减少为了生产氨基酸或氨基酸衍生产物的亚胺/烯胺的积累制造技术

提供了微生物，该微生物被遗传修饰以过表达亚胺/烯胺脱氨酶以增强该微生物的赖氨酸和赖氨酸衍生物的生产。还提供了产生这种微生物的方法，以及使用该经遗传修饰的微生物生产赖氨酸和赖氨酸衍生物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】减少为了生产氨基酸或氨基酸衍生产物的亚胺/烯胺的积累
技术介绍
氨基酸(诸如赖氨酸)和氨基酸衍生产物(诸如尸胺)的过度生产通常需要对宿主细胞的代谢进行重塑以增加含碳和含氮化合物向所需产物的通量。然而，改变代谢途径的通量可导致通常不积累在细胞内的中间体的积累。这样的代谢中间体可以是酶反应的最终产物或从酶的催化位点泄漏的酶反应的中间体。积累的代谢中间体对细胞也可能是有毒的，或诱导将中间体转化成对细胞有毒的化合物的其他途径的活性(Danchin,MicrobialBiotechnology10:57-72,2017)。亚胺/烯胺中间体经常在导致反应性氨基酸衍生物(例如氨基丙烯酸酯或亚氨基丙酸)的形成的转氨、外消旋或脱氨反应期间形成。亚胺/烯胺形成有时涉及辅因子磷酸吡哆醛(PLP)。已知反应性亚胺/烯胺引起细胞损伤并且在氨基酸(诸如赖氨酸)和氨基酸衍生产物(诸如尸胺)的过度生产期间可能积累在细胞内。例如，大肠杆菌(Escherichiacoli)中赖氨酸或尸胺的过度生产可涉及以导致产生亚胺/烯胺化合物的方式对宿主代谢重塑。赖氨酸或尸胺的过度生产涉及编码以下一种或多种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含外源多核苷酸的经遗传修饰的宿主细胞，所述外源多核苷酸包含编码亚胺/烯胺脱氨酶多肽的核酸，相对于未修饰成表达所述外源多核苷酸的相对应的宿主细胞，所述经遗传修饰的宿主细胞增加了氨基酸或氨基酸衍生物的量；并且与野生型宿主细胞相比，所述经遗传修饰的宿主细胞具有增加所述氨基酸或所述氨基酸衍生物生产的至少一种另外的遗传修饰。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含外源多核苷酸的经遗传修饰的宿主细胞，所述外源多核苷酸包含编码亚胺/烯胺脱氨酶多肽的核酸，相对于未修饰成表达所述外源多核苷酸的相对应的宿主细胞，所述经遗传修饰的宿主细胞增加了氨基酸或氨基酸衍生物的量；并且与野生型宿主细胞相比，所述经遗传修饰的宿主细胞具有增加所述氨基酸或所述氨基酸衍生物生产的至少一种另外的遗传修饰。


2.根据权利要求1所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述氨基酸是赖氨酸并且所述氨基酸衍生物是尸胺。


3.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽是YoaB多肽。


4.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽与SEQIDNO:10的氨基酸序列具有至少80％的同一性，或至少90％的同一性。


5.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽是YjgH多肽。


6.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽与SEQIDNO:12的氨基酸序列具有至少80％的同一性，或至少90％的同一性。


7.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:12的氨基酸序列。


8.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽对所述宿主细胞是异源的。


9.根据权利要求1或2所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述亚胺/烯胺脱氨酶多肽包含对所述宿主细胞是天然的氨基酸序列。


10.根据权利要求1-9中任一项所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述外源多核苷酸包含在引入到所述细胞中的表达载体中，其中所述表达载体包含可操作地连接到启动子的所述外源多核苷酸。


11.根据权利要求1-9中任一项所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述外源多核苷酸被整合到宿主染色体中。


12.根据权利要求1-11中任一项所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞过表达外源赖氨酸脱羧酶多肽。


13.根据权利要求12所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述外源赖氨酸脱羧酶多肽是CadA多肽。


14.根据权利要求1-13中任一项所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞过表达一种或多种外源赖氨酸生物合成多肽。


15.根据权利要求14所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述外源赖氨酸生物合成多肽是天冬氨酸激酶、二氢吡啶二羧酸合酶、二氨基庚二酸脱羧酶、天冬氨酸半醛脱氢酶、二氢吡啶甲酸还原酶或天冬氨酸转氨酶。


16.根据权利要求15所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述天冬氨酸激酶、二氢吡啶二羧酸合酶、二氨基庚二酸脱羧酶、天冬氨酸半醛脱氢酶、二氢吡啶甲酸还原酶或天冬氨酸转氨酶是LysC、DapA、LysA、Asd、DapB或AspC多肽。


17.根据权利要求1-11中任一项所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞过表达外源CadA、LysC、DapA、LysA、Asd、DapB和AspC多肽。


18.根据权利要求1-17中任一项所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞属于埃希氏菌属(Escherichia)、哈夫尼菌属(Hafnia)或棒状杆菌属(Corynebacterium)。


19.根据权利要求18所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌(Escherichiacoli)、蜂房哈夫尼菌(Hafniaalvei)或谷氨酸棒状杆菌(Corynebacteriumglutamicum)。


20.根据权利要求19所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌。


21.一种工程化宿主细胞以增加氨基酸或氨基酸衍生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：周豪宏，陈玲，刘修才，
申请(专利权)人：上海凯赛生物技术股份有限公司，CIBT美国公司，
类型：发明
国别省市：上海;31