一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种复合酶解‑发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)、将破壁松花粉与水混合，使用纤维素酶和果胶酶进行酶解处理；(2)、进行发酵环境调节，并灭菌；(3)、接种菌种，发酵5‑7天；(4)、将步骤(3)获得的发酵液分离，得上清液与沉淀；(5)、将步骤(4)获得的沉淀进行热回流提取，分离得上清液；(6)、将步骤(4)与步骤(5)获得的上清液合并，浓缩干燥得发酵松花粉提取物。本发明专利技术的工艺能显著提高发酵松花粉提取物的产率、解决松花粉制品的致敏问题、提高其抗氧化效果。

【技术实现步骤摘要】
一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法。
技术介绍
现有发酵松花粉的方法通常是将松花粉破碎后直接在发酵罐内发酵，比如公开号为CN110037271A，名称为“一种发酵松花粉的制备方法”、公开号为CN109588598A“一种花粉的双歧杆菌发酵方法及其发酵产物的应用”、公开号为CN103141732A“一种利用益生菌进行松花粉发酵的新工艺”、公开号为CN109806190A“一种松花粉的发酵提取工艺”、公开号为CN104938965B“用凝结芽孢杆菌发酵的方法及其发酵产物和应用”等的中国专利申请。但在实际生产中，经常遇到由于松花粉破壁后易氧化而贮存时间较短的问题，或者因为有的人消化松花粉较困难而利用甚少的问题，或者因为过敏而无法食用松花粉产品的问题，其产品不能令一部分人满意。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术存在的不足，提供一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法，有效提高了松花粉提取物的提取率，且有效解决了松花粉或松花粉提取物过敏的问题；此外，本专利技术方法还有效提高了松花粉提取物的抗氧化活性，并有利于黄酮、皂苷的富集。具体技术方案如下：一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)将破壁松花粉与水混合，使用纤维素酶和果胶酶进行酶解处理；(2)进行发酵环境调节，并灭菌；(3)接种菌种，发酵5-7天；(4)将步骤(3)获得的发酵液分离，得上清液与沉淀；(5)将步骤(4)获得的沉淀进行热回流提取，分离得上清液；(6)将步骤(4)与步骤(5)获得的上清液合并，浓缩干燥得发酵松花粉提取物。松花粉外层存在细胞壁，异常坚硬，耐酸、耐碱且抗生物分解，由于细胞壁的“保护”作用，无论是直接发酵还是物理方式破碎后发酵，都无法使松花粉内的多种化合物充分释放使之充分发酵，造成发酵产品效果不如预期。此外，松花粉中的多糖类物质异常丰富，单纯的发酵难以使其彻底脱敏。本专利技术在发酵前使用纤维素酶和果胶酶(具体为酸性纤维素酶和酸性果胶酶)对松花粉进行了酶解，解决了上述技术问题，提高了发酵松花粉提取物的得率，显著降低了发酵松花粉提取物的致敏性，且显著提高了发酵松花粉的抗氧化活性。此外，还降低了发酵液的黏度，有助于发酵效率的提升和产品的分离澄清。进一步，步骤(1)中，所述的纤维素酶为酸性纤维素酶，所述的果胶酶为酸性果胶酶。再进一步，步骤(1)的工作条件为：破壁松花粉与水的质量比为1：(7-12)，酸性纤维素酶与酸性果胶酶的用量均为以破壁松花粉质量计0.08wt％-0.15wt％，调节pH至4.8-5.0，50-55℃酶解1.5-3h。pH值的调节可通过盐酸或氢氧化钠实现。进一步，步骤(2)的工作条件为：酶解完毕后向酶解产物中加入葡萄糖、蛋白胨与乳清蛋白粉,调节pH至7.0-7.5，进行灭菌处理；其中，葡萄糖的用量为破壁松花粉质量的0.06-0.1倍,蛋白胨的用量为破壁松花粉质量的0.03-0.05倍，乳清蛋白粉的用量为破壁松花粉质量的0.01-0.025倍。其中，所述的灭菌优选为80℃以上高温灭菌。进一步，步骤(3)中接种的菌种为植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌。本专利技术在研发中将上述三种菌的混合与接种单一益生菌株进行对比。所述的单一益生菌株包括纳豆芽孢杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、啤酒酵母、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌。实验结果表明，在单位菌活相同的前提下，本专利技术的混合菌显著获得了更高的提取物得率和更好的脱敏效果。再进一步，步骤(3)的工作条件为：植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的接种量均为以破壁松花粉质量计3wt％-4wt％，搅拌均匀，35-37℃静置发酵5-7天，每8-24h搅拌一次,使物料混匀。上述发酵结束时，发酵液的pH值≤3.0，还原糖为0.25％-0.35％。进一步，步骤(5)中所述的热回流提取的条件为沸水回流提取20-40min。热回流中水的用量优选为破壁松花粉质量的7-12倍。进一步，所述的破壁松花粉为松花粉8000-12000rpm超微粉碎10-15min获得。上述超微粉碎无法将松花粉完全破壁。如完全通过物理方法破壁，其能耗非常高，成本昂贵。进一步，步骤(4)与步骤(5)中，所述的分离为离心分离。进一步，步骤(6)中所述的干燥为喷雾干燥；优选在喷雾干燥前进行减压浓缩。本专利技术的有益效果如下：(1)将松花粉用于发酵中，在较低的发酵温度下，有利于保留风味物质，经发酵的辅助作用，充分浸提出其风味及营养成分，获得目标产品营养和功能增加的效果。(2)将松花粉经热水浸泡后加入发酵罐，可缩短前发酵的周期，提高设备利用率，并有利于高效率的浸提出花粉中的有效成分。(3)松花粉经复合酶水解，由于发酵醪的营养更为丰富，发酵微生物的生长繁殖更加旺盛，既可以在较低的温度下发酵，又有利于发酵更为彻底。另一方面，由于发酵微生物的代谢作用，可以将一些呈结合态而较难溶解的成分游离及溶解于发酵醪。(4)实验结果表明，本专利技术的工艺能显著提高发酵松花粉提取物的产率、解决松花粉制品的致敏问题、提高其抗氧化效果。附图说明图1为实验3中DPPH自由基清除率对比图。具体实施方式以下结合实例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例中使用的酶制剂为：酸性纤维素酶(潍坊苏科汉生物工程有限公司)酶活15万u/g。酸性果胶酶(潍坊苏科汉生物工程有限公司)酶活4万u/g。实施例中使用的菌种均购买自齐鲁工业大学菌种库，经传代及种子液培养制备,最终用于实施方式的菌悬液的菌活为2*1010-3*1010CFU/g。菌种的传代及种子液培养制备方法如下。(1)菌种传代与保存：使用传代培养基，每个培养皿15mL，斜面(试管、茄瓶等)装液至倾斜后下液面刚好没过底端，上液面至瓶口三分之一处为佳。划线接种，37℃培养，24小时左右可见菌体生长。(2)菌种活化与复壮：使用传代培养基，37℃培养，由于活化培养慢于传代培养，一般24小时可见明显菌落。活化后的菌株用传代培养基进行复壮。一般2～3次传代后即可获得活力较旺盛的纯种菌株。(3)种子液(1L蓝盖瓶)培养：使用种子液体培养基，1L瓶每瓶装液0.9～1L，在超净台用接种环从固体传代培养基(平板、斜面)分别刮取植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌菌落，转接入种子培养瓶中。培养条件：37℃培养24小时左右。实施例1(1)松花粉9000rpm超微粉碎15min，得破壁松花粉，测得破壁率85％；将破壁松花粉投入发酵罐，按投入破壁松花本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将破壁松花粉与水混合，使用纤维素酶和果胶酶进行酶解处理；/n(2)进行发酵环境调节，并灭菌；/n(3)接种菌种，发酵5-7天；/n(4)将步骤(3)获得的发酵液分离，得上清液与沉淀；/n(5)将步骤(4)获得的沉淀进行热回流提取，分离得上清液；/n(6)将步骤(4)与步骤(5)获得的上清液合并，浓缩干燥得发酵松花粉提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种复合酶解-发酵偶联的发酵松花粉提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将破壁松花粉与水混合，使用纤维素酶和果胶酶进行酶解处理；
(2)进行发酵环境调节，并灭菌；
(3)接种菌种，发酵5-7天；
(4)将步骤(3)获得的发酵液分离，得上清液与沉淀；
(5)将步骤(4)获得的沉淀进行热回流提取，分离得上清液；
(6)将步骤(4)与步骤(5)获得的上清液合并，浓缩干燥得发酵松花粉提取物。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的纤维素酶为酸性纤维素酶，所述的果胶酶为酸性果胶酶。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的工作条件为：
破壁松花粉与水的质量比为1：(7-12)，酸性纤维素酶与酸性果胶酶的用量均为以破壁松花粉质量计0.08wt％-0.15wt％，调节pH至4.8-5.0，50-55℃酶解1.5-3h。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的工作条件为：
酶解完毕后向酶解产物中加入葡萄糖、蛋白胨与乳清蛋白粉,调节pH至7.0-7.5，进行灭菌处理；
其中，葡萄糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘其耸，衣洁菡，徐宏楠，
申请(专利权)人：烟台新时代健康产业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37