肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E‑Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法。试剂盒包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A 0.5mL，染色液B 1mL，200μl甲醇、200μl 2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E‑Cadherin组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；本发明专利技术提供的检测方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发肾细胞癌患者E‑Cadherin表达情况。该技术属于微创，并能够实时检测。

【技术实现步骤摘要】
肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法。
技术介绍
肾细胞癌(renalcellcarcinoma，RCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率约占全身恶性肿瘤的2-3％，近几十年其发病呈上升趋势。根治性手术是治疗肾细胞癌的有效手段，但约有20％～30％的肾细胞癌患者就诊时已出现远处转移。即使经历肾细胞癌根治手术，仍有20％～40％的患者会出现复发、转移。既往研究认为，上皮间质转化（EMT）在肾细胞癌复发转移过程中发挥了重要作用，因此监测EMT可用于肾细胞癌的疗效判断及预后评估。循环肿瘤细胞（Circulatingtumorcell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个体化治疗具有重要的临本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A 0.5mL，染色液B 1mL，200μl 甲醇、200μl 2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；/n一抗混悬液中小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin分别按1:100、1:400和1:500稀释，总体积为100μL；/n二抗混悬液中荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大...

【技术特征摘要】
1.一种检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A0.5mL，染色液B1mL，200μl甲醇、200μl2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；
一抗混悬液中小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin分别按1:100、1:400和1:500稀释，总体积为100μL；
二抗混悬液中荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔按1:500稀释。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液是由1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.1%海藻糖+0.2%月桂醇聚氧乙烯醚组成。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按容积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.一种权利要求1-4任一项所述试剂盒非诊断目的检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的方法，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发肾细胞癌患者外周血：采集无法获取组织标本的晚期或复发肾细胞癌患者肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤...

【专利技术属性】
技术研发人员：李琛琛，洪英，侯景阳，李文涛，
申请(专利权)人：山东凯歌智能机器有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37