一种通过外周血循环肿瘤细胞检测肝细胞肝癌患者C-MET基因突变的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞C‑MET基因突变的试剂盒及检测方法，所述的试剂盒包括稀释液、脱色液、染色液A、染色液B、兔抗人C‑MET一抗、生物素标记的鼠抗兔二抗、0.1%Triton X‑100、0.3%H

【技术实现步骤摘要】
一种通过外周血循环肿瘤细胞检测肝细胞肝癌患者C-MET基因突变的方法
本专利技术提供了一种检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞C-MET基因突变的试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃、食道而居第三位；在部分地区的农村中居第二位，仅次于胃癌。我国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％，肝癌平均患病年龄44岁。肝癌病理分型为肝细胞癌、胆管细胞癌、混合型肝癌，其中肝细胞癌占70-80%，其恶性程度高，发展迅速，若治疗不及时或治疗方案选择不当，平均生存时间为半年左右。肝细胞癌早期无症状，一旦出现明显症状，约有1/3已属晚期，患者会感到肝区胀痛，尤其饭后为甚，厌食，肝大，右上腹肿块，不明原因的消瘦、腹胀、腹泻、间断性发热、乏力、食欲减退等，严重影响人类寿命及生活质量。随着分子生物学的发展，中晚期肝细胞癌的免疫治疗逐渐兴起，初步的临床试验也取得了较好的疗效，目前多项III期临床试验正在开展，C-MET(cellular-mesenchymalto本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞C-MET基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液50mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、兔抗人C-MET一抗100μL、生物素标记的鼠抗兔二抗100μL、0.1% Triton X-100 100μL、0.3% H

【技术特征摘要】
1.一种检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞C-MET基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液50mL、脱色液1mL、染色液A0.5mL、染色液B1mL、兔抗人C-MET一抗100μL、生物素标记的鼠抗兔二抗100μL、0.1%TritonX-100100μL、0.3%H2O2100μL、试剂A1mL。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液为1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.3%硫酸铁+0.5%蔗糖。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按体积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂A为乙醇和多聚甲醛按照体积比3：1组成。


6.一种利用权利要求1-5任一项所述的试剂盒非诊断目的检测肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发肝细胞癌患者外周血：采集无法获取组织标本的晚期或复发肝细胞癌患者肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血CTC：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器中，使其依靠重力自然过滤；
（4）过滤结束...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琛琛，洪瑛，侯景阳，李文涛，
申请(专利权)人：山东凯歌智能机器有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37