一种新冠病毒（2019-nCOV）的异源抗体及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种针对2019‑nCOV(SARS‑CoV‑2)病毒的非人动物源抗血清和/或非人动物源免疫球蛋白，旨在能够用于新型冠状病毒肺炎的治疗和预防。

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒(2019-nCOV)的异源抗体及其制备方法
本专利技术涉及抗体及其抗体的制备方法，进一步涉及新冠病毒(2019-nCOV)的异源抗体及其制备方法。
技术介绍
2019-nCOV(SARS-CoV-2)是又一种新型冠状病毒，引发新型冠状病毒肺炎(NovelcoronaviruspneumoniaNCP)，这种肺炎患者中，部分会在1周之后病情加重，可能会进展成为如下一些危及生命的情况，如急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、代谢性酸中毒、出凝血功能障碍、肾衰竭或全身其他器官衰竭等。目前还没有特效的治疗药物和疫苗研发成功，康复期患者的特免血浆制品目前成为治疗新冠病毒感染最为有效的方法。然而这是一种不得已的应急治疗方法，一些根本性的问题制约着这种方法的普遍使用，首先，血清/血浆来自于人体，用它们作为治疗手段，存在疾病交叉感染的风险，尤其是一些血液传播的病毒如乙肝病毒、艾滋病毒的传播等，“新型冠状病毒肺炎康复血浆倡议书”由中国生物技术股份有限公司(CNBG)和武汉血液中心共同发出，其中提到，“输注康复者恢复期血浆或将其制备成特异性免疫球蛋白”，此处所指是以康复者的血浆/血清作为原料，经过病原灭活后的血液制品，相比于直接输注血清，这样的制剂无疑是更为安全的。然而也仍然存在感染其他疾病的风险。即使是经过分离纯化的“人免疫球蛋白”，说明书中也有相应的警示语：因原料来自人血，虽然对原料血浆进行了相关病原体的筛查，并在生产工艺中加入了去除和灭活病毒的措施，但仍存在传播某些已知和未知病原体的潜在风险。另一个主要原因，是能够使用的治疗材料太少：一是符合要求的血液提供体者数量有限，二是不同提供者血液中抗体浓度有限。这些因素的存在根本性的阻碍了血清疗法的大范围应用。因此，对于大规模生产高效价、高亲和性的安全免疫血清和/或免疫球蛋白和/或多克隆抗体或其片段的适合方法存在巨大的临床需求。从抗体产量角度讲，非人大型动物源是期望的。异源血清是解决治疗材料不足的有效手段，其中马血清是常用的异源血清之一。在1890年的时候，德国科学家埃尔利希(PaulErlich)采用马血清制备白喉抗毒素，再加上他开发出了纯化方法，让白喉抗毒素的质量更高，也大大提高了产量，为更多白喉患病儿童提供了治疗。在2003年SARS期间，一些学者再次提出了马血清的使用技术，如田光等发表的题为“马抗SARS-CoV免疫球蛋白制备的研究”的文章称：用纯化灭活的SARS-CoV抗原免疫马匹，采集血浆加入S/D灭活/去除病毒，用硫酸铵盐析沉淀提取抗SARS-CoVLgG，再经胃酶切，柱超滤等工艺制备马抗SARS-CoV免疫球蛋白。研制的马抗SARS-CoV免疫球蛋白制品中和抗体效价达1∶6400，F(ab’)2纯度在90％以上。赵永坤等学者发表了“马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白的制备及其治疗效果评价”。中国专利CN1449832A“马抗严重急性呼吸道综合症(SARS)血清”，公开了一种由SARS灭活病毒免疫马匹获得免疫血浆，经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制得的液体或冻干免疫球蛋白制剂。中国专利ZL200310113790.6(一种抗SARS-CoV免疫球蛋白抗体)公开了一种马抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab’)2抗体。涉及异源血清抗体尤其是马血清抗体及生产工艺的研究不少，但是鲜有成熟产品上市。施虐多年的艾滋病毒、埃博拉病毒等造成的危害依然存在，2019-nCOV(SARS-CoV-2)又在全球几十个国家引发感染。特定的抗病毒药物及疫苗的研发又存在着极大的不确定性和长期性，异源血清抗体的再次研发具有其更为迫切的需要，传统的抗血清生产工艺制备的马血清，仍存在IgG或抗体F(ab’)2纯度低、杂蛋白含量高，中和抗体效价低，临床副作用大等不足。本专利技术针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)抗原，进行非人动物的免疫，获得纯度和效价显著提高的中和抗体IgG和抗体F(ab’)2。
技术实现思路
一方面，本专利技术的目的在于提供一种针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的非人动物源抗血清和/或非人动物源免疫球蛋白，旨在能够用于新型冠状病毒肺炎的治疗和预防。这方面的一个实施方式中，非人动物源选白兔、猪、绵羊、山羊、马、驴、牛，优选实施方式中，非人动物源选择马，进一步优选4-7岁龄左右的马匹。在另一个实施方式中，针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒是指2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒抗原，包括灭活病毒抗原、病毒蛋白抗原、病毒核酸抗原。具体包括灭活疫苗、基因工程重组的亚单位疫苗、腺病毒载体疫苗、减毒流感病毒载体疫苗、核酸疫苗如mRNA疫苗等。进一步，本专利技术的目的在于提供一种针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的非人动物源IgG中和抗体，用于新型冠状病毒肺炎的治疗和预防。在2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒感染的痊愈患者中，已经获得了针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的抗体产生，并已被用于2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒感染的体外诊断中。针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒颗粒的所有蛋白都能产生相应抗体，但是目前的有限研究发现针对该病毒颗粒的S蛋白的抗体才具有中和功能，中和抗体既可以中和游离的病毒颗粒，发挥抗病毒作用，又可以作用于被病毒感染的细胞，发挥保护性作用进而使感染得到控制。进一步，本专利技术的目的在于提供一种针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的非人动物源IgG中和抗体的F(ab’)2，用于新型冠状病毒肺炎的治疗和预防。将IgG用酶进行消化，获得F(ab’)2片段，去除Fc片段。F(ab’)2片段是抗体治疗的活性部位，由于不含Fc片段，降低了与细胞Fc受体的结合，减少了发生非特异性排斥反应的机会。且F(ab’)2片段与IgG相比，相对分子质量较小，组织穿透力较强，提高了临床被动免疫的效率。第二方面，本专利技术的目的在于提供一种制备针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的非人动物源抗血清的方法，该方法通过免疫完全健康、纯净的非人动物获得免疫血清。在这方面的一个实施例中，为了控制免疫动物自体血液中其他物质的干扰，尤其是一些其他微生物如病毒、细菌等以及一些其他抗体或残留药物等，免疫动物选择来源于健康、不曾患过任何传染性疾病或注射过任何疫苗和药物的马匹，优选4-7岁龄左右的马匹。在另一个实施例中，获得的免疫血清通过特定的灭活和纯化方法进一步去除可能的各种病原体以及杂质蛋白。进一步，对非人动物源免疫血清经进一步分离纯化获得高纯度和高效价的中和抗体IgG的方法。在另一个实施例中，通过进一步纯化的手段获得高纯度和高效价的中和抗体IgG。更进一步，采用消化酶对中和抗体IgG进行酶反应，获得活性片段F(ab’)2的方法。第三方面，本专利技术提供包含如上所述非人动物源的免疫血清和/或免疫球蛋白和/或抗体和/或其片段的制剂和/或药物组合物。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的非人动物源抗血清和/或非人动物源免疫球蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种针对2019-nCOV(SARS-CoV-2)病毒的非人动物源抗血清和/或非人动物源免疫球蛋白。


2.如权利要求1所述的抗血清或免疫球蛋白，其中所针对的抗原包括灭活病毒抗原、病毒蛋白抗原、病毒核酸抗原、灭活疫苗、基因工程重组的亚单位疫苗、腺病毒载体疫苗、减毒流感病毒载体疫苗、核酸疫苗如mRNA疫苗。


3.如权利要求1所述的抗血清或免疫球蛋白，其进一步纯化后获得非人动物源IgG中和抗体。


4.如权利要求3所述的抗血清或免疫球蛋白，非人动物源IgG经酶切后进一步纯化获得中和抗体的F(ab’)2片段。


5.一种制备针对2019-nCOV(SARS...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨培豫，李润，耿纯梅，张洪军，张玉新，张子佳，王晓辉，谷孝玉，李艳玲，黄韬，汪新明，裴亚芳，
申请(专利权)人：唐山怡安生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13