一种高产2,5-二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种高产2,5‑二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明专利技术应用基因工程方法，在一种高产L‑苏氨酸的大肠杆菌K‑12中过表达L‑苏氨酸脱氢酶TDH并异源表达来源于乳球菌属微生物的NADH氧化酶NoxE和来源于链球菌属微生物的氨基丙酮氧化酶AAO

【技术实现步骤摘要】
一种高产2,5-二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌及其构建方法
本专利技术涉及一种高产2,5-二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌及其构建方法，属于基因工程

技术介绍
2,5-二甲基吡嗪，呈刺鼻的炒花生香气和巧克力、奶油气味，是一种重要的香味化合物和药物中间体。其存在于咖啡、花生等50多种天然食品中。作为食品香料时，只添加1-2ppm，就可起到明显的增香作用，是国标GB2760-86规定为允许使用的香精。同时，其还是合成第二代磺脲类降血糖药格列吡嗪、新一代长效降血脂药阿昔莫司(Acipimox)以及治疗结核病的有效药物5-甲基吡嗪-2-羧酸甲酯(PAE)等一系列药物的原料或药物中间体。因此，摸索新的2,5-二甲基吡嗪经济高效的生产方法无疑是非常重要的。2,5-二甲基吡嗪的生产方法主要有化学合成法，添加前体物质发酵法，直接发酵法等。原本由于2,5-二甲基吡嗪的生物合成机制未完全明晰，难以通过人工定向手段选育可用于大规模生产的高产菌株，使得目前化学合成法仍是2,5-二甲基吡嗪的主要生产方法。但近年来，随着其在部分微生物中代谢途径的完全解析，人工定向本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产2,5-二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述的重组菌以大肠杆菌K-12为宿主，过表达了L-苏氨酸脱氢酶，并异源表达了NADH氧化酶和氨基丙酮氧化酶，同时敲除了重组菌的2-氨基-3-酮丁酸CoA连接酶基因kbl和伯胺氧化酶基因tynA。/n

【技术特征摘要】
1.一种高产2,5-二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述的重组菌以大肠杆菌K-12为宿主，过表达了L-苏氨酸脱氢酶，并异源表达了NADH氧化酶和氨基丙酮氧化酶，同时敲除了重组菌的2-氨基-3-酮丁酸CoA连接酶基因kbl和伯胺氧化酶基因tynA。


2.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述的大肠杆菌K-12包括E.coliTHR、E.coliTHR1、E.coliTHR2、E.coliTHR3、E.coliTHR4、E.coliTHR5或E.coliTHR6。


3.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述的L-苏氨酸脱氢酶来源于大肠杆菌K-12，为以下任一：
(1)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的L-苏氨酸脱氢酶；
(2)具有L-苏氨酸脱氢酶活性的同工酶。


4.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述NADH氧化酶来源于乳球菌属微生物，为以下任一：
(1)氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的NADH氧化酶；
(2)具有NADH氧化酶活性的同工酶。


5.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述的氨基丙酮氧化酶来源于链球菌属微生物，为以下任一：
(1)氨基酸序列如SEQIDNO.3所示的氨基丙酮氧化酶；
(2)具有氨基丙酮氧化酶活性的同工酶。


6.根据权利要求1所述的大肠杆菌重组菌，其特征在于，所述的2-氨基-3-酮丁酸CoA连接酶基因kbl的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。


7.一种权利要求1～6任一项所述的重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)2-氨基-3-酮丁...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建中，于海波，张伟国，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32