一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法技术

本发明专利技术公开了一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法，属于遗传工程领域。本发明专利技术通过将N‑乙酰神经氨酸合酶和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶同时整合到基因组上表达，并选取3个不同强度启动子对NeuB和NanA基因进行表达量优化，最终产量在摇瓶中达到了8.3g/L，为进一步提高枯草芽孢杆菌N‑乙酰神经氨酸产量奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法
本专利技术涉及一种双途径复合产神经氨酸枯草芽孢杆菌及构建方法，属于遗传工程领域。
技术介绍
N-乙酰神经氨酸是一种功能性单糖，广泛存在于微生物以及哺乳动物体内。在人体中，N-乙酰神经氨酸参与细胞识别、信号转导等多个生理过程。因此，N-乙酰神经氨酸被广泛应用于增强婴儿免疫力，促进婴儿大脑发育。目前，N-乙酰神经氨酸主要采取天然产物提取法(鸡蛋、燕窝等)，存在其他产物难以分离，且成本较高；另外可以通过全细胞转化的方法获得，但是需要成本较高的底物乙酰氨基葡萄糖和丙酮酸为底物，由于底物转化率较低，导致神经氨酸生产成本较高。枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是一种被广泛用作食品酶制剂及重要营养化学品的生产宿主，其产品被FDA认证为“generallyregardedassafe”(GRAS)安全级别。因此以枯草芽孢杆菌为宿主，通过代谢工程改造，以葡萄糖等廉价碳源为底物，高效从头合成神经氨酸是一种有效的策略。目前在枯草中构建的N-乙酰神经氨酸代谢途径主要通过N-乙酰氨基葡萄糖为前本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，通过不同强度的启动子整合表达N-乙酰神经氨酸合酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶，所述启动子的核苷酸序列选自SEQ ID NO.9～11。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，通过不同强度的启动子整合表达N-乙酰神经氨酸合酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶，所述启动子的核苷酸序列选自SEQIDNO.9～11。


2.根据权利要求1所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述N-乙酰神经氨酸合酶来源于脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)。


3.根据权利要求1或2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，还强化表达氨基葡萄糖-6-磷酸-N-乙酰基转移酶和N-乙酰氨基葡萄糖异构酶。


4.根据权利要求3所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌是以SEQIDNO.9所示的启动子调控氨基葡萄糖-6-磷酸-N-乙酰基转移酶的表达，并以SEQIDNO.10所示的启动子表达N-乙酰氨基葡萄糖异构酶。


5.根据权利要求3所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌中氨基葡萄糖-6-磷酸-N-乙酰基转移酶、N-乙酰神经氨酸合酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶分别通过SEQIDNO.9所示的启动子调控表达，N-乙酰氨基葡萄糖异构酶通过SEQIDNO.10所示的启动子调控表达。


6.根据权利要求1～5任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延峰，刘龙，张晓龙，堵国成，李江华，陈坚，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32