标记质量和在z轴标记信号强度，这导致典型500-1500种多肽的多肽模式。图1b显示″原始数据″，通过过滤和评价软件从中首先过滤出相关信号，在图1c中标注为“识别信号”，随后计算多肽模式，在图1d中标注为″多肽模式″。多肽可以通过它们在毛细管电泳中的质量和保留时间来辨认/鉴定。它们的浓度可以用信号强度计算。多肽模式形成的数据被放入数据库。对明确鉴定每种相关多肽所必须的信息被存入独立的数据记录。图1e用符号表示几个数据记录的屏幕显示。为了识别关键多肽，通过毛细管电泳偶联质谱(CE-MS)检查有和没有被诊断为糖尿病肾病的患者与有和没有被诊断为糖尿病的患者的尿样。从超过50次测量的数据库比较可以建立肾脏健康的对象的典型多肽模式。以同样技术测量了超过200名I型和II型糖尿病患者的尿样。这些患者一起代表肾病的不同阶段，从尿液中完全非病理到超过3g蛋白质/天的值。为分析数据患者被划分为四组，如下表所示。 从测试组收集的多肽模式可以发展组特异性的多肽模式。由此得到的多肽模式显示出典型的与正常样品的偏差，即单个多肽的改变。为举例说明，在图2中用图形表示上表中具有组特异性的多肽模式。组K0、P0、P1和P2的多肽模式分别表示于图2a、2b、2c和2d。从组K0、P0、P1和P2的多肽模式构成一个合成总图，然后这个合成总图用于建立根据图2e作为标志物谱的多肽模式。为搜索相关标志物，仅选取那些重复出现的多肽，它们在其中至少一组中以相关数目能被发现，此处超过40％。随后，这些多肽被认为能用于区分“健康”和“患病”类型。其中考虑组间的一致性发展。多肽模式的变化部分是由于基础疾病糖尿病并因而在所有糖尿病患者中一致被发现，部分是由于原发性/继发性肾病或甚至是其原因。因此这些多肽可以用作诊断糖尿病或糖尿病肾病的标志物。随后在受试患者样品中搜索其中存在的多肽，它们的存在和缺失被用于诊断，如图2f所示。下表总结了在识别糖尿病肾病范围内被发现的特别相关的标志多肽。此处所述多肽可用于在早期阶段识别疾病，并可以单个、部分组合或完全组合使用。列表中包含380种多肽，这些多肽用毛细管电泳中的质量和保留时间定义。1到157的连续编号代表用于诊断″糖尿病″的标志多肽。158到380的连续编号包括用于诊断″肾脏损伤″而使用的标志多肽。在这两组中多肽是这样分类，首先根据是“阳性”还是“阴性”多肽的标准，所谓“阳性”多肽即在疾病情况下增加的多肽，随后，根据质量对多肽进行升序排列。在下表中各列具有以下含义 在本专利技术的一个优选实施方案中，根据本专利技术的装置或根据本专利技术的方法的另外的特征在于，通过描述它们的相关质量和在毛细管电泳中的相关保留时间确定所述多肽，这可以在毛细管电泳偶本文档来自技高网...

【技术保护点】
定量评价体液样品所含多肽并与数据库中保存的参考值进行比较的装置，其特征在于所述参考值作为与状况相关的多肽的数据记录而被存储，其中分别包含与健康和疾病对象样品中病理状况相关的多肽出现和／或浓度概率的至少一些信息。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：哈拉尔德米沙克，斯特凡维特克，托尔斯滕凯泽，
申请(专利权)人：马赛奎斯诊断和治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]