通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者CEA基因表达的免疫荧光试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术提供一种结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，属于分子生物学领域，具体的，试剂盒主要包括：山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗CEA基因组成的一抗混悬液，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液。检测方法主要包括采集外周血，处理外周血，过滤富集循环肿瘤细胞，免疫荧光方法检测循环肿瘤细胞CEA基因表达情况。

【技术实现步骤摘要】
通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者CEA基因表达的免疫荧光试剂盒及检测方法
本专利技术提供了通过外周血循环肿瘤细胞检测结直肠癌患者CEA基因表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，2018年死亡率居恶性肿瘤第四位。在美国，结直肠癌是第三大最常见的恶性肿瘤。在国内，2018年中国全年流行病学数据：结直肠癌的发病率和死亡率均为第5位，年新发病例37.63万，25％被确诊时已发生转移。结直肠癌早期多无症状，出现症状时多为中晚期且有转移。尽管外科手术和化疗方案不断革新，进展期结直肠癌患者的生存率依旧很差。由于结直肠癌尚缺乏较好的预防方法，所以改善结直肠癌预后并提高生存率的最有效的措施就是早期诊断并治疗结直肠早期癌及癌前病变。CEA(carcinoembryonicantigen)是指癌胚抗原，是一种酸性糖蛋白，45％为蛋白质，含有岩藻糖、甘露糖、半乳糖及唾液酸等成分，分子量为150-300KDa，其编码基因位19号染色体。既往研究表明，结肠癌、胃癌、胰腺癌等消化道肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因表达的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A 0.5mL，染色液B 1mL，200μl 甲醇、200μl 2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗CEA基因组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；/n一抗混悬液中小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗CEA基因分别按1:100、1:400和1:500稀释，总体积为100μL；/n二抗混悬液中荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔按1:...

【技术特征摘要】
1.一种检测结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因表达的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A0.5mL，染色液B1mL，200μl甲醇、200μl2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗CEA基因组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；
一抗混悬液中小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗CEA基因分别按1:100、1:400和1:500稀释，总体积为100μL；
二抗混悬液中荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔按1:500稀释。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液是由1mmol/LEDTA+1mmol月硅酸盐+0.1%BSA+0.2%泊洛沙姆组成。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按体积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.一种利用权利要求1-4任一项所述的试剂盒非诊断目的检测结直肠癌患者外周血循环肿瘤细胞CEA基因表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发结直肠癌患者外周血：采集无法获取组织标本的晚期或复发结直肠癌患者肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿瘤细胞装置...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文涛，李琛琛，洪瑛，侯景阳，
申请(专利权)人：山东凯歌智能机器有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37