一种通过外周血循环肿瘤细胞检测肾细胞癌患者E-Cadherin基因突变的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测E‑Cadherin基因突变的新方法，尤其是通过外周血检测无法获取组织标本的晚期或复发肾细胞癌患者E‑Cadherin基因突变的方法。该试剂盒包括稀释液、脱色液、染色液A、染色液B、E‑Cadherin（小鼠）一抗、连接有辣根过氧化物酶的兔抗鼠抗体、0.1% Triton X‑100、0.3% H

【技术实现步骤摘要】
一种通过外周血循环肿瘤细胞检测肾细胞癌患者E-Cadherin基因突变的方法
本专利技术涉及一种检测E-Cadherin基因突变的新方法，尤其是通过外周血检测无法获取组织标本的晚期或复发肾细胞癌患者E-Cadherin基因突变的方法。
技术介绍
肾细胞癌(renalcellcarcinoma，RCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率约占全身恶性肿瘤的2-3％，近几十年其发病呈上升趋势。根治性手术是治疗肾细胞癌的有效手段，但约有20％～30％的肾细胞癌患者就诊时已出现远处转移。即使经历肾细胞癌根治手术，仍有20％～40％的患者会出现复发、转移。既往研究认为，上皮间质转化（EMT）在肾细胞癌复发转移过程中发挥了重要作用，因此监测EMT可用于肾细胞癌的疗效判断及预后评估。循环肿瘤细胞（Circulatingtumorcell，CTC）是从实体肿瘤脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞，自1989年被发现以来，目前已有多种方法用于外周血循环肿瘤细胞的检测。近期研究表明，其检测对于评估肿瘤患者尤其是晚期肿瘤患者的预后以及选择合适的个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、E-Cadherin（小鼠）一抗100μL、连接有辣根过氧化物酶的兔抗鼠抗体 100μL、0.1% Triton X-100 100μL、0.3%H

【技术特征摘要】
1.一种检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL、脱色液1mL、染色液A0.5mL、染色液B1mL、E-Cadherin（小鼠）一抗100μL、连接有辣根过氧化物酶的兔抗鼠抗体100μL、0.1%TritonX-100100μL、0.3%H2O2100μL、6×PBS缓冲液60mL。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液是由1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.1%海藻糖+0.2%月桂醇聚氧乙烯醚组成。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按容积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.一种利用权利要求1-4任一项所述的试剂盒非诊断目的检测肾细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发肾细胞癌患者外周血中的CTC：采集无法获取组织标本的晚期或复发肾细胞癌患外周血：肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤细胞装置过滤外周血样，分离获得外周血CTC：将预处理的外周血样加入到膜过滤分离肿瘤细胞装置的血样容器中，使其依靠重力自然过滤；
（4）过滤结束后，从膜过滤分离肿瘤细胞装置中取...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文涛，李琛琛，洪英，侯景阳，
申请(专利权)人：山东凯歌智能机器有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37